周 櫻， 張 偉， 周峻崗， 呂 紅

(1.復旦大學 生命科學學院 上海工業(yè)菌株工程技術(shù)研究中心，上海 200438； 2.武漢新華揚生物股份有限公司，湖北武漢 430206)

在飼料“禁抗”不斷推進、畜牧業(yè)供給側(cè)改革的新常態(tài)下，開發(fā)安全、高效的抗生素替代產(chǎn)品成為當前畜牧和飼料產(chǎn)業(yè)的研究熱點.酵母是一種單細胞真菌，是人類歷史上應(yīng)用最早的微生物.酵母含有豐富的蛋白質(zhì)、氨基酸和維生素，酵母細胞壁含有多種具有益生功能的多糖成分，二者對于動物生長都具有一定的營養(yǎng)和保健作用.酵母衍生物及副產(chǎn)物在食品和飼料產(chǎn)業(yè)中已得到廣泛利用，而活菌酵母在飼料和畜禽養(yǎng)殖端中的應(yīng)用較少.

馬克斯克魯維酵母(Kluyveromycesmarxianus， Km)是一種非傳統(tǒng)酵母，屬于克魯維菌屬，廣泛存在于可食用的自然環(huán)境中，是一種食品安全級酵母.相比于傳統(tǒng)酵母，馬克斯克魯維酵母具有耐高溫、生長速率快、底物譜廣等優(yōu)點[1]，不僅可以發(fā)酵乳糖，更能對半乳糖進行利用[5].馬克斯克魯維酵母具有很強的酶生產(chǎn)能力，能夠用于生產(chǎn)菊粉酶、脂肪酶、半乳糖苷酶、葡萄糖苷酶、羧肽酶、氨肽酶、乳糖酶等十多種水解酶，在發(fā)酵和食品生產(chǎn)，特別是乳制品生產(chǎn)中應(yīng)用廣泛.目前，馬克斯克魯維酵母在畜禽養(yǎng)殖中的應(yīng)用效果未見報道.因此，本試驗旨在研究添加活性馬克斯克魯維酵母對肉雞生長性能、免疫器官指數(shù)、血清生化指標和腸道結(jié)構(gòu)的影響，為馬克斯克魯維酵母作為飼料添加劑在肉雞上的應(yīng)用提供參考.

1 材料與方法

1.1 試驗設(shè)計

選用525只1日齡Arbor Acre肉雞，公、母各半，隨機分成5個處理組，每組7個重復，每重復15羽，肉雞分別飼喂基礎(chǔ)粉料或在此基礎(chǔ)上添加2.5×1010，3.75×1010，1.875×1011和3.75×1011CFU/kg的活性馬克斯克魯維酵母.網(wǎng)欄平養(yǎng)，試驗期為42天.

1.2 試驗日糧與飼養(yǎng)管理

日糧設(shè)計參考國標《產(chǎn)蛋后備雞、產(chǎn)蛋雞、肉用仔雞配合飼料》(GB/T 5916-2008)，基礎(chǔ)日糧的組成及營養(yǎng)成分含量見表1.活性馬克斯克魯維酵母K.marxianusFIM-1為武漢新華揚生物股份有限公司產(chǎn)品.

表1 基礎(chǔ)日糧配方與養(yǎng)分含量(干物質(zhì)基礎(chǔ))

飼養(yǎng)試驗在新華揚生物股份有限公司黃湖養(yǎng)殖基地進行，室內(nèi)保持良好通風，室溫維持在22～25 ℃.雞舍及設(shè)備徹底清潔，待干燥后，用高錳酸鉀和甲醛熏蒸.肉仔雞地面平養(yǎng)，自由采食飲水.免疫程序和驅(qū)蟲程序按照雞場常規(guī)同步進行.保持固定的飼喂時間，每天3次，保證水源的充足、干凈.隨時觀察、記載雞只的采食和健康狀況.

1.3 樣品采集

于試驗第21天、第42天21:00停止供料，在試驗第22天、第43天07:00停水1 h后，以重復為單位稱取體重；每個重復隨機取1只雞稱活體重，翅靜脈采血4 mL置于普通采血管中靜置10 min，3 500 r/min離心15 min，將血清分裝于1.5 mL離心管并于4 ℃冰箱中保存，用于檢測血清生化指標、抗氧化指標.然后頸動脈放血處死，打開腹腔，迅速分離選取的十二指腸、空腸、回腸段，取各腸段中段1～2 cm腸段置于裝有甲醛固定液的10 mL離心管中，用于做切片檢測，觀察腸道形態(tài).

1.4 檢測指標及方法

1.4.1 生長性能指標

記錄每日的投料量及剩余料量.計算平均日采食量、平均日增重、耗料增重比.

日采食量(g/(d·羽))=∑[(每天投料量-每天余料量)/當天飼養(yǎng)量]/飼養(yǎng)天數(shù).

平均日增重(kg/(d·羽))=(平均末重-平均初重)/飼養(yǎng)天數(shù).

耗料增重比=試驗期總耗料/試驗期總增重.

1.4.2 血清生化指標

利用試劑盒和酶標儀測定血清中甘油三酯(TG)、總膽固醇(TC)、總蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、尿酸(UA)、尿素氮(BUN)、葡萄糖(GLU)、丙二醛(MDA)的含量，以及超氧化物歧化酶(SOD)活性.

1.4.3 免疫器官指數(shù)

試驗結(jié)束進行屠宰試驗時，取脾、胸腺和法氏囊，吸干血液，剔除脂肪后稱鮮重，計算免疫器官指數(shù).免疫器官指數(shù)=(免疫器官鮮重/雞活重)×100%.

1.4.4 腸道組織切片檢測

取出甲醛中固定的空腸、回腸、盲腸腸段，用石蠟包埋，采用伊紅-美藍對連續(xù)切片(5 mm)進行染色.切片在光學顯微鏡下觀察測量，從每張切片中隨機選取15根絨毛，分別測定絨毛高度和隱窩深度，并計算絨毛高度與隱窩深度及其比值.絨毛高度是指絨毛頂端到隱窩入口處，隱窩深度是指絨毛基部到黏膜下層做切片，觀察腸道形態(tài).

1.5 統(tǒng)計分析

試驗數(shù)據(jù)采用SPSS 16.0進行方差分析，以Duncan’s做多重比較.結(jié)果以平均值±標準偏差表示，P<0.05表示差異顯著.

2 結(jié) 果

2.1 添加活性馬克斯克魯維酵母對肉雞生長性能的影響

從表2中可以看出，與對照組相比，添加1.875×1011CFU/kg活性馬克斯克魯維酵母提高了1～21日齡、22～42日齡、1～42日齡肉雞的平均日采食量和平均日增重(P<0.05)，降低了22～42日齡、1～42日齡肉雞的耗料增重比(P<0.05)；添加3.75×1011CFU/kg活性馬克斯克魯維酵母提高了22～42日齡肉雞的平均日增重(P<0.05).

表2 添加活性馬克斯克魯維酵母對肉雞生長性能的影響

經(jīng)統(tǒng)計分析表明： 平均日采食量、平均日增重和耗料增重比與添加活性馬克斯克魯維酵母的水平呈現(xiàn)出一定的相關(guān)性，因此分別以平均日采食量、平均日增重和耗料增重比為因變量(y)，以添加活性馬克斯克魯維酵母水平為自變量(x)獲得相關(guān)的回歸方程.

1) 1～21日齡肉雞平均日采食量與添加活性馬克斯克魯維酵母水平呈現(xiàn)出二次項方程：y=-6×-23x2+2×10-11x+48.619(R2=0.937 8，N=7)；平均日增重與添加活性馬克斯克魯維酵母水平呈現(xiàn)出二次項方程：y=-7×10-23x2+3×10-11x+35.944(R2=0.960 2，N=7)；耗料增重比與添加活性馬克斯克魯維酵母水平呈現(xiàn)出二次項方程：y=9×10-25x2-4×10-13x+1.343 9(R2=0.959 5，N=7).

2) 22～42日齡肉雞平均日增重與添加活性馬克斯克魯維酵母水平呈現(xiàn)出二次項方程：y=-1×10-22x2+5×10-11x+74.096(R2=0.918 5，N=7)；

3) 1～42日齡肉雞平均日增重與添加活性馬克斯克魯維酵母水平呈現(xiàn)出二次項方程：y=-6×10-23x2+3×10-11x+55.704(R2=0.850 9，N=7)；耗料增重比與添加活性馬克斯克魯維酵母水平呈現(xiàn)出二次項方程：y=1×10-24x2-5×10-13x+1.719(R2=0.989 1，N=7).

2.2 添加活性馬克斯克魯維酵母對肉雞免疫器官指數(shù)的影響

從表3可以看出，與對照組相比，添加不同水平活性馬克斯克魯維酵母對肉雞脾臟指數(shù)、胸腺指數(shù)、法氏囊指數(shù)無顯著影響(P>0.05).

表3 添加活性馬克斯克魯維酵母對肉雞免疫器官指數(shù)的影響

2.3 添加活性馬克斯克魯維酵母對肉雞血清生化指標的影響

從表4可以看出，添加活性馬克斯克魯維酵母對肉雞血清中甘油三酯(TG)和尿酸氮(BUN)的含量沒有顯著影響；與對照組相比，添加1.875×1011CFU/kg活性馬克斯克魯維酵母提高了22日齡肉雞血清中總蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、血糖(GLU)的含量(P<0.05)，降低了22日齡肉雞血清中總膽固醇(TC)、尿酸(UA)和43日齡血清中UA含量(P<0.05)；添加3.75×1011CFU/kg活性馬克斯克魯維酵母提高了22日齡肉雞血清中TP、ALB含量(P<0.05).

經(jīng)統(tǒng)計分析表明，TP、ALB、TC、GLU和UA的含量與添加活性馬克斯克魯維酵母的水平呈現(xiàn)出一定的相關(guān)性，因此分別以TP、ALB、TC、GLU和UA的含量為因變量(y)，以添加活性馬克斯克魯維酵母水平為自變量(x)獲得相關(guān)的回歸方程.

1) 22日齡肉雞TP含量與添加活性馬克斯克魯維酵母水平呈現(xiàn)出二次項方程：y=-3×10-23x2+2×10-11x+32.636(R2=0.985 1，N=7)；ALB含量與添加活性馬克斯克魯維酵母水平呈現(xiàn)出二次項方程：y=-2×10-23x2+1×10-11x+17.503(R2=0.916 9，N=7)；TC含量與添加活性馬克斯克魯維酵母水平呈現(xiàn)出二次項方程：y=2×10-23x2-1×10-11x+4.255(R2=0.966 0，N=7)；GLU含量與添加活性馬克斯克魯維酵母水平呈現(xiàn)出二次項方程：y=-5×10-23x2+2×10-11x+10.831(R2=0.973 1，N=7)；UA含量與添加活性馬克斯克魯維酵母水平呈現(xiàn)出二次項方程：y=1×10-21x2-6×10-10x+303.360(R2=0.944 1，N=7).

2) 43日齡肉雞UA含量與添加活性馬克斯克魯維酵母水平呈現(xiàn)出二次項方程：y=9×10-22x2-4×10-10x+252.490(R2=0.688 6，N=7).

2.4 添加活性馬克斯克魯維酵母對肉雞血清抗氧化指標的影響

從表5可以看出，與對照組相比，添加1.875×1011CFU/kg活性馬克斯克魯維酵母提高了22日齡肉雞血清中超氧化物歧化酶(SOD)的活性(P<0.05).添加活性馬克斯克魯維酵母對肉雞血清中丙二醛(MDA)的含量無顯著影響.

表5 添加活性馬克斯克魯維酵母對肉雞血清抗氧化指標的影響

經(jīng)統(tǒng)計分析表明，SOD活性和MDA含量與添加活性馬克斯克魯維酵母的水平呈現(xiàn)出一定的相關(guān)性，因此分別以SOD和MDA為因變量(y)，以添加活性馬克斯克魯維酵母水平為自變量(x)獲得相關(guān)的回歸方程.

1) 22日齡肉雞SOD活性與添加活性馬克斯克魯維酵母水平呈現(xiàn)出二次項方程：y=-2×10-21x2+9×10-10x+423.850(R2=0.905 8，N=7)；

2) 43日齡肉雞MDA含量與添加活性馬克斯克魯維酵母水平呈現(xiàn)出二次項方程：y=7×10-24x2-2×10-12x+5.301(R2=0.957 8，N=7)；

2.5 添加活性馬克斯克魯維酵母對肉雞腸道結(jié)構(gòu)的影響

從表6可以看出，與對照組相比，添加不同水平活性馬克斯克魯維酵母提高了43日齡肉雞的十二指腸絨毛高度、絨毛高度與隱窩深度比值(P<0.05)；添加1.875×1011CFU/kg活性馬克斯克魯維酵母提高了22日齡肉雞的十二指腸絨毛高度與隱窩深度比值、回腸絨毛高度、回腸絨毛高度與隱窩深度比值(P<0.05)，以及43日齡肉雞的空腸絨毛高度、空腸絨毛高度與隱窩深度比值、回腸絨毛高度與隱窩深度比值(P<0.05)；添加3.75×1011CFU/kg活性馬克斯克魯維酵母提高了22日齡肉雞的十二指腸絨毛高度與隱窩深度比值、回腸絨毛高度(P<0.05)，提高了43日齡肉雞的回腸絨毛高度與隱窩深度比值(P<0.05).

表6 添加活性馬克斯克魯維酵母對肉雞腸道結(jié)構(gòu)的影響

經(jīng)統(tǒng)計分析表明： 肉雞的十二指腸絨毛高度、十二指腸絨毛高度/隱窩深度、空腸絨毛高度、空腸絨毛高度/隱窩深度、回腸絨毛高度和回腸絨毛高度/隱窩深度與添加活性馬克斯克魯維酵母的水平呈現(xiàn)出一定的相關(guān)性，因此分別以十二指腸絨毛高度、十二指腸絨毛高度/隱窩深度、空腸絨毛高度、空腸絨毛高度/隱窩深度、回腸絨毛高度和回腸絨毛高度/隱窩深度為因變量(y)，以添加活性馬克斯克魯維酵母水平為自變量(x)獲得相關(guān)的回歸方程.

1) 22日齡肉雞十二指腸絨毛高度/隱窩深度與添加活性馬克斯克魯維酵母水平呈現(xiàn)出二次項方程：y=-2×10-23x2+9×10-12x+5.846 1(R2=0.992 1，N=7)；回腸絨毛高度與添加活性馬克斯克魯維酵母水平呈現(xiàn)出二次項方程：y=-4×10-24x2+2×10-12x+0.733 3(R2=0.964 7，N=7)；回腸絨毛高度/隱窩深度與添加活性馬克斯克魯維酵母水平呈現(xiàn)出二次項方程：y=-3×10-23x2+1×10-11x+4.057 3(R2=0.950 1，N=7).

2) 43日齡肉雞十二指腸絨毛高度與添加活性馬克斯克魯維酵母水平呈現(xiàn)出二次項方程：y=-5×10-24x2+2×10-12x+1.588(R2=0.543，N=7)；十二指腸絨毛高度/隱窩深度與添加活性馬克斯克魯維酵母水平呈現(xiàn)出二次項方程：y=-2×10-23x2+8×10-12x+6.102 6(R2=0.557 7，N=7)；空腸絨毛高度與添加活性馬克斯克魯維酵母水平呈現(xiàn)出二次項方程：y=-6×10-24x2+3×10-12x+1.293(R2=0.864 5，N=7)；空腸絨毛高度/隱窩深度與添加活性馬克斯克魯維酵母水平呈現(xiàn)出二次項方程：y=-2×10-23x2+1×10-11x+5.414 4(R2=0.664 5，N=7)；回腸絨毛高度/隱窩深度與添加活性馬克斯克魯維酵母水平呈現(xiàn)出二次項方程：y=-3×10-23x2+1×10-11x+5.065(R2=0.906 4，N=7).

3 討 論

3.1 添加活性馬克斯克魯維酵母對肉雞生長性能的影響

酵母本身含有豐富的氨基酸、維生素營養(yǎng)，并能分泌多種酶類，使得酵母產(chǎn)品在飼料和畜牧生產(chǎn)中得到廣泛利用，在肉雞、蛋雞養(yǎng)殖中也多有研究報道.周小輝等[2]發(fā)現(xiàn)在三黃雞飼料中添加1%的復合酵母可顯著促進肉雞生長.王小民等[3]的研究證明在肉雞日糧中添加酵母可提高生長性能.朱金林等[4]研究證實肉雞日糧中添加復合酵母能夠改善生長性能，降低料重比.酵母菌與乳酸菌復合使用也能夠顯著改善肉仔雞的生長性能[5].此外，活性酵母還能夠刺激并提高肉雞腸道內(nèi)源消化酶的酶活，改善肉雞生長性能[6].馬克斯克魯維酵母能夠分泌多種分解酶，包括菊粉酶[7]、β-半乳糖苷酶和β-葡萄糖苷酶等[8]，有助于動物對飼料養(yǎng)分的消化利用.本試驗發(fā)現(xiàn)： 添加1.875×1011CFU/kg活性馬克斯克魯維酵母能顯著提高1～21日齡、22～42日齡、1～42日齡肉雞的平均日采食量和平均日增重，顯著降低了22～42日齡、1～42日齡肉雞的耗料增重比，結(jié)果與前人的研究結(jié)果[9]相似，表明活性馬克斯克魯維酵母有助于改善肉雞的生長性能.

3.2 添加活性馬克斯克魯維酵母對肉雞免疫器官指數(shù)的影響

家禽的免疫器官指數(shù)反映免疫功能的狀況，胸腺、脾臟、法式囊的器官指數(shù)可用于評價禽類的免疫狀態(tài)[10].一般認為，免疫抑制導致免疫器官重量降低，而免疫器官重量增加，則為免疫增強的表現(xiàn).有研究[11]發(fā)現(xiàn)酵母添加到肉雞日糧中能夠提高肉雞脾臟指數(shù).日糧添加酵母培養(yǎng)物能顯著提高脾臟指數(shù)和法氏囊指數(shù)[12].本試驗中，添加不同水平活性馬克斯克魯維酵母對肉雞各免疫器官的器官指數(shù)無顯著影響，可能是由于試驗動物、酵母菌種和酵母添加水平不一樣.

3.3 添加活性馬克斯克魯維酵母對肉雞血清生化指標的影響

血清生化指標的變化反映著機體的健康狀況.血清總蛋白主要包括白蛋白和球蛋白，白蛋白是血漿中含量最豐富的蛋白質(zhì)，具有維持滲透壓、運輸代謝產(chǎn)物、清除自由基、抗凝血等功能；球蛋白又叫做免疫血清球蛋白，包含多種免疫球蛋白和補體、多種糖蛋白，與機體免疫功能密切相關(guān).陳家祥[13]等的研究表明，肉雞飼糧中添加地衣芽孢桿菌能提高血清中總蛋白和白蛋白含量；在肉雛雞飼料中添加釀酒酵母，血清總蛋白含量顯著增加[14].本試驗中，添加1.875×1011CFU/kg活性馬克斯克魯維酵母顯著提高了22日齡肉雞血清中總蛋白、白蛋白含量，與前人研究結(jié)果[9]相似.甘油三酯的主要功能是供給與儲存能源，還可固定和保護內(nèi)臟.正常情況下血液中的甘油三酯保持著動態(tài)平衡.膽固醇不僅參與形成細胞膜，而且是合成膽汁酸、維生素D以及甾體激素的原料.當肝臟發(fā)生嚴重病變時，血液中膽固醇濃度會降低.而在黃疸性梗阻和腎病綜合征患者體內(nèi)，膽固醇濃度往往會升高.王仁華[14]報道肉雞日糧中添加2%釀酒酵母能顯著降低血清中膽固醇和甘油三酯含量.本試驗中，添加活性馬克斯克魯維酵母，血清甘油三酯含量未見顯著變化，添加1.875×1011CFU/kg活性馬克斯克魯維酵母顯著降低了22日齡肉雞血清中總膽固醇的含量.

3.4 添加活性馬克斯克魯維酵母對肉雞抗氧化能力的影響

SOD是生物體內(nèi)重要的抗氧化酶，是機體清除自由基的首要物質(zhì)，保護機體細胞免受自由基的損害，并能夠修復受損細胞[15].MDA是脂質(zhì)過氧化終產(chǎn)物，反映氧自由基介導的脂質(zhì)過氧化程度.正常狀態(tài)下，機體的自由基生成和清除處于動態(tài)平衡之中，但在應(yīng)激狀態(tài)時，動物體內(nèi)會產(chǎn)生過量自由基而導致氧化損傷.肉雞由于其生長和生理特點，體內(nèi)脂質(zhì)含量相對較高，易發(fā)生脂質(zhì)過氧化反應(yīng).研究表明，益生菌能夠顯著提高血清中SOD活性，顯著降低丙二醛含量[10].酵母培養(yǎng)物添加到肉仔雞日糧中，能夠顯著提高血清中SOD活性[16]，顯著降低MDA含量[17]，提高機體抗氧化能力.本試驗中，添加1.875×1011CFU/kg活性馬克斯克魯維酵母顯著提高了22日齡肉雞血清中SOD活性，MDA含量也有一定降低，表明馬克斯克魯維酵母能夠提高肉雞的抗氧化能力.

3.5 添加活性馬克斯克魯維酵母對肉雞腸道結(jié)構(gòu)的影響

小腸是動物機體對營養(yǎng)物質(zhì)進行消化吸收的主要場所.腸道絨毛是動物主要的消化吸收器官，當絨毛高度增加時，小腸的消化吸收功能增強；隱窩深度變淺時，機體消化道發(fā)育更成熟，因而絨毛高度與隱窩深度的比值增加也表明腸道消化吸收能力增強[18].研究發(fā)現(xiàn)，仔豬日糧中添加釀酒酵母可以提高仔豬腸道的消化吸收能力[19].徐基利等[20]的研究表明，日糧添加乳酸菌制劑能夠顯著提高小腸絨毛高度、腸壁厚度，顯著降低隱窩深度.酵母菌與乳酸菌復合使用能夠顯著提高空腸絨毛高度、絨毛高度與隱窩深度比值[5].本試驗中，添加不同水平活性馬克斯克魯維酵母提高了43日齡肉雞的十二指腸絨毛高度、絨毛高度與隱窩深度比值，添加1.875×1011CFU/kg活性馬克斯克魯維酵母提高了22日齡肉雞的十二指腸絨毛高度/隱窩深度、回腸絨毛高度、回腸絨毛高度/隱窩深度，以及43日齡肉雞的空腸絨毛高度、空腸絨毛高度/隱窩深度、回腸絨毛高度/隱窩深度，表明活性馬克斯克魯維酵母能夠改善肉雞的腸道結(jié)構(gòu).

4 結(jié) 論

本研究的結(jié)果表明： 日糧中添加活性馬克斯克魯維酵母能夠顯著改善肉雞的生長性能、血清生化指標、抗氧化能力和肉雞腸道結(jié)構(gòu)，其中添加水平為1.875×1011CFU/kg時效果最佳.