周偉　何云俠　廖良坤　李艷　付調(diào)坤　李如一　李積華　阮榕生

摘 ?要：研究不同濃度斜葉黃檀精油（0、5、10、15、20 mg/L）對(duì)制備的脂質(zhì)體穩(wěn)定性及其抑制斑馬魚胚胎黑色素合成的影響。通過(guò)粒徑、多分散系數(shù)、Zeta電位、包封率指標(biāo)來(lái)表征斜葉黃檀精油脂質(zhì)體，評(píng)價(jià)其在4 ℃下儲(chǔ)藏4周的穩(wěn)定性。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，10 mg/L的斜葉黃檀精油脂質(zhì)體在儲(chǔ)藏過(guò)程中最為穩(wěn)定，包封率達(dá)到最大，為45.10%±0.27%。斜葉黃檀精油脂質(zhì)體可呈濃度依賴式的降低斑馬魚胚胎的酪氨酸酶活性和黑色素含量;20 mg/L的斜葉黃檀精油脂質(zhì)體對(duì)斑馬魚胚胎的酪氨酸酶活性和黑色素含量的抑制作用與30 mg/L的斜葉黃檀精油的效果無(wú)顯著差異。本研究構(gòu)建了相對(duì)穩(wěn)定的斜葉黃檀精油脂質(zhì)體載體，研究了斜葉黃檀精油脂質(zhì)體的褪黑效果，為斜葉黃檀精油脂質(zhì)體作為皮膚增白劑的開發(fā)和利用提供了理論基礎(chǔ)。

關(guān)鍵詞：斜葉黃檀精油;脂質(zhì)體;斑馬魚胚胎;黑色素;酪氨酸酶

中圖分類號(hào)：S377 ? ? ?文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

Preparation of Dalbergia pinnata （Lour.） Prain Essential Oil Piposomes and Its Inhibition on Melanin Synthesis

ZHOU Wei1，2，3， HE Yunxia2， LIAO Liangkun2，3， LI Yan4， FU Tiaokun2，3， LI Ruyi2，3， LI Jihua2，3*， RUAN Roger1

1. State Key Laboratory of Food Science and Technology / College of Food Science & Technology， Nanchang University， Nanchang， Jiangxi 330047， China; 2. Agricultural Products Processing Research Institute， Chinese Academy of Tropical Agricultural Sciences / Key Laboratory of Tropical Crop Products Processing， Ministry of Agriculture and Rural Affairs， Zhanjiang， Guangdong 524001， China; 3. Hainan Key Laboratory of Storage & Processing of Fruits and Vegetables， Zhanjiang， Guangdong 524001， China; 4. College of Tropical Crops， Yunnan Agricultural University， Puer， Yunnan 665099， China

Abstract： The effect of Dalbergia pinnata （Lour.） Prain essential oil concentrations （0， 5， 10， 15， 20 mg/L） on the stability of prepared liposomes and the inhibition of melanin synthesis in zebrafish embryos was studied. The stability of liposome was evaluated by particle size， PDI， Zeta potential and encapsulation efficiency at 4 ℃ for 4 weeks. The results showed that 10 mg/L liposomes were most stable during storage and the encapsulation efficiency reached the maximum 45.10%±0.27%. D. pinnata （Lour.） Prain essential oil liposome could reduce the tyrosinase activity and melanin content of zebrafish embryos in a concentration-dependent manner. And the inhibition of 20 mg/L D. pinnata （Lour.） Prain essential oil liposome on the tyrosinase activity and melanin content of zebrafish embryos was not significantly different from that of 30 mg/L D. pinnata （Lour.） Prain essential oil. In this paper， a relatively stable carrier of D. pinnata （Lour.） Prain essential oil was constructed， and the anti-melanogenesis effect of D. pinnata （Lour.） Prain essential oil liposome was studied， which would provide a theoretical basis for the development and utilization of D. pinnata （Lour.） Prain essential oil liposome as a skin whitening agent.

Keywords： Dalbergia pinnata （Lour.） Prain essential oil; liposome; zebrafish embryo; melanin; tyrosinase

DOI： 10.3969/j.issn.1000-2561.2021.03.037

斜葉黃檀[Dalbergia pinnata （Lour.） Prain]為豆科黃檀屬植物，主產(chǎn)于廣西、海南等地，其木質(zhì)部富含豐富的芳香樹脂，是有名的傳統(tǒng)香料，與兩粵黃檀一起被民間稱為“降真香”。斜葉黃檀富含肉桂醛、欖香素等化合物，具有多種生物活性，能起到鎮(zhèn)痛、消炎、止血的作用[1]。斜葉黃檀精油[Dalbergia pinnata （Lour.） Prain essential oil]是由斜葉黃檀經(jīng)過(guò)萃取提煉而得，是其精華所在，亦可稱作降真香精油[2]。研究表明，斜葉黃檀精油具有褪黑、抗菌、抗氧化等功效[3]。但斜葉黃檀精油與其他植物精油類似，是一種油狀液體，具有易揮發(fā)，難溶于水，對(duì)溫度、紫外線敏感，暴露在空氣中易分解等缺點(diǎn)[4]，因此選擇一種合適的載體技術(shù)包埋精油十分必要。脂質(zhì)體（liposomes）是磷脂分散在水中形成的一種具有雙分子層結(jié)構(gòu)的封閉囊泡，可包裹親水和親脂性的藥物，對(duì)包埋物具有靶向、控釋和保護(hù)等作用，逐漸被廣泛應(yīng)用于化妝品、食品、農(nóng)業(yè)與醫(yī)藥等領(lǐng)域中[5]。通過(guò)脂質(zhì)體包埋可提高精油在水中的溶解性，保護(hù)其活性物質(zhì)，防止其在運(yùn)輸過(guò)程中被酶和免疫系統(tǒng)破壞，并提高其穩(wěn)定性[6];還具有緩釋作用，延長(zhǎng)被包埋物的殺菌作用[7-8]，并提高精油的生物利用度[9-10]。

黑色素的合成是生物體內(nèi)重要的新陳代謝，在其合成的過(guò)程中酪氨酸酶起到關(guān)鍵作用，酪氨酸酶的異常表達(dá)會(huì)引起皮膚色素沉著[11]。因此，可通過(guò)拮抗酪氨酸酶的催化活性或生物合成來(lái)有效地抑制黑色素生成?；谇捌谡n題組對(duì)斜葉黃檀精油抑制黑色素生成的活性研究[3]，本文采用乙醇注入法制備不同濃度的斜葉黃檀精油脂質(zhì)體，測(cè)定其粒徑、電位、包封率以及儲(chǔ)藏穩(wěn)定性，選出構(gòu)建較穩(wěn)定斜葉黃檀精油脂質(zhì)體的濃度;采用斑馬魚作為模型生物，通過(guò)觀察其形態(tài)及測(cè)定酪氨酸酶活性和黑色素含量，探究斜葉黃檀精油脂質(zhì)體在斑馬魚模型中對(duì)黑色素生成的抑制活性。

1 ?材料與方法

1.1 ?材料

斜葉黃檀精油：由海南天香文化有限公司提供（?？冢?，磷脂S75（大豆卵磷脂含的磷脂酰膽堿71%和磷脂酰乙醇胺10%）：德國(guó)Lipoid公司產(chǎn)品;膽固醇、吐溫80均采購(gòu)于索萊寶科技有限公司;氫氧化鈉、無(wú)水乙醇為分析純：國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司產(chǎn)品;3，4-二羥基苯丙氨酸（L-DOPA）購(gòu)于Sigma公司。

1.2 ?方法

1.2.1 ?斜葉黃檀精油脂質(zhì)體的制備 ?采用乙醇注入法制備斜葉黃檀精油脂質(zhì)體[12]，準(zhǔn)確稱取磷脂S75：0.5 g，膽固醇：0.1 g，吐溫80：0.128 g，斜葉黃檀精油：0、5、10、15、20 mg/L溶于15 mL乙醇溶液中。取50 mL蒸餾水，50 ℃預(yù)熱，將乙醇混合溶液逐滴加入到持續(xù)攪拌的蒸餾水中，置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中在45～50 ℃下減壓蒸發(fā)除去乙醇后定容到50 mL，放入超聲波清洗器中超聲20 min，即得到斜葉黃檀精油脂質(zhì)體，未添加斜葉黃檀精油為空白脂質(zhì)體。

1.2.2 ?粒徑、Zeta電位及PDI測(cè)定 ?精油脂質(zhì)體和空白脂質(zhì)體用去離子水稀釋10倍，采用馬爾文Zetaszier Nano-ZS測(cè)定平均粒徑、多分散系數(shù)（polydispersity index，PDI）以及Zeta電位，樣品測(cè)定前于25 ℃下平衡2 min。

1.2.3 ?斜葉黃檀精油脂質(zhì)體包封率的測(cè)定 ?參考Peng等[13]的測(cè)定方法并稍作修改，將1 mL脂質(zhì)體放入超濾管（分子截留值為100 kDa;Millipore， UK），并用蒸餾水稀釋，然后將脂質(zhì)體樣品以2000 r/min離心10 min（分離脂質(zhì)體和游離的斜葉黃檀精油），通過(guò)UV-Vis光譜法（UV 178，日本Shimadzu公司）測(cè)定吸光度并利用標(biāo)準(zhǔn)曲線確定未包埋的斜葉黃檀精油濃度。最后通過(guò)以下公式計(jì)算包封率：包封率=（Wt-Wf）/Wt×100%，其中，Wt為加入的斜葉黃檀精油的含量（mg），Wf為游離的斜葉黃檀精油含量（mg）。

1.2.4 ?斜葉黃檀精油脂質(zhì)體的儲(chǔ)藏穩(wěn)定性 ?將斜葉黃檀精油脂質(zhì)體樣品（上述1.2.1制備）于4 ℃下儲(chǔ)藏4周，每隔1周分別測(cè)定其粒徑、Zeta電位、PDI、包封率等指標(biāo)。

1.2.5 ?斑馬魚胚胎試驗(yàn) ?（1）斑馬魚胚胎繁殖及采集。將野生AB型斑馬魚（由廣東醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院的斑馬魚平臺(tái)提供）在實(shí)驗(yàn)室循環(huán)水產(chǎn)養(yǎng)殖系統(tǒng)中飼養(yǎng)。飼養(yǎng)條件為：室內(nèi)保持14 h（亮）/10 h（暗）光照控制，室溫26 ℃，水溫28 ℃。通過(guò)自然產(chǎn)卵獲得胚胎，傍晚時(shí)將成年斑馬魚按雌雄比1∶1放入孵化盒中，雌雄用隔板分開，次日抽掉隔板，2 h后進(jìn)行魚卵采集，選取發(fā)育正常的胚胎進(jìn)行試驗(yàn)。

（2）斑馬魚胚胎暴露實(shí)驗(yàn)。為了觀察在不同濃度脂質(zhì)體處理下斑馬魚體內(nèi)黑色素生成情況，將收集的胚胎放入含有胚胎水的6孔板中，于28 ℃的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。24 hpf，將斑馬魚胚胎分別轉(zhuǎn)移到含斜葉黃檀精油（30 mg/L），脂質(zhì)體（0、5、10、15、20 mg/L）的新鮮胚胎水中。48 hpf，使用倒置熒光顯微鏡觀察到不同的黑色素抑制劑對(duì)斑馬魚色素沉著的影響[14]，并拍照記錄。

（3）斑馬魚胚胎中酪氨酸酶活性的測(cè)定。分別收集不同濃度藥物處理24 h的幼魚，將30個(gè)胚胎放入裝有300 μL冷裂解液緩沖液的EP管中，然后在冰浴條件下超聲處理35 s（超聲探頭2 mm，超聲5 s，間斷10 s），之后在4 ℃下以10000 r/min離心15 min。取20 μL粗酶加入到含有180 μL L-DOPA的96板孔中，在37 ℃的黑暗處孵育30 min后，于475 nm下測(cè)量吸光度[15]?？瞻讓?duì)照組的酪氨酸酶相對(duì)活性表示為100%，樣品的酪氨酸酶活性表示為與對(duì)照組相比的百分?jǐn)?shù)。每一樣品濃度設(shè)3個(gè)復(fù)孔，取平均值。

（4）斑馬魚胚胎中黑色素含量的測(cè)定。將前述“（3）”中離心獲得的沉淀物溶于300 μL NaOH（1 mol/L）中，將EP管口用封口膜封好，95 ℃干浴30 min，用酶標(biāo)儀在405 nm下測(cè)量吸光度。相對(duì)黑色素含量表示為：樣品組OD405/空白對(duì)照組OD405× 100%。

1.3 ?數(shù)據(jù)處理

每組實(shí)驗(yàn)至少3組平行，實(shí)驗(yàn)結(jié)果用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示，應(yīng)用SPSS 22.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，采用t檢驗(yàn)。

2 ?結(jié)果與分析

2.1 ?斜葉黃檀精油脂質(zhì)體的制備及表征

通過(guò)測(cè)定粒徑、Zeta電位、PDI及包封率對(duì)所制備的不同濃度斜葉黃檀精油脂質(zhì)體進(jìn)行表征結(jié)果見表1。由表1可見，隨著斜葉黃檀精油的濃度不斷增大，其粒徑不斷增加，這可能是由于脂質(zhì)體包裹了更多的精油，從而引起其粒徑增加。Cui等[16]研究發(fā)現(xiàn)隨著包埋的丁香精油的濃度不斷增加，脂質(zhì)體的粒徑也逐漸增加?？瞻字|(zhì)體Zeta電位約為?44.0 mV，而斜葉黃檀精油脂質(zhì)體的Zeta電位的絕對(duì)值均小于空白脂質(zhì)體的，Zeta電位的差異可能是由于斜葉黃檀精油插入到脂質(zhì)膜中造成的。因?yàn)樵谥|(zhì)體囊泡形成過(guò)程中，囊泡的穩(wěn)定性和磷脂的分布受到磷脂磷酸端大小、磷脂親水端極性及精油在膜內(nèi)的堆積等因素的影響[17]。斜葉黃檀精油的添加降低了脂質(zhì)體Zeta電位的絕對(duì)值，從而可能會(huì)影響脂質(zhì)體的穩(wěn)定性[18]。PDI即多分散系數(shù)，可表示脂質(zhì)體顆粒的均一程度。PDI越大，表明脂質(zhì)體直徑分布越寬，越不均勻;PDI越小，脂質(zhì)體直徑分布越集中、均勻。PDI數(shù)值在0～0.3范圍內(nèi)，表明體系具有均勻的分散性[19]。而制備的斜葉黃檀脂質(zhì)體PDI均在0.2左右，說(shuō)明其分散性良好。當(dāng)精油濃度小于10 mg/L時(shí)，脂質(zhì)體包封率會(huì)隨著精油濃度的升高而增大，當(dāng)精油濃度增至10 mg/L時(shí)，脂質(zhì)體包封率達(dá)到最大值，為45.10%±0.27%;然而精油濃度持續(xù)增加時(shí)，脂質(zhì)體包封率逐漸下降。這可能是由于斜葉黃檀精油濃度進(jìn)一步升高，一定量的磷脂形成的脂質(zhì)體對(duì)斜葉黃檀精油的包封能力是有限的，這一能力主要與包封物質(zhì)的性質(zhì)有關(guān)，當(dāng)斜葉黃檀精油過(guò)多，超過(guò)脂質(zhì)膜的飽和度，包封率反而會(huì)下降[17]。

2.2 ?斜葉黃檀精油脂質(zhì)體的穩(wěn)定性評(píng)價(jià)

將脂質(zhì)體在4 ℃下儲(chǔ)藏4周，通過(guò)測(cè)定粒徑、PDI和Zeta電位指標(biāo)來(lái)考察斜葉黃檀精油脂質(zhì)體的儲(chǔ)藏穩(wěn)定性。從圖1可見，隨著儲(chǔ)藏時(shí)間的延長(zhǎng)，斜葉黃檀精油脂質(zhì)體的粒徑呈現(xiàn)出不斷增加的趨勢(shì)。尤其是濃度為20 mg/L的脂質(zhì)體增幅最為明顯，儲(chǔ)藏4周后粒徑由原來(lái)的214.6 nm增加至573.8 nm;而10 mg/L的脂質(zhì)體粒徑增幅最小，由原來(lái)的204.4 nm增加至273.9 nm。Zeta電位是表征膠體分散系穩(wěn)定性的重要指標(biāo)，Zeta電位絕對(duì)值越大，體系越穩(wěn)定，即溶解或分散可以抵抗聚集[20]。保存4周后，斜葉黃檀精油脂質(zhì)體均保持負(fù)電荷，Zeta電位的絕對(duì)值在30～40 mV左右，表明其均相對(duì)穩(wěn)定。10 mg/L的斜葉黃檀精油制備的脂質(zhì)體的粒徑變化幅度最小，電位的絕對(duì)值約為30～40 mV，無(wú)顯著變化，PDI約為0.2～0.3，說(shuō)明所制備的脂質(zhì)體的體系在儲(chǔ)藏過(guò)程中具有良好的穩(wěn)定性。

2.3 ?斜葉黃檀精油脂質(zhì)體對(duì)黑色素合成的影響

2.3.1 ?斜葉黃檀精油脂質(zhì)體對(duì)斑馬魚黑色素細(xì)胞的形態(tài)學(xué)影響 ?將24 hpf的斑馬魚胚胎經(jīng)過(guò)斜葉黃檀精油（30 mg/L）及斜葉黃檀精油脂質(zhì)體（0、5、10、15、20 mg/L）處理24 h，結(jié)果見圖2?？瞻讓?duì)照組中，在斑馬魚胚胎的脊柱，眼睛和卵黃囊的上下兩側(cè)可明顯觀察到大量的黑點(diǎn)，這是沉積在斑馬魚胚胎中的黑色素。與對(duì)照組相比，用斜葉黃檀精油脂質(zhì)體處理24 h的斑馬魚胚胎的黑色素生長(zhǎng)都有不同程度的減少，且隨著脂質(zhì)體中斜葉黃檀的含量不斷增加，其黑色素的總量是逐漸減少的。尤其是用20 mg/L的斜葉黃檀精油脂質(zhì)體處理的斑馬魚，其黑色素明顯減少，沒(méi)有明顯的黑色素沉著點(diǎn)。同時(shí)可以看出，用30 mg/L的斜葉黃檀精油處理的斑馬魚，無(wú)論從背面還是側(cè)面觀察，黑色素含量明顯下降，且其黑色素沉著與20 mg/L的斜葉黃檀精油脂質(zhì)體樣品處理的斑馬魚差別不大。

2.3.2 ?精油脂質(zhì)體對(duì)斑馬魚胚胎酪氨酸酶活性和相對(duì)黑色素含量的影響 ?斜葉黃檀精油脂質(zhì)體對(duì)斑馬魚黑色素細(xì)胞酪氨酸酶活性具有抑制作用，隨著脂質(zhì)體中斜葉黃檀精油濃度的不斷增加，酪氨酸酶的活性逐漸降低，與空白對(duì)照組相比，當(dāng)濃度為0 mg/L時(shí)，差異不顯著;5～20 mg/L處理組酪氨酸酶的活性均被顯著抑制（圖3A）。與空白對(duì)照組相比，當(dāng)脂質(zhì)體濃度為5～20 mg/L時(shí)，均顯著抑制了斑馬魚的黑色素生成，且作用呈濃度依賴性，當(dāng)濃度為20 mg/L時(shí)，其抑制作用最強(qiáng)（圖3B）。同時(shí)可以看出，用20 mg/L的精油脂質(zhì)體所處理的斑馬魚黑色素含量與用30 mg/L的精油處理的斑馬魚無(wú)顯著差異，說(shuō)明經(jīng)脂質(zhì)體包裹后的斜葉黃檀精油抑制黑色素合成的效果顯著增強(qiáng)。

3 ?討論

脂質(zhì)體是通過(guò)磷脂和膽固醇在水性介質(zhì)中的自組裝形成的具有封閉雙層結(jié)構(gòu)的球形囊泡，其具有生物相容性，可生物降解，非免疫原性且無(wú)毒。采用脂質(zhì)體包裹斜葉黃檀精油，可有效改善其溶解度和化學(xué)穩(wěn)定性，從而提高其生物利用性[21]。

本研究利用脂質(zhì)體對(duì)斜葉黃檀精油進(jìn)行包埋，以提高其理化穩(wěn)定性和精油的生物利用率。通過(guò)對(duì)粒徑、電位、PDI、包封率等指標(biāo)的考察，發(fā)現(xiàn)當(dāng)脂質(zhì)體包埋的斜葉黃檀精油濃度為10 mg/L時(shí)，制備的脂質(zhì)體平均粒徑為（204.4±3.6）nm，Zeta電位為（?35.0±0.7）mV，PDI為0.213±0.029，包封率達(dá)到最大值45.10%±0.27%，各項(xiàng)指標(biāo)較為理想。經(jīng)過(guò)4周的穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)表明，10 mg/L脂質(zhì)體的粒徑變化幅度最小，Zeta電位和PDI均無(wú)顯著性變化，說(shuō)明所制備的脂質(zhì)體的體系相對(duì)比較穩(wěn)定。趙呈婷等[22]采用波薄膜-超聲分散法制備了丁香精油脂質(zhì)體，通過(guò)研究發(fā)現(xiàn)當(dāng)丁香精油濃度為5 mg/mL時(shí)，其穩(wěn)定性最好。通過(guò)原子力顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)丁香精油脂質(zhì)體的顆粒分散均勻、無(wú)明顯聚集現(xiàn)象，而且丁香精油脂質(zhì)體具有長(zhǎng)效殺菌作用。

斑馬魚因全身?xiàng)l紋似斑馬而得名，屬于輻鰭亞綱鯉科短擔(dān)尼魚屬。斑馬魚擁有與人類相似的黑素細(xì)胞和黑素體，因周身透明，色素細(xì)胞在個(gè)體發(fā)育過(guò)程中易被識(shí)別、觀察，而且斑馬魚屬低溫低氧魚，飼養(yǎng)容易，產(chǎn)卵量大，具有較強(qiáng)的耐寒性和耐熱性，因此在黑素細(xì)胞相關(guān)研究中有不可替代的作用[23-24]。因此，本研究以斑馬魚為動(dòng)物模型，以L-DOPA為底物，測(cè)定斜葉黃檀精油脂質(zhì)體對(duì)酪氨酸酶活性和黑色素合成的影響。結(jié)果表明，斜葉黃檀精油脂質(zhì)體可顯著抑制斑馬魚胚胎的酪氨酸酶活性以及黑色素的沉著，且20 mg/L的斜葉黃檀精油脂質(zhì)體對(duì)斑馬魚胚胎的酪氨酸酶活性和黑色素含量的抑制作用與30 mg/L的斜葉黃檀精油的效果無(wú)顯著差異。本研究為制備更加穩(wěn)定且更好生理活性的斜葉黃檀精油載體劑型提供了理論指導(dǎo)，對(duì)其在制藥和化妝品工業(yè)中用作皮膚增白劑提供了一個(gè)新的選擇。

參考文獻(xiàn)

[1] 廖良坤， 張?zhí)K慧， 周 ?偉， 等. 斜葉黃檀精油功能活性[J]. 食品工業(yè)科技， 2018， 39（19）： 45-51.

[2] 張?zhí)K慧， 廖良坤， 魏曉奕， 等. 超臨界CO2萃取斜葉黃檀精油工藝優(yōu)化及精油成分分析[J]. 熱帶作物學(xué)報(bào)， 2018， 39（4）： 791-794.

[3] Zhou W， He Y X， Lei X L， et al. Chemical composition and evaluation of antioxidant activities， antimicrobial， and anti-melanogenesis effect of the essential oils extracted from Dalbergia pinnata （Lour.） Prain[J]. Journal of Ethnopharmacology， 2020， 254： 112731.

[4] Cui H Y， Li W， Li C Z， et al. Intelligent release of cinnamon oil from engineered proteoliposome via stimulation of Bacillus cereus protease[J]. Food Control， 2016， 67： 68-74.

[5] Riham Gharib， Hélène Greige-Gerges， Sophie Fourmentin， et al. Liposomes incorporating cyclodextrin–drug inclusion complexes： Current state of knowledge[J]. Carbohydrate Polymers， 2015， 129： 175-186.

[6] Hammoud Zahraa， Gharib Riham， Fourmentin Sophie， et al. New findings on the incorporation of essential oil components into liposomes composed of lipoid S100 and cholesterol[J]. International Journal of Pharmaceutics， 2019， 561： 161-170.

[7] 樂(lè)文慧， 黃早成， 肖蘇堯， 等. 白藜蘆醇固體脂質(zhì)體制備工藝研究[J]. 食品科學(xué)， 2010， 31（18）： 59-62.

[8] Lin L， Zhang X， Zhao C， et al. Liposome containing nutmeg oil as the targeted preservative against Listeria monocyto-genes in dumplings[J]. Rsc Adv， 2016， 6（2）： 978-986.

[9] 陶 ?紫. 香茅草精油微乳體系的構(gòu)建及其抗氧化和抗腫瘤細(xì)胞活性的研究[D]. 廣州： 華南理工大學(xué)， 2018.

[10] Mura S， Nicolas J， Couvreur P. Stimuli-responsive nanocar-riers for drug delivery[J]. Nature Materials， 2013， 12（11）： 991-1003.

[11] Liang Y F， Sun L， Wee Ser， et al. Classification of non-tumorous skin pigmentation disorders using voting based probabilistic linear discriminant analysis[J]. Com-puters in Biology and Medicine， 2018， 99： 123-132.

[12] Sebaaly C， Jraij A， Fessi H， et al. Preparation and characterization of clove essential oil-loaded lipo?somes[J]. Food Chemistry， 2015， 178： 52-62.

[13] Peng S F， Zou L Q， Liu W， et al. Storage stability and anti-bacterial activity of eugenol nanoliposomes prepared by an ethanol injection-dynamic high-pressure microfluidization method[J]. Journal of Food Protection， 2015， 78（1）： 22-30.

[14] Taylor K L， Lister J A， Zeng Z Q， et al. Differentiated melanocyte cell division occurs in vivo and is promoted by mutations in Mitf[J]. Development， 2011， 138（16）： 3579- 3589.

[15] Chen Y M， Su W C， Li C， et al. Anti-melanogenesis of novel kojic acid derivatives in B16F10 cells and zebrafish[J]. In?ternational Journal of Biological Macromolecules， 2019， 123： 723-731.

[16] Cui H Y， Zhao C T， Lin L. The specific antibacterial activity of liposome-encapsulated clove oil and its application in tofu[J]. Food Control， 2015， 56： 128-134.

[17] 葛 ?彥. 茶樹精油脂質(zhì)體/殼聚糖緩釋抗菌材料的制備及性能研究[D]. 無(wú)錫： 江南大學(xué)， 2015.

[18] 周 ?偉， 劉瑋琳， 劉 ?偉， 等. 不同因素對(duì)中鏈脂肪酸脂質(zhì)體Zeta電位的影響[J]. 食品科學(xué)， 2012， 33（19）： 128-132.

[19] Wannes W A， Mhamdi B， Sriti J， et al. Antioxidant activities of the essential oils and methanol extracts from myrtle （Myrtus communis var. italica L.） leaf， stem and flower[J]. Food and Chemical Toxicology， 2010， 48（5）： 1362-1370.

[20] Zhong Y， Wang J， Wang Y， et al. Preparation and evaluation of liposome-encapsulated codrug LMX[J]. International Journal of Pharmaceutics， 2012， 438（1-2）： 240-248.

[21] Detoni C B， de Oliveira D M， Santo I E， et al. Evaluation of thermal-oxidative stability and antiglioma activity of Zanthoxylum tingoassuiba essential oil entrapped into multi- and unilamellar liposomes[J]. J Liposome Res， 2012， 22（1）： 1-7.

[22] 趙呈婷. 刺激響應(yīng)型丁香精油脂質(zhì)體對(duì)金黃色葡萄球菌的抑制作用及其在豆制品中的應(yīng)用研究[D]. 鎮(zhèn)江：江蘇大學(xué)， 2016.

[23] 王天晶， 羅光浦， 劉子君， 等. 菟絲子水提物對(duì)黑色素合成的影響[J]. 皮膚科學(xué)通報(bào)， 2017， 34（6）： 679-683.

[24] 陸 ?彬， 樓鴛鴦， 陳楚楚， 等. 熊果苷抑制斑馬魚胚胎黑色素合成的研究[J]. 湖南科技大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版）， 2015， 30（1）： 116-120.

責(zé)任編輯：沈德發(fā)

收稿日期 ?2020-04-21;修回日期 ?2020-05-21

基金項(xiàng)目 ?海南省自然科學(xué)基金項(xiàng)目（No. 220RC701）;中國(guó)熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院基本科研業(yè)務(wù)費(fèi)專項(xiàng)（No. 1630122017017）;以農(nóng)業(yè)領(lǐng)域?yàn)閱卧膹V東省現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)共性關(guān)鍵技術(shù)研發(fā)創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)建設(shè)項(xiàng)目（No. 2019KJ117）。

作者簡(jiǎn)介 ?周 ?偉（1987—），男，博士研究生，副研究員，研究方向：熱帶食品加工與貯藏。*通信作者（Corresponding author）：李積華（LI Jihua），E-mail：foodpaper@126.com。