鄧晶晶，江華娟，蘭 興，李敏敏，王升菊，何 瑤

成都中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院 中藥材標(biāo)準(zhǔn)化教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，四川 成都 611137

桃紅四物湯是古代經(jīng)典名方目錄（第1批）中收載的百首經(jīng)典名方之一，也是國家最早發(fā)布古代經(jīng)典名方關(guān)鍵信息的7首方劑之一。該方出自清代柴得華《婦科冰鑒》，處方組成為生地（3錢，酒洗）、當(dāng)歸（4錢，酒洗）、白芍錢（5分，酒炒）、川芎（1錢）、桃仁（14粒，去皮尖研泥）、紅花（1錢，酒洗），功效為“養(yǎng)血、活血、逐瘀”[1]。該方最早見于清代吳謙所著《醫(yī)宗金鑒?婦科心法要決》，是在婦科圣方四物湯（補(bǔ)血活血）的基礎(chǔ)上，加桃仁-紅花藥對增強(qiáng)活血化瘀之功，對血瘀而兼有血虛者尤為適宜，適用于血瘀引起的多種病癥[2-3]。按照《醫(yī)林改錯》記載，根據(jù)病變部位不同，“血瘀”可分為頭部、胸部、腹部、少腹部、肢體經(jīng)絡(luò)5個方面，其代表疾病依次為腦梗死[4-5]、冠心病和心絞痛[6-9]、高血壓[10]、肝硬化[11]、月經(jīng)失調(diào)[12]、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎[13]等，桃紅四物湯均可治之。

桃紅四物湯已成為中醫(yī)臨床使用最廣泛的活血化瘀方劑之一，也是異病同治的典型方劑。課題組前期對該方劑的化學(xué)成分、藥理作用及臨床應(yīng)用進(jìn)行文獻(xiàn)挖掘[14]，發(fā)現(xiàn)其較多臨床應(yīng)用的治療作用機(jī)制研究還不深入、缺乏實(shí)驗(yàn)研究基礎(chǔ)。中藥復(fù)方化學(xué)成分復(fù)雜，臨床療效的表現(xiàn)是其多成分、多靶點(diǎn)、多途徑的協(xié)同作用，桃紅四物湯以其養(yǎng)血和活血化瘀功效為核心應(yīng)用于多種疾病的治療，其成分-靶點(diǎn)-通路-疾病之間的交互作用網(wǎng)絡(luò)如何關(guān)聯(lián)，是該方劑現(xiàn)代應(yīng)用中亟待探究的關(guān)鍵問題。

隨著組學(xué)技術(shù)的發(fā)展完善，系統(tǒng)生物學(xué)及多向藥理學(xué)已廣泛應(yīng)用于多種疾病及藥理、毒理等方面研究。網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)（network pharmacology）融合了系統(tǒng)生物學(xué)和多向藥理學(xué)的思想，通過構(gòu)建“成分-靶點(diǎn)-通路-疾病”之間的復(fù)雜網(wǎng)絡(luò)分析藥物有效成分的作用機(jī)制，使藥理研究由尋找單一靶點(diǎn)的傳統(tǒng)研究理念轉(zhuǎn)向了網(wǎng)絡(luò)綜合分析思維，已經(jīng)開始逐步滲透到中醫(yī)藥領(lǐng)域的各個方面，系統(tǒng)科學(xué)地解析中藥或中藥復(fù)方。網(wǎng)絡(luò)藥理研究中，同一疾病在不同發(fā)展階段，可由不同的蛋白（或基因）調(diào)控；部分蛋白亦可在多種疾病中起中樞調(diào)控作用，與“同病異治”和“異病同治”的中醫(yī)藥理論不謀而合。本研究采用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的方法，以桃紅四物湯活血化瘀功效為核心，系統(tǒng)綜合地探尋桃紅四物湯對疾病網(wǎng)絡(luò)的干預(yù)與影響，探索其多成分與多靶點(diǎn)、多疾病之間的復(fù)雜關(guān)系，從系統(tǒng)生物學(xué)整體水平揭示其潛在有效成分和藥理作用機(jī)制，為其基礎(chǔ)研究和臨床應(yīng)用奠定理論基礎(chǔ)。

1 方法

1.1 研究思路

本研究基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的桃紅四物湯主要成分與作用機(jī)制關(guān)聯(lián)分析研究思路見圖1。

圖1 桃紅四物湯網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)研究思路Fig.1 Schematic diagram of network pharmacology research of Taohong Siwu Decoction

1.2 桃紅四物湯有效成分篩選

以桃紅四物湯中生地黃、當(dāng)歸、川芎、白芍、桃仁和紅花6味藥材為關(guān)鍵詞，在中藥系統(tǒng)藥理數(shù)據(jù)庫及分析平臺（traditional Chinese medicine systems pharmacology database and analysis platform，TCMSP，http://lsp.nwu.edu.cn/tcmsp.php）中篩選出桃紅四物湯現(xiàn)有成分的數(shù)據(jù)；以藥物口服生物利用度（oral bioavailability，OB）≥30%，類藥性（drug likeness，DL）≥0.18，小腸滲透率（Caco-2）≥0.4為標(biāo)準(zhǔn)。同時(shí)，結(jié)合課題組前期研究結(jié)果及文獻(xiàn)檢索對有效活性成分進(jìn)行完善。

1.3 桃紅四物湯化學(xué)成分潛在靶點(diǎn)預(yù)測、蛋白-蛋白相互作用網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建與分析及疾病預(yù)測

將篩選得到的有效成分在TCMSP中預(yù)測相關(guān)靶點(diǎn)，將獲得的桃紅四物湯潛在靶點(diǎn)數(shù)據(jù)導(dǎo)入STRING 11.0軟件（http://string-db.org），并將物種限定為“homo snpiens”。選取置信度高于0.9的數(shù)據(jù)，構(gòu)建桃紅四物湯的蛋白相互作用（protein-protein interaction，PPI）網(wǎng)絡(luò)，根據(jù)網(wǎng)絡(luò)中基因與鄰接基因的數(shù)目，找出網(wǎng)絡(luò)的核心基因。將篩選得到桃紅四物湯潛在作用靶點(diǎn)作為關(guān)鍵詞，在TCMSP中匹配靶點(diǎn)所對應(yīng)的疾病。

1.4 網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建與分析

將“藥材-成分”“成分-靶點(diǎn)”“靶點(diǎn)-疾病”文件輸入Cytoscape 3.7.2構(gòu)建桃紅四物湯“藥材-成分-靶點(diǎn)”“疾病-靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)圖。在網(wǎng)絡(luò)中，藥材、成分、靶點(diǎn)、疾病是由節(jié)點(diǎn)來表示，兩個節(jié)點(diǎn)之間的相互作用由邊來表示。

1.5 基因本體論（gene ontology，GO）和基因組百科全書（Kyoto encyclopedia of genes and genomes，KEGG）通路富集分析

使用DAVID Bioinformatics Resources 6.8（https://david.ncifcrf.gov/）對核心靶點(diǎn)及PPI核心基因進(jìn)行GO生物學(xué)過程富集分析；使用KEGG（http://www.kegg.jp/）對靶點(diǎn)進(jìn)行通路注釋，篩選P≤0.05的顯著途徑進(jìn)行聚類分析。

1.6 分子對接驗(yàn)證

使用AutoDock軟件（4.2版）進(jìn)行分子對接，該軟件采用Lamarckian遺傳算法驗(yàn)證復(fù)合靶的關(guān)聯(lián)性。在Autodock工具中準(zhǔn)備蛋白質(zhì)和配體，目標(biāo)蛋白的三維結(jié)構(gòu)從RCSB-PDB數(shù)據(jù)庫（http://www.pdb.org）下載。對接數(shù)據(jù)庫進(jìn)行再對接，加入氫原子，通過Auto工具計(jì)算對接結(jié)合能，探討成分與靶點(diǎn)之間的結(jié)合作用。通過程序Pymol繪制靶點(diǎn)蛋白和分子的對接圖。

2 結(jié)果

2.1 活性成分篩選

通過篩選，確定了桃紅四物湯中的25個潛在化合物（OB≥30%，DL≥0.18，Caco-2≥0.4）。同時(shí)，據(jù)文獻(xiàn)查閱，納入了15個活性化合物進(jìn)行研究。共從桃紅四物湯中篩選出40個活性化合物，其中9個來自桃仁、16個來自紅花、5個來自當(dāng)歸、10個來自川芎、8個來自白芍、5個來自地黃。其中川芎、當(dāng)歸共有成分3個，桃仁、紅花、當(dāng)歸、白芍共有成分1個，紅花、白芍共有成分1個，紅花、桃仁共有成分2個；川芎、白芍、生地黃共有成分1個，紅花、當(dāng)歸、生地黃共有成分1個。篩選出的40個成分見表1。

2.2 桃紅四物湯作用靶點(diǎn)預(yù)測及PPI網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建

本研究利用TCMSP靶點(diǎn)預(yù)測技術(shù)對上述活性成分進(jìn)行作用靶點(diǎn)預(yù)測，排除重復(fù)靶點(diǎn)，共獲得32個化合物對應(yīng)的預(yù)測靶點(diǎn)221個。將靶點(diǎn)蛋白對應(yīng)的基因輸入String數(shù)據(jù)庫獲取PPI網(wǎng)絡(luò)，網(wǎng)絡(luò)中含有220個節(jié)點(diǎn)，798條相互作用關(guān)系。利用String繪制得分前30個PPI蛋白的互作網(wǎng)絡(luò)圖，見圖2。利用Cytoscape 3.7.2的Cytohubba插件中的degree算法篩選出得分前30的蛋白作為Hub蛋白，見圖3。其中關(guān)鍵靶點(diǎn)包括：RAC-α絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶（RAC-α serine/threonine protein kinase，AKT1，degree＝132）、血清白蛋白（albumin，ALB，degree＝122）、白細(xì)胞介素-6（intedeukin-6，IL-6，degree＝120）、血管內(nèi)皮生長因子A（vascular endothelial growth factor A，VEGFA，degree＝112）、AP-1轉(zhuǎn)錄激活因子（transcription factor AP-1，JUN，degree＝106）等。

2.3 構(gòu)建“疾病-靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)

將221個相關(guān)靶點(diǎn)蛋白在TCMSP數(shù)據(jù)庫中進(jìn)行匹配，其中92個靶點(diǎn)蛋白可匹配286種疾病，129個靶點(diǎn)蛋白未能匹配到相關(guān)疾病。根據(jù)靶點(diǎn)蛋白與疾病的關(guān)系可以構(gòu)建“疾病-靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)，涉及92個靶點(diǎn)，286個疾病，為了能夠更加直觀地探析桃紅四物湯治療疾病的作用機(jī)制，本研究對286種疾病的degree值進(jìn)行計(jì)算，分析得到的關(guān)鍵疾病主要為癌癥相關(guān)疾?。ㄈ橄侔〥43、前列腺癌D33等）、心血管相關(guān)疾?。ǜ哐獕篋10、心肌梗死D47、心臟衰竭D11）、神經(jīng)系統(tǒng)相關(guān)疾病（阿爾茨海默病D3），見圖4。從中篩選代表性疾?。ㄈ橄侔?、高血壓），根據(jù)桃紅四物湯成分、靶點(diǎn)蛋白與疾病的關(guān)系構(gòu)建“成分-靶點(diǎn)-疾病”網(wǎng)絡(luò)，見圖5。

表1 從桃紅四物湯中篩選出的40個活性成分及其參數(shù)Table 1 Forty active ingredients and their parameters in Taohong Siwu Decoction

2.4 桃紅四物湯作用靶點(diǎn)預(yù)測及“藥材-成分-靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建

利用Cytoscape 3.7.2將篩選得到的有效成分和預(yù)測得到的相關(guān)靶點(diǎn)，進(jìn)行關(guān)系網(wǎng)絡(luò)繪制和分析，桃紅四物湯發(fā)揮重要作用的有效成分與對應(yīng)的作用靶點(diǎn)的相互關(guān)系共546個，見圖6。

圖2 桃紅四物湯相關(guān)靶點(diǎn)的PPI網(wǎng)絡(luò) (前30)Fig.2 PPI network of Taohong Siwu Decoction related targets (top 30)

圖3 桃紅四物湯關(guān)聯(lián)的核心靶點(diǎn)柱狀圖 (前30)Fig.3 Histogram of core targets associated with Taohong Siwu Decoction (top 30)

2.5 GO和KEGG通路富集分析結(jié)果

圖4 “疾病-靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)Fig.4 “Disease-target” network

圖5 “成分-靶點(diǎn)-疾病”網(wǎng)絡(luò)Fig.5 “Component-target-disease” network

圖6 桃紅四物湯“藥材-成分-靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)Fig.6 “Medicinal material-component-target” network of Taohong Siwu Decoction

將221個基因輸入DAVID Bioinformatics Resources 6.8，得到646條GO條目與生物學(xué)過程有關(guān)，參與促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡和抑制腫瘤增生、免疫調(diào)節(jié)、內(nèi)分泌調(diào)節(jié)、血液循環(huán)系統(tǒng)調(diào)節(jié)等多種生物學(xué)過程。根據(jù)P≤0.05篩選出169個GO條目，在GO富集分析中，其中前30個差異基因的結(jié)果見圖7。將獲得的靶點(diǎn)導(dǎo)入KEGG數(shù)據(jù)庫，在通路水平上全面揭示桃紅四物湯的作用機(jī)制。最終得到了165條關(guān)鍵通路，根據(jù)P≤0.05篩選出前30條富集通路，見圖8。通路上的所含基因產(chǎn)物（靶點(diǎn)）越多，桃紅四物湯越有可能通過這些通路發(fā)揮作用，包括IL-17信號通路、腫瘤壞死因子（tumor necrosis factor，TNF）信號通路、絲裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase，MAPK）信號通路、缺氧誘導(dǎo)因子-1（hypoxia-inducible factor-1，HIF-1）信號通路、核轉(zhuǎn)錄因子-κB（nuclear factor-κB，NF-κB）信號通路等。這165條關(guān)鍵通路的生物學(xué)功能可以分為4個主要調(diào)節(jié)模塊：促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡和抑制腫瘤增生、免疫調(diào)節(jié)、內(nèi)分泌調(diào)節(jié)、血液循環(huán)系統(tǒng)調(diào)節(jié)。從主要的4個模塊中篩選出關(guān)鍵通路的代表，分別為TNF通路、IL-17通路、MAPK信號通路、VEGF信號通路（圖9）。結(jié)果表明，AKT1、細(xì)胞外信號調(diào)節(jié)激酶（extracellular signal-regulated kinase，ERK）、IκB激酶β（inhibitor of NF-κB kinase β，IKKβ）等核心靶點(diǎn)在通路網(wǎng)絡(luò)中起著關(guān)鍵作用。

圖7 GO通路富集分析結(jié)果Fig.7 Analysis results of GO pathway enrichment

圖8 KEGG通路富集分析結(jié)果Fig.8 KEGG pathway enrichment analysis results

圖9 桃紅四物湯關(guān)鍵通路圖Fig.9 Key pathway diagram of Taohong Siwu Decoction

2.6 桃紅四物湯活性成分和核心靶點(diǎn)分子對接驗(yàn)證

將桃紅四物湯篩選得到的核心靶點(diǎn)與其所對應(yīng)的關(guān)鍵蛋白使用AutoDock軟件進(jìn)行分子對接驗(yàn)證，以直觀的方式展示了關(guān)鍵成分的最佳構(gòu)型和核心靶點(diǎn)之間的相互作用，對接結(jié)果如表2所示，分子與標(biāo)靶蛋白的最低結(jié)合能均小于0，說明配體與受體均可以自發(fā)結(jié)合，其中AKT1蛋白與咖啡酸、阿魏酸、山柰酚的對接結(jié)合能均小于?5 kJ/mol，結(jié)合能分別為?5.09、?6.17、?6.24 kJ/mol；IL-6蛋白與山柰酚結(jié)合能為?5.68 kJ/mol。主要活性成分和核心靶點(diǎn)之間的結(jié)合情況與預(yù)測關(guān)系相符。如圖10-A所示，咖啡酸與AKT1的ARG-15和LYS-20殘基的氫鍵連接；如圖10-F所示，阿魏酸與IL-6的LYS41殘基的氫鍵相對接；如圖10-I所示，槲皮素與VEGFA的LYS-48殘基的氫鍵對接。桃紅四物湯中的主要活性成分與核心靶點(diǎn)的高結(jié)合親和力表明，桃紅四物湯可能是通過調(diào)節(jié)以上相關(guān)靶標(biāo)發(fā)揮治療作用。

表2 桃紅四物湯核心有效成分分子對接結(jié)果Table 2 Molecular docking results of core active ingredients of Taohong Siwu Decoction

3 結(jié)論與討論

桃紅四物湯在四物湯的基礎(chǔ)上加用桃仁、紅花2味藥，增強(qiáng)了活血化瘀的功效，具有補(bǔ)血而不滯血、和血而不傷血的特點(diǎn)，臨床用于血瘀證引起的諸多疾病。瘀血學(xué)說始見于《黃帝內(nèi)經(jīng)》，奠基于張仲景，瘀血既成后，又可作為病因影響人體氣血和臟腑功能，引起疼痛、出血、經(jīng)脈瘀塞不通、臟腑癥結(jié)，以及“瘀血不去，新血不生”等諸多病理變化，為桃紅四物湯在臨床上異病同治奠定了理論基礎(chǔ)。本研究通過成分、靶點(diǎn)匹配和分子對接，發(fā)現(xiàn)桃紅四物湯中活性成分阿魏酸、山柰酚、槲皮素、丹皮酚、咖啡酸、芍藥苷、藁本內(nèi)酯能匹配到較多靶點(diǎn)，關(guān)鍵靶點(diǎn)分別與腫瘤細(xì)胞增殖與凋亡、免疫調(diào)節(jié)、內(nèi)分泌調(diào)節(jié)、血液系統(tǒng)調(diào)節(jié)相關(guān)，主要涉及TNF、IL-17、MAPK、VEGF信號通路，預(yù)測得到桃紅四物湯治療的主要疾病主要為癌癥相關(guān)疾病、心血管相關(guān)疾病、神經(jīng)系統(tǒng)相關(guān)疾病。

阿魏酸、山柰酚、槲皮素、丹皮酚、芍藥苷、藁本內(nèi)酯、咖啡酸能匹配到較多靶點(diǎn)，且常用于桃紅四物湯的質(zhì)量控制，阿魏酸、山柰酚、芍藥苷分別為《中國藥典》2015年版規(guī)定的當(dāng)歸和川芎、紅花、白芍的含量測定指標(biāo)。研究表明，阿魏酸是當(dāng)歸、川芎的共有成分，具有抗血栓、調(diào)脂、抗氧化、抗菌、抗炎作用[15]；山柰酚為紅花、白芍的共有成分，能抗癌、抗氧化、抗炎、抗骨質(zhì)疏松等[16-17]；槲皮素為紅花、桃仁的共有成分，可抑制各種腫瘤細(xì)胞的增殖，與凋亡調(diào)節(jié)因子Bax和Bcl-2有關(guān)，能上調(diào)半胱胺酸天冬氨酸蛋白酶（cysteine aspartic acid protease，Caspase），下調(diào)NF-κB表達(dá)；芍藥苷為白芍的主要有效成分，具有解痙鎮(zhèn)痛、解熱、抗炎、抗腫瘤等藥理作用[18-19]；藁本內(nèi)酯為川芎和當(dāng)歸的共有活性成分，具有抗癌、抗炎、抗氧化以及神經(jīng)保護(hù)作用[20]；咖啡酸是川芎、當(dāng)歸中的活性成分，具有抗腫瘤作用，其作用機(jī)制與抑制Akt有關(guān)[21]。由此可見，這些成分可以作為桃紅四物湯重要的有效成分，并用于該方劑的質(zhì)量控制。

圖10 分子對接模式圖Fig.10 Molecular docking diagram

基于活性化合物篩選得到的關(guān)鍵靶點(diǎn)可分為4類，分別與腫瘤細(xì)胞增殖與凋亡、免疫調(diào)節(jié)、內(nèi)分泌調(diào)節(jié)、血液系統(tǒng)調(diào)節(jié)相關(guān)。抑制腫瘤細(xì)胞增殖和促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡相關(guān)靶點(diǎn)蛋白為AKT1、ALB、JUN、myc原癌基因蛋白質(zhì)（myc proto-oncogene protein，MYC）、Caspase-3蛋白酶（CASP3）、絲裂原活化蛋白激酶1（mitogen-activated protein kinase 1，MAPK1）等；免疫調(diào)節(jié)相關(guān)靶點(diǎn)為IL-6、IL-1β、IL-10等；內(nèi)分泌調(diào)節(jié)相關(guān)靶點(diǎn)為ESR1、前列腺素G/H合酶2（prostaglandin G/H synthase 2，PTGS2）、受體酪氨酸蛋白激酶（receptor tyrosine-protein kinase erbB-2，ERBB2）、雄激素受體（androgen receptor，AR）等；血液系統(tǒng)調(diào)節(jié)相關(guān)靶點(diǎn)為VEGFA、HIF-1A、表皮生長因子（epidermal growth factor receptor，EGFR）、前表皮生長因子（pro-epidermal growth factor，EGF）、內(nèi)皮型一氧化氮合酶（nitric oxide synthase,endothelial，NOS3）、基質(zhì)金屬蛋白酶-9（matrix metalloproteinase-9，MMP-9）等。桃紅四物湯臨床上治療疾病多與這4個方面相關(guān)，其治療原發(fā)性痛經(jīng)[22]、月經(jīng)不調(diào)[23]、子宮肌瘤[24]、多囊卵巢綜合癥[25]、子宮出血[26]等婦科疾病，可能均與內(nèi)分泌調(diào)節(jié)有關(guān)；治療冠心病、高血壓[27]、腦梗死[28]、腦出血[29]等疾病則與血液系統(tǒng)的靶點(diǎn)相關(guān)；治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎[30]、腎小球腎炎[31]等疾病可能與免疫調(diào)節(jié)相關(guān)；治療乳腺癌[32]可能與腫瘤細(xì)胞增殖與凋亡的靶點(diǎn)相關(guān)。

從主要的4個模塊中篩選出關(guān)鍵通路，分別為TNF信號通路、IL-17信號通路、MAPK信號通路、VEGF信號通路。（1）TNF信號通路調(diào)節(jié)著很多重要的生物學(xué)活動，如免疫反應(yīng)、炎癥反應(yīng)、細(xì)胞凋亡和腫瘤發(fā)生。研究發(fā)現(xiàn)TNF-α與其配體TNFR的相互作用參與了許多人類疾病的發(fā)生，如敗血癥、糖尿病、癌癥、骨質(zhì)疏松癥和類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等[33]。桃紅四物湯有效成分可抑制TNF的表達(dá)，阻斷TNF信號通路起到抗腫瘤的作用[34]。（2）IL-17是一個重要的促炎癥細(xì)胞因子，其信號通路與免疫調(diào)節(jié)相關(guān)，在多種炎性反應(yīng)及自身免疫性疾病病理過程中發(fā)揮關(guān)鍵作用[35]。大量臨床研究也發(fā)現(xiàn)，桃紅四物湯在治療腰椎間盤突出[36]、改善全髖關(guān)節(jié)置換術(shù)后凝血功能及疼痛程度[37]等疾病時(shí)，可降低患者血清中炎癥介質(zhì)IL-17水平，其可作用于這些靶點(diǎn)提高免疫系統(tǒng)功能。（3）MAPK信號通路與炎癥和腫瘤相關(guān)，該通路參與了細(xì)胞生長、發(fā)育、增殖、分化等多種生理、病理過程[38]。研究也發(fā)現(xiàn)，桃紅四物湯通過調(diào)節(jié)MAPK信號通路抑制血管平滑肌的遷移和增殖[39]，聯(lián)合化學(xué)藥治療哮喘[40]等。（4）VEGF是調(diào)節(jié)血管生成和血管新生的重要調(diào)節(jié)因子。分泌VEGF對于維持血管平衡穩(wěn)定和存活起著十分重要的作用。生理狀態(tài)下，血管生成過程被嚴(yán)格調(diào)控，只有在特殊情況下被激活，如傷口愈合過程；病理狀態(tài)下，如癌癥發(fā)生發(fā)展過程中，往往伴隨著過度的血管生成，以提供更多營養(yǎng)供癌細(xì)胞生長。因此，現(xiàn)代治療腫瘤的方法中，很重要的一個策略就是抑制腫瘤中血管生成[41]。研究發(fā)現(xiàn)，桃紅四物湯活血化瘀治療痛經(jīng)、乳腺癌等疾病與VEGF信號通路有著密切的聯(lián)系[42-44]。

將匹配的關(guān)鍵靶點(diǎn)進(jìn)行疾病關(guān)聯(lián)，得到桃紅四物湯治療的主要疾病主要為癌癥相關(guān)疾病、心血管相關(guān)疾病、神經(jīng)系統(tǒng)相關(guān)疾病。（1）其中癌癥相關(guān)疾病包括乳腺癌、前列腺癌等。乳腺癌屬于中醫(yī)“乳巖”范疇，瘀血內(nèi)結(jié)是乳巖發(fā)生、發(fā)展的重要病機(jī)之一。中醫(yī)認(rèn)為血瘀與腫瘤互為因果，且貫穿腫瘤進(jìn)展的始終；現(xiàn)代臨床研究表明，中醫(yī)辨證為瘀毒內(nèi)阻型的乳腺癌術(shù)后患者45%發(fā)生血行轉(zhuǎn)移[45]，大多數(shù)乳腺癌患者體內(nèi)普遍存在著血液高凝狀態(tài)。桃紅四物湯能抑制乳腺癌患者腫瘤血管生成[46]，提高化療療效，改善患者臨床癥狀及減輕毒副反應(yīng)[47]，改善術(shù)后上肢腫脹[48-50]等并發(fā)癥。本研究發(fā)現(xiàn)，桃紅四物湯治療乳腺癌的關(guān)鍵作用靶點(diǎn)（圖4）主要包括激素調(diào)節(jié)相關(guān)靶點(diǎn)ESR1、ESR2、PGR、PTGS2，以及EGFR，與腫瘤細(xì)胞的增殖、血管生成、腫瘤侵襲、轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。（2）心血管相關(guān)疾病包括高血壓、心肌梗死、心臟衰竭等，均是血瘀證的常見疾病。臨床研究表明桃紅四物湯聯(lián)合苯磺酸氨氯地平片治療老年高血壓，可更有效地將血壓控制在正常值之內(nèi)，進(jìn)而降低臟器損害，避免并發(fā)癥[51]；桃紅四物湯合真武湯聯(lián)合化學(xué)藥，治療陽虛血瘀型慢性射血分?jǐn)?shù)降低性心力衰竭患者具有良好的臨床效果，改善患者心功能[52]。本研究發(fā)現(xiàn)，桃紅四物湯治療心血管相關(guān)疾病作用的關(guān)鍵靶點(diǎn)（圖4）主要包括血管新生相關(guān)靶點(diǎn)VEGFA；激素調(diào)節(jié)相關(guān)靶點(diǎn)腎上腺素（ADRB1、ADRB2、ADRA2A、ADRA1D）、前列腺素（PTGS2、PTGIS）、雌激素（ESR1）。（3）本研究預(yù)測出桃紅四物湯可用于神經(jīng)系統(tǒng)相關(guān)疾病如阿爾茨海默病的治療。阿爾茨海默病是一種不可治愈的神經(jīng)退行性腦病，淀粉樣斑塊是其主要病理特征和臨床診斷指標(biāo)；中醫(yī)認(rèn)為淀粉樣斑塊沉積是“濁毒”的一個方面，可以被認(rèn)為是中醫(yī)的“腦絡(luò)受損”范疇[53]。但網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)研究過程中沒有考慮成分血腦屏障的參數(shù)（lgBBB），故其作用需要進(jìn)一步探索。

本研究通過網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)和分子對接，構(gòu)建了其主要有效成分、作用靶點(diǎn)和通路、治療疾病的復(fù)雜網(wǎng)絡(luò)，一定程度上揭示了桃紅四物湯活血化瘀功效在臨床上異病同治的作用網(wǎng)絡(luò)，為桃紅四物湯的實(shí)驗(yàn)研究和臨床應(yīng)用提供了理論依據(jù)。然而篩選得到的成分只是考慮其活性和入血情況，并未衡量其在復(fù)方中的含量等問題，且只通過分子對接對主要成分和關(guān)鍵靶點(diǎn)進(jìn)行了驗(yàn)證。在此基礎(chǔ)上，可進(jìn)一步通過體內(nèi)、外實(shí)驗(yàn)來驗(yàn)證成分和靶點(diǎn)之間的作用關(guān)系，深入揭示桃紅四物湯的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)和作用機(jī)制，用現(xiàn)代科學(xué)語言詮釋傳統(tǒng)經(jīng)典名方的科學(xué)內(nèi)涵。

利益沖突所有作者均聲明不存在利益沖突