翟思佳 尹時(shí)華 侯濤 任毅 廖行偉 黃巧 李念燊

耳蝸螺旋神經(jīng)節(jié)神經(jīng)元(spiral ganglion neuron,SGN)作為初級(jí)聽(tīng)覺(jué)神經(jīng)元，是外周聽(tīng)覺(jué)信號(hào)傳遞到中樞神經(jīng)系統(tǒng)的重要樞紐。SGN是水楊酸鈉(sodium salicylate，SS)首要作用的主要靶點(diǎn)[1]。SGN損傷與聽(tīng)力損失息息相關(guān)，在水楊酸鈉誘導(dǎo)耳鳴的發(fā)病機(jī)制中占據(jù)重要地位。

最新研究發(fā)現(xiàn)神經(jīng)炎癥是水楊酸鈉誘導(dǎo)聽(tīng)覺(jué)損傷的新機(jī)制[2]，盡管已有研究證實(shí)水楊酸鈉會(huì)導(dǎo)致耳蝸SGN細(xì)胞中多種炎癥因子如腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)、白介素-1(IL-1)上調(diào)[3-5]，但其確切分子機(jī)制仍缺乏進(jìn)一步研究。而過(guò)度免疫所激活的NLRP3炎癥小體可能是SGN細(xì)胞中炎癥因子上調(diào)的關(guān)鍵原因，NOD-like receptor(NLR)樣受體NLRP3作為模式識(shí)別受體，可識(shí)別各種危險(xiǎn)信號(hào)，幫助炎癥小體組裝，促使半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(caspase-1，CAPS-1)前體成熟并釋放IL-1β、IL-18，間接促進(jìn)TNF-α等炎癥因子上調(diào)，加劇炎癥反應(yīng)，導(dǎo)致耳蝸內(nèi)重要結(jié)構(gòu)損傷[6]。目前已證實(shí)NLRP3炎癥小體與老年性聾[7]、巨細(xì)胞病毒(CMV)感染誘發(fā)的感音神經(jīng)性聾[8]和Mucklewell綜合征[9](由NLRP3突變而引起其在SGN高表達(dá))等多種聽(tīng)覺(jué)損害，以及阿爾茲海默病、帕金森病等神經(jīng)退行性疾病[10]密切相關(guān)。

本研究旨在探討NLRP3炎性小體激活在水楊酸鈉誘導(dǎo)SGN損傷過(guò)程中的作用以及水楊酸鈉誘導(dǎo)耳蝸炎癥復(fù)合體激活的關(guān)鍵分子機(jī)制；并通過(guò)給予抑制NLRP3的預(yù)處理，觀(guān)察其否可以減輕炎癥因子的釋放，減輕聽(tīng)覺(jué)系統(tǒng)損傷。

1 材料與方法

1.1主要試劑 人工外淋巴液(arfifical perilymph dluid,APL)，配制方法(單位：mM)：NaCl 137, KCl 5, CaCl22, NaH2PO41, Glucose 10, NaHCO312, MgCl21的溶液，pH 7.4±0.2；水楊酸鈉購(gòu)于sigma公司；MCC950購(gòu)自selleck公司(S7809，500 μM)；NLRP3抗體購(gòu)自NOVUS公司(NBP2-12446SS，1∶500倍稀釋)；Caspase-1抗體購(gòu)自Gene Tex公司(GTX123675,1∶100倍稀釋)；IL-1β抗體購(gòu)自SAB公司(41059-1，1∶500倍稀釋)；二抗試劑盒購(gòu)自北京中衫金橋公司；TRIZOL購(gòu)自TaKaRa 公司；逆轉(zhuǎn)錄盒與熒光定量PCR試劑盒購(gòu)于GeneCopoeia公司。

1.2實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組及造模 選取64只耳廓反應(yīng)靈敏、未暴露于噪聲及耳毒性藥物環(huán)境的健康雄性SD大鼠(250～300 g)(購(gòu)自廣西醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心),均耳聲發(fā)射檢查通過(guò)，且聽(tīng)性腦干反應(yīng)(ABR)閾值<40 dB SPL，隨機(jī)分為4組，每組16只，對(duì)照(control)組：腹腔注射等量生理鹽水；人工外淋巴液(APL)組：左耳圓窗注入APL100 μl，腹腔注射生理鹽水；水楊酸鈉(SS)組：左耳經(jīng)圓窗注入APL，腹腔注射10%水楊酸鈉(350 mg·kg-1·d-1)；水楊酸鈉+NLRP3抑制劑(SS+MCC950)組：左耳圓窗注入溶于APL的caspase抑制劑MCC950約100 μl后，腹腔注射水楊酸鈉。各組均連續(xù)用藥7 d。

圓窗給藥方法：10%水合氯醛全身麻醉滿(mǎn)意后，將大鼠置于固定板上，左耳后常規(guī)備皮、消毒、鋪巾，利多卡因局部浸潤(rùn)麻醉，于耳后溝后2 mm做弧形切口約1 cm長(zhǎng)，鈍性分離軟組織，暴露聽(tīng)泡，在解剖顯微鏡下于聽(tīng)泡后上方鉆孔并暴露圓窗龕，以分別浸泡有人工外淋巴液、MCC950的明膠海綿置于圓窗膜表面，關(guān)閉術(shù)腔，逐層縫合軟組織及皮膚，切口涂紅霉素軟膏，取左耳朝上側(cè)臥位，待自然清醒。

1.3ABR檢測(cè) 實(shí)驗(yàn)前及給藥結(jié)束后，在處死動(dòng)物之前，對(duì)各組大鼠進(jìn)行ABR測(cè)試。麻醉滿(mǎn)意后將大鼠置于隔聲室,記錄電極扎入額頂正中，參考電極接同側(cè)耳廓，鼻尖接地。click短聲刺激，刺激率21次/秒，帶通濾波300～3 000 Hz，觀(guān)察時(shí)程15 ms，疊加1 024次,刺激聲強(qiáng)度從90 dB SPL開(kāi)始以10 dB或者5 dB逐漸遞減, 以能引出可分辨波Ⅱ的最小刺激強(qiáng)度為ABR反應(yīng)閾，并重復(fù)檢測(cè)2次。

1.4畸變產(chǎn)物耳聲發(fā)射(DPOAE)檢測(cè) 給藥結(jié)束后，在處死動(dòng)物之前，對(duì)各組大鼠進(jìn)行DPOAE測(cè)試。麻醉后的大鼠置于隔聲室,刺激聲強(qiáng)度L1=65 dB SPL,L2=70 dB SPL,取2、3、4、6、8、10 kHz共6個(gè)頻率點(diǎn)進(jìn)行測(cè)試,記錄各頻率的DPOAE反應(yīng)幅值。

1.5耳蝸取材及切片制備 各組完成ABR及DPOAE檢測(cè)后，打開(kāi)胸腔進(jìn)行心臟灌注，待眼珠、四肢末端發(fā)白后快速斷頭，取出聽(tīng)泡后剝離出耳蝸，在解剖顯微鏡下于蝸尖處挑開(kāi)小孔，用1 ml注射器由蝸?lái)敼嘧?%多聚甲醛固定液，再將標(biāo)本置于4%多聚甲醛中，在4 ℃冰箱內(nèi)固定48 h；隨后將耳蝸置于10%EDTA溶液室溫脫鈣1個(gè)月，隔天更換一次脫鈣液。乙醇梯度脫水、二甲苯透明、石蠟定向包埋后平行耳蝸縱軸連續(xù)切片，片厚4 μm。

1.6HE染色 耳蝸石蠟切片置于60 ℃烤箱30 min，將切片取出進(jìn)行二甲苯脫蠟和梯度酒精水化；蒸餾水沖洗，蘇木素染色1 min，水洗；蒸餾水浸泡1 min；1%鹽酸酒精分化數(shù)秒，自來(lái)水返藍(lán)30 min，伊紅染色2 min；梯度酒精脫水，二甲苯透明，晾干封片，鏡檢。對(duì)形態(tài)異常的損傷細(xì)胞進(jìn)行定量分析，在不同的視野下，對(duì)SGN區(qū)內(nèi)每100個(gè)SGN細(xì)胞中形態(tài)異常細(xì)胞數(shù)進(jìn)行5次計(jì)數(shù)，取平均數(shù)作為結(jié)果。

1.7RNA提取 待大鼠麻醉充分，快速斷頭，迅速取出雙側(cè)耳蝸，置入RNA保存液中，在解剖顯微鏡下剝離蝸殼，取出膜迷路組織，迅速放入已加入300 μl TRIZOL的1.5 ml EP管中，用玻璃研磨棒在EP管中快速研磨碎，另加入700 μl TRIZOL，冰上放置10 min。4 ℃，12 000 g，離心5 min，吸取上清液到另一無(wú)酶EP管中，加入200 μl氯仿，震蕩15 s，冰上靜置5 min。4 ℃、12 000 g，離心15 min，小心吸取上層清液入新的無(wú)酶EP管中，切勿吸取到中間層。因耳蝸組織中膠原含量高，本實(shí)驗(yàn)采用mRNA改良提取法：用200 μl異丙醇與200 μl高鹽溶液(0.8 mol/L檸檬酸鈉與1.2 mol/L NaCl的混合液)沉淀RNA，提高RNA純度，顛倒混勻后冰上靜置10 min；4 ℃ 12 000 g離心10 min，棄上清保留沉淀，加入75%乙醇1 ml洗滌沉淀。4 ℃ 12 000 g離心5 min，倒去乙醇，用小槍頭吸取殘留液體，室溫晾干，然后將RNA溶于無(wú)酶水中，微量核酸蛋白檢測(cè)儀測(cè)定RNA 濃度，OD260/OD280比值需在1.7～2.0之間，長(zhǎng)期保存于-80 ℃冰箱。

1.8熒光定量PCR 取RNA 1 μg，按照逆轉(zhuǎn)錄試劑盒說(shuō)明書(shū)合成cDNA，然后通過(guò)美國(guó)ABI公司的Stepone進(jìn)行qRT-PCR。以1 μl cDNA為反應(yīng)模板，按照熒光定量PCR試劑盒說(shuō)明書(shū)配置反應(yīng)體系進(jìn)行反應(yīng)。反應(yīng)條件：95 ℃ 30 s，95 ℃ 10 s，60 ℃ 32 s，總共40個(gè)循環(huán)。選取GPHAD作為內(nèi)參對(duì)照，設(shè)3 個(gè)復(fù)孔，采用2-△△CT法進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。引物序列如下: GPHAD序列為F: 5'-AGTGCCAGCCTCGTCTCATA-3'；R:5'-TGAACTTGCCGTGGGTAGAG3-3'。NLRP3序列為F: 5'-ATTACCCGCCCGAGAAAGG-3'；R:5'-CATGAGTGTGGCTAGATCCAAG-3'。Caspase-1序列為F:5'-CCGAGTGGTTCCCTCAAGTT-3'；R:5'-CAAGACGTGTACGAGTGGGT-3'。IL-1β序列為F: 5'-GAGTGTGGATCCCAAGCAAT-3'；R:5'-CTCAGTGCAGGCTATGACCA-3'。以GPHAD為內(nèi)參，計(jì)算2-△△CT作為目的基因 mRNA的相對(duì)表達(dá)量。

1.9免疫組化染色 耳蝸石蠟切片置于60 ℃烤箱30 min，然后常規(guī)脫蠟和梯度酒精水化，自來(lái)水沖洗；切片置于EDTA緩沖液放入高壓鍋高壓堿修復(fù)4 min，室溫冷卻后PBS浸洗3次×5 min；將切片移入濕盒中加入阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物酶，室溫孵育10 min，PBS洗3次；正常山羊血清封閉15 min，甩去封閉液，不洗。標(biāo)本上滴加足量目的蛋白一抗4 ℃濕敷過(guò)夜；室溫復(fù)溫1 h，PBS沖洗3次×3 min；滴加增強(qiáng)酶標(biāo)羊抗小鼠/兔IgG聚合物，室溫孵育10 min，PBS沖洗3次×3 min；滴加辣根酶標(biāo)記鏈霉卵白素，室溫孵育10 min，PBS沖洗3次×3 min；DAB溶液顯微鏡下顯色約5 min，蒸餾水充分沖洗，蘇木素復(fù)染1 min，自來(lái)水沖洗，1%鹽酸酒精分化數(shù)秒，自來(lái)水返藍(lán)30 min，晾干，中性樹(shù)脂封片、鏡檢。細(xì)胞膜和/或細(xì)胞質(zhì)棕黃色顆粒者為陽(yáng)性表達(dá)，無(wú)棕黃色顆粒者為陰性表達(dá)。每張切片在10×40視野下選取5個(gè)互不重疊的視野，采用Image-pro plus6.0圖像分析軟件測(cè)定單位面積陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)的平均光密度值(average optical densities，AOD)，取平均值作為結(jié)果。

2 結(jié)果

2.1各組ABR閾值比較 實(shí)驗(yàn)前大鼠的ABR平均反應(yīng)閾為31.79±4.13 dB SPL，給藥7天后，對(duì)照組、APL組、SS組、SS+MCC950組大鼠的ABR反應(yīng)閾分別為32.5(26.25,35)、32.5(30,35)、50(45,55)、40(35,40)dB SPL。對(duì)照組和APL組反應(yīng)閾與實(shí)驗(yàn)前比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，而給藥7天后，SS組大鼠ABR反應(yīng)閾較對(duì)照組和APL組均顯著升高(P<0.001)，說(shuō)明造模成功，大劑量水楊酸鈉對(duì)大鼠聽(tīng)覺(jué)系統(tǒng)造成了一定損傷。給藥后，SS+MCC950組ABR反應(yīng)閾較SS組降低(P<0.05)，但較對(duì)照組與APL組仍有升高(P<0.01)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P<0.05。

2.2各組DPOAE比較 造模7天后，在4、6、8 kHz頻率，對(duì)照組與APL組DPOAE幅值無(wú)顯著差異(P>0.05)，而SS組大鼠DPOAP幅值較對(duì)照組及APL組顯著下降(分別為P<0.001，P<0.05，P<0.001)；SS+MCC950組3、4、8、10 kHz頻率DPOAP幅值與SS組差異顯著(均為P<0.001)，與對(duì)照組與APL組無(wú)明顯差異(P>0.05)(表1、2)。

表1 各組大鼠給藥后各頻率DPOAE幅值

表2 組間各頻率DPOAE幅值比較的P值

2.3HE染色觀(guān)察給藥后各組動(dòng)物SGN損傷情況 對(duì)照組和APL組耳蝸結(jié)構(gòu)正常；而SS組和SS+MCC950組則出現(xiàn)不同程度的耳蝸SGN細(xì)胞變形、移位、界限不清，部分溶解消失，胞體明顯縮小，胞核染色質(zhì)邊集、核固縮、核溶解，具有細(xì)胞死亡特征(圖1)。對(duì)照組、APL組、SS組及SS+MCC950組SGN形態(tài)異常的細(xì)胞計(jì)數(shù)分別為16.83±6.555、13.83±3.312、39.33±8.618、23±6.573個(gè)，可見(jiàn)，與對(duì)照組和APL組相比，SS組的SGN損傷更顯著(P<0.001)，SS+MCC950組SGN損傷較SS組明顯改善(P<0.01)，SS+MCC950組、對(duì)照組、APL組三組間的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

圖1 給藥后HE染色觀(guān)察各組耳蝸損傷(×400) a.對(duì)照組； b.APL組； c.SS組； d.SS+MCC950組； 箭頭所指為耳蝸SGN細(xì)胞

2.4熒光定量PCR檢測(cè)結(jié)果 熒光定量反應(yīng)曲線(xiàn)見(jiàn)圖2，可見(jiàn)，NLRP3、Caspase-1和IL-1β的擴(kuò)增曲線(xiàn)整齊均勻(圖2a、b、c)，溶解曲線(xiàn)均呈特異性單峰(圖2d、e、f)，表明擴(kuò)增產(chǎn)物特異性良好，無(wú)二聚體及非特異性擴(kuò)增。

圖2 熒光定量PCR反應(yīng)曲線(xiàn) (a、b、c分別為NLRP3、Caspase-1、IL-1β的擴(kuò)增曲線(xiàn)；d、e、f分別為NLRP3、Caspase-1、IL-1β的溶解曲線(xiàn))

以GPHAD為內(nèi)參，經(jīng)過(guò)計(jì)算得到各組NLRP3、Caspase-1、IL-1β mRNA的表達(dá)量如表3所示，并進(jìn)一步計(jì)算2-ΔΔCT作為目的基因mRNA的相對(duì)表達(dá)量，ΔCT值越大表達(dá)量越低。單因素方差分析示各組間NLRP3、Caspase-1、IL-1β mRNA的表達(dá)量有明顯差異，均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(表4)。三個(gè)炎癥因子均在對(duì)照組中表達(dá)水平最低，在SS組表達(dá)強(qiáng)烈增加、SS+MCC950組的表達(dá)均較SS組降低。說(shuō)明NLRP3是Caspase-1和IL-1β的上游調(diào)控基因，在水楊酸鈉誘導(dǎo)聽(tīng)覺(jué)損傷的過(guò)程中存在NLRP3炎癥小體信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路。

表3 各組 NLRP3、Caspase-1和IL-1β mRNA的表達(dá)量(n=8只)

表4 組間NLRP3、Caspase-1、IL-1β表達(dá)量比較的P值

2.5免疫組化染色結(jié)果 運(yùn)用免疫組化技術(shù)檢測(cè)各組螺旋神經(jīng)節(jié)處NLRP3、Caspase-1、IL-1β蛋白表達(dá)情況，發(fā)現(xiàn)其主要表達(dá)于SGN細(xì)胞胞質(zhì)中，三種蛋白均在對(duì)照組和APL組SGN區(qū)域弱陽(yáng)性表達(dá)，SS組呈強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)，SS+MCC950組中呈陽(yáng)性表達(dá)(圖3)；各組平均光密度值見(jiàn)表5，單因素方差分析示SS組SGN內(nèi)NLRP3、Caspase-1和IL-1β的表達(dá)顯著增加，SS+MCC950組NLRP3、Caspase-1和IL-1β蛋白的表達(dá)較SS組降低，但SS+MCC950組Caspase-1和IL-1β的表達(dá)仍較對(duì)照組高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(表6)；該蛋白質(zhì)表達(dá)水平與mRNA表達(dá)水平變化趨勢(shì)一致。

圖3 各組免疫組化染色結(jié)果(×400) 紅色箭頭所示為SGN陽(yáng)性細(xì)胞

表5 各組NLRP3、Caspase-1和IL-1β蛋白表達(dá)AOD值(n=8只)

表6 組間NLRP3、Caspase-1、IL-1β AOD值組間比較的P值

3 討論

內(nèi)源性免疫炎癥反應(yīng)是機(jī)體的一把雙刃劍[11]，由于內(nèi)耳自身具有很強(qiáng)的免疫能力，研究發(fā)現(xiàn)炎癥小體的過(guò)度免疫反應(yīng)在多種聽(tīng)覺(jué)損傷中起關(guān)鍵作用[7,8,12]。炎性小體的形成過(guò)程依賴(lài)于模式識(shí)別受體NLRP3，NLRP3炎癥小體在收到 “危險(xiǎn)”信號(hào)時(shí)被激活，借助ASC募集并剪切pro-caspase-1為有活性的caspase-1，促使下游的IL-1β和IL-18成熟并釋放，并且誘導(dǎo)它們經(jīng)由非經(jīng)典分泌途徑釋放[13]，從而引發(fā)細(xì)胞焦亡(pyroptosis)[14]。NLRP3炎癥復(fù)合體及其下游因子IL-18、IL-1β還可進(jìn)一步促進(jìn)炎癥因子如TNF-α和IL-6分泌，引起神經(jīng)毒性，TNF-α和IL-6再通過(guò)結(jié)合TLRs 激活NF-κB 信號(hào)通路引發(fā)細(xì)胞凋亡、壞死，后者又能繼續(xù)激活NLRP3炎癥復(fù)合體[15]，加劇最初的炎癥反應(yīng)，形成循環(huán)。

本研究結(jié)果顯示大劑量水楊酸納注射造成了大鼠聽(tīng)覺(jué)損傷，對(duì)照組和APL組中NLRP3 在SGN細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)量很低，SS組NLRP3、Caspase-1、IL-1β的mRNA轉(zhuǎn)錄水平在大鼠明顯損傷的SGN區(qū)域顯著升高，而通過(guò)抑制NLRP3炎性小體的活化后，SS+MCCP50組Caspase-1和IL-1β的轉(zhuǎn)錄表達(dá)減少，SGN的損傷減輕；各組SGN區(qū)域NLRP3、caspase-1、IL-1β表達(dá)差異變化與水楊酸鈉誘導(dǎo)的耳蝸組織細(xì)胞損傷死亡情況基本一致，說(shuō)明在動(dòng)物模型聽(tīng)覺(jué)損傷過(guò)程中，水楊酸鈉可能通過(guò)激活SGN聽(tīng)覺(jué)神經(jīng)元細(xì)胞中的NLRP3炎癥小體進(jìn)而調(diào)節(jié)下游Caspase-1、IL-1β的轉(zhuǎn)錄表達(dá)，從而損傷聽(tīng)覺(jué)系統(tǒng)，引起聽(tīng)力下降。結(jié)合本研究結(jié)果，推測(cè)上述病理途徑可能也與水楊酸鈉誘導(dǎo)的聽(tīng)覺(jué)損傷有關(guān)，SS誘導(dǎo)的SGN損傷可能涉及NLRP3相關(guān)炎性小體信號(hào)傳導(dǎo)途徑，即NLRP3炎性小體的激活導(dǎo)致了下游的Caspase-1活化和下游IL-1β和IL-18等靶標(biāo)的加工和釋放，這些炎癥因子的過(guò)量分泌最終導(dǎo)致聽(tīng)覺(jué)損傷。

NLRP3炎癥小體信號(hào)通路可以引發(fā)細(xì)胞焦亡，細(xì)胞焦亡是一種伴隨炎癥反應(yīng)的細(xì)胞程序性死亡方式，依賴(lài)于Gasdermin家族蛋白形成質(zhì)膜膜孔的可調(diào)控的細(xì)胞死亡[16]。本研究結(jié)果顯示SS組SGN細(xì)胞死亡率升高顯著，而本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)SS通過(guò)激活Caspase-3誘導(dǎo)豚鼠耳蝸SGN細(xì)胞凋亡，但經(jīng)特異性Caspase-3抑制劑處理后細(xì)胞死亡率減少并不明顯，提示可能有其他死亡途徑存在[17]。另有研究發(fā)現(xiàn)停止長(zhǎng)期水楊酸鹽應(yīng)用后14 天耳蝸核中TNF-α 和NR2B的表達(dá)水平恢復(fù)正常；而在急性注射水楊酸鹽2 小時(shí)后IL-1β mRNA 升高，停止水楊酸鹽14 天后仍未恢復(fù)正常[18]；而IL-1β與細(xì)胞凋亡程序密切相關(guān)，因此推測(cè)NLRP3炎癥小體激活引發(fā)的細(xì)胞焦亡程序可能也參與水楊酸鈉誘導(dǎo)的SGN損傷機(jī)制。然而細(xì)胞死亡的類(lèi)型并不由上游切割的蛋白酶決定，而是由下游的效應(yīng)分子決定，因此是否確實(shí)有細(xì)胞焦亡參與SGN的損傷過(guò)程仍需后續(xù)研究證實(shí)。

抑制炎癥小體的活化從而減輕由于持續(xù)的炎癥狀態(tài)而導(dǎo)致的聽(tīng)覺(jué)系統(tǒng)損傷或可提供一種新的治療策略。NLRP3特異性的小分子抑制劑MCC950已被證明是體內(nèi)和體外治療炎癥相關(guān)疾病的潛在方法[19]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示MCC950可抑制NLRP3和下游炎癥因子的激活，對(duì)SS誘導(dǎo)的SGN損傷有明顯的改善作用，故推測(cè)MCC950可能會(huì)抑制SS誘導(dǎo)耳蝸SGN炎癥級(jí)聯(lián)反應(yīng)，從而在抗炎和促炎反應(yīng)之間取得平衡。

綜上所述，水楊酸鈉誘導(dǎo)的SGN損傷與NLRP3炎性小體的持續(xù)活化密切相關(guān)，并可能發(fā)生細(xì)胞凋亡，NLRP3可能成為預(yù)防治療SGN損傷的潛在藥物靶標(biāo)。