旦 曲， 羅桑次珍， 澤仁曲措， 馬超超， 劉治娟

（1.西藏自治區(qū)人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，西藏 拉薩 850000；2.北京協(xié)和醫(yī)院檢驗(yàn)科，北京100730）

尿微量白蛋白（microalbumin，mAlb）在腎臟早期損傷的診斷和治療中有重要的參考價(jià)值[1]。尿白蛋白/肌酐比值（albumin to creatinine ratio，ACR）已成為慢性腎臟疾病篩查和分期的重要指標(biāo)之一[2-3]。目前，尿mAlb的檢測(cè)方法主要有免疫散射比濁法、免疫透射比濁法和放射免疫分析法、時(shí)間分辨免疫分析法等。免疫透射比濁法與免疫散射比濁法有較高的一致性[4]，但由于方法學(xué)的原因，免疫透射比濁法難以避免產(chǎn)生鉤狀效應(yīng)。雖然已有樣本預(yù)稀釋和抗原過(guò)量檢查、反應(yīng)特征曲線(xiàn)設(shè)置和報(bào)警、計(jì)算反應(yīng)完成率等新技術(shù)[5-8]可用于避免鉤狀效應(yīng)，但不同儀器和試劑的參數(shù)設(shè)置和功能不同，上述新技術(shù)不具有普遍適用性。有些開(kāi)放系統(tǒng)甚至無(wú)任何鉤狀效應(yīng)的預(yù)防措施。本研究擬通過(guò)尿總蛋白（total protien，TP）與尿mAlb的聯(lián)合檢測(cè)，構(gòu)建線(xiàn)性回歸模型，在結(jié)果審核時(shí)以該方程為驗(yàn)證規(guī)則，以避免免疫透射比濁法檢測(cè)尿mAlb時(shí)的鉤狀效應(yīng)。

1 材料和方法

1.1 研究對(duì)象

選取2018年1—12月西藏自治區(qū)人民醫(yī)院同時(shí)檢測(cè)尿mAlb和尿TP的患者1 711例，其中男943例、女768例，年齡18～78歲。另收集檢測(cè)尿mAlb時(shí)產(chǎn)生鉤狀效應(yīng)的陰性或弱陽(yáng)性尿液樣本35份。

1.2 試劑與儀器

尿mAlb試劑盒（免疫透射比濁法）和配套校準(zhǔn)品購(gòu)自四川邁克生物科技股份有限公司。腦脊液/尿TP試劑盒（鄰苯三酚紅鉬比色法）7170瓶型和配套校準(zhǔn)品購(gòu)自四川新健康成生物股份有限公司。檢測(cè)儀器為ARCHITECT C16000全自動(dòng)生化分析儀（美國(guó)雅培公司）。尿液化學(xué)質(zhì)控品購(gòu)自美國(guó)伯樂(lè)公司（貨號(hào)為397、398，批號(hào)為68521、68522，有效期至2019年12月31日）。本實(shí)驗(yàn)室2018年度尿mAlb中、高水平質(zhì)控品的室內(nèi)變異系數(shù)（coefficient of variation，CV）分別為4.83%、4.43%，尿TP中、高水平質(zhì)控品的室內(nèi)CV分別為3.19%和2.05%，2018年國(guó)家衛(wèi)生健康委臨床檢驗(yàn)中心室間質(zhì)量評(píng)價(jià)成績(jī)合格。

1.3 方法

收集所有對(duì)象的晨尿，盛集于潔凈的容器內(nèi)，30 min內(nèi)完成檢測(cè)。渾濁尿液采用1 200×g離心10 min，取上清液進(jìn)行檢測(cè)。排除影響尿mAlb和尿TP檢測(cè)結(jié)果的非病理性因素（各種因素引起的尿液污染）。

以尿TP為因變量（Y），尿mAlb為自變量（X），建立線(xiàn)性回歸方程。將發(fā)生鉤狀效應(yīng)的35份樣本的尿mAlb檢測(cè)值（記為尿mAlb鉤狀）代入線(xiàn)性回歸方程，計(jì)算得到尿TP值（記為尿TP鉤狀），隨后將尿液樣本稀釋并檢測(cè)尿mAlb，將檢測(cè)結(jié)果記為尿mAlb稀釋?zhuān)敕匠毯笥?jì)算尿TP值（記為尿TP稀釋?zhuān)?，與尿TP實(shí)測(cè)值（尿TP實(shí)測(cè)）進(jìn)行比較。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用Excel 2010軟件及SPSS 25.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。采用Kolmogorov-Smirnov檢驗(yàn)進(jìn)行正態(tài)性檢驗(yàn)。尿TP結(jié)果呈偏態(tài)分布，經(jīng)對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)換后呈正態(tài)分布。采用Spearman相關(guān)分析評(píng)估尿mAlb與尿TP的相關(guān)性。以尿mAlb檢測(cè)值為X，尿TP檢測(cè)值為Y，繪制散點(diǎn)圖，建立線(xiàn)性回歸方程。不同方法得出的尿TP結(jié)果之間的比較采用Dunni檢驗(yàn)。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 尿TP與尿mAlb的相關(guān)性及線(xiàn)性回歸方程

Spearman相關(guān)分析結(jié)果顯示，尿TP與尿mAlb呈正相關(guān)（r=0.880，P=0.000）。以尿TP為因變量（Y），尿mAlb為自變量（X），建立線(xiàn)性回歸方程：Y=116.361+1.245X（r2=0.921，P=0.000）。見(jiàn)圖1。

圖1 尿mAlb與尿TP的相關(guān)性

2.2 審核規(guī)則的驗(yàn)證

把線(xiàn)性回歸方程列入實(shí)驗(yàn)室信息系統(tǒng)（laboratory information system，LIS）的審核規(guī)則中進(jìn)行驗(yàn)證。結(jié)果顯示，尿TP實(shí)測(cè)與尿TP鉤狀比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.001）；與尿TP稀釋比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。見(jiàn)表2。

3 討論

免疫比濁法是基于抗原抗體反應(yīng)的檢測(cè)方法，而抗原抗體反應(yīng)的特點(diǎn)就是抗原和抗體等比例反應(yīng)。當(dāng)抗原或抗體過(guò)量時(shí)，就會(huì)產(chǎn)生鉤狀效應(yīng)，可導(dǎo)致假陰性或弱陽(yáng)性結(jié)果。為了保證檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確，儀器和試劑廠(chǎng)商采取各種措施來(lái)避免鉤狀效應(yīng)的產(chǎn)生。但并不是所有的檢測(cè)項(xiàng)目都適用這些方法。因此，本研究通過(guò)建立尿TP和尿mAlb的線(xiàn)性回歸方程來(lái)判斷是否產(chǎn)生了鉤狀效應(yīng)，為部分無(wú)力購(gòu)置昂貴設(shè)備的基層醫(yī)院提供新的思路。

白蛋白從腎小球?yàn)V過(guò)后，絕大部分在腎小管被重吸收，正常人尿中白蛋白含量極微。但在一些早期的腎臟病變中，尿mAlb水平會(huì)升高。因此，尿mAlb和ACR已在臨床上被普遍用于腎臟疾病的診斷。目前，尿mAlb的檢測(cè)方法主要為免疫比濁法，某些儀器具有監(jiān)測(cè)反應(yīng)曲線(xiàn)和帶檢查報(bào)警的功能，可以提示鉤狀效應(yīng)的發(fā)生[9]，但一些型號(hào)較老的儀器沒(méi)有這些功能。因此，臨床實(shí)驗(yàn)室需要一種較為簡(jiǎn)單的方法來(lái)提示鉤狀效應(yīng)的發(fā)生。

本研究結(jié)果顯示，尿TP與尿mAlb呈正相關(guān)（r=0.880，P=0.000），可建立一元線(xiàn)性回歸方程，在一定程度上反映了尿TP與尿mAlb之間的關(guān)系。當(dāng)發(fā)生鉤狀效應(yīng)時(shí)，尿mAlb和尿TP之間的關(guān)聯(lián)性不能滿(mǎn)足一元線(xiàn)性回歸方程。因此，可以把建立的線(xiàn)性回歸方程作為一個(gè)經(jīng)驗(yàn)公式，用于尿mAlb檢測(cè)結(jié)果的審核。各臨床實(shí)驗(yàn)室可建立適合自己實(shí)驗(yàn)室的線(xiàn)性回歸方程，并定期驗(yàn)證。有條件的實(shí)驗(yàn)室應(yīng)參照WS/T 616—2018《臨床實(shí)驗(yàn)室定量檢驗(yàn)結(jié)果的自動(dòng)審核》的要求，分析尿TP與尿mAlb之間的相關(guān)性，進(jìn)一步挖掘二者間的關(guān)系，深入揭示二者在疾病發(fā)展和治療中的病理生理特征，以便更好地為臨床服務(wù)。

綜上所述，雖然不同的腎臟疾病尿TP的成分及水平均有一定的差異[10-11]，但尿mAlb與尿TP的比值在一定程度上可反映疾病的類(lèi)型。聯(lián)合檢測(cè)尿TP和尿mAlb雖然稍微增加了患者的負(fù)擔(dān)，但最終的檢測(cè)結(jié)果更為準(zhǔn)確，有助于臨床對(duì)病情的判斷。由于本研究的樣本量較小，建立的線(xiàn)性回歸方程尚不能完全反映尿mAlb與尿TP之間的關(guān)系，因此還有待進(jìn)一步擴(kuò)大樣本量進(jìn)行驗(yàn)證。