牛艷，吳燕，楊靜，姜瑞，王曉菁

(寧夏農(nóng)林科學院，寧夏 銀川 750002)

烯酰嗎啉(dimethomorph)是嗎啉類低毒廣譜性殺菌劑[1]，通過破壞細胞壁膜的形成，對各個階段的卵菌都有滅菌作用，特別是在孢子囊梗和卵孢子的形成階段作用更明顯，從而引起孢子囊壁的分解，達到殺菌的目的[2]。烯酰嗎啉在國內(nèi)市場迅速得到開發(fā)，使用量大幅度上升，現(xiàn)在已經(jīng)是霜霉病、疫病的最大使用藥劑[3]，可用于葡萄、煙草、黃瓜、馬鈴薯等作物[4-7]。霜霉病在葡萄上的發(fā)生極其頻繁，危害嚴重，通過對20%烯酰嗎啉懸浮劑室內(nèi)毒力測定表明，該藥劑對寧夏賀蘭山東麓的葡萄霜霉病菌的生長具有良好的抑制作用[8]。隨著人們對葡萄質(zhì)量安全和生產(chǎn)環(huán)境的日益重視，開展烯酰嗎啉在葡萄上殘留實驗及安全評估十分必要。

目前關(guān)于烯酰嗎啉殘留的檢測方法及消解動態(tài)國內(nèi)外已有相關(guān)研究[9-13]，劉河疆等[14]開展了新疆鮮食葡萄產(chǎn)區(qū)農(nóng)藥殘留膳食攝入風險評估研究，結(jié)果表明，新疆鮮食葡萄檢出的農(nóng)藥均為低風險農(nóng)藥，慢性和急性膳食攝入風險均較低。張文等[15]對蘭州市售葡萄中39種農(nóng)藥殘留水平進行分析及風險評估，結(jié)果表明，蘭州市售葡萄中農(nóng)藥的慢性膳食攝入風險總體較低，風險可控。然而對于烯酰嗎啉在賀蘭山東麓葡萄上的殘留消解規(guī)律、最終殘留實驗及風險狀況分析還未見報道。本研究開展了烯酰嗎啉在葡萄上殘留消解規(guī)律及最終殘留實驗的研究，應用超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀對殘留實驗葡萄樣品中烯酰嗎啉的殘留進行檢測，并對其膳食暴露風險進行評估。研究對于提升葡萄產(chǎn)品質(zhì)量和環(huán)境質(zhì)量，確保葡萄產(chǎn)業(yè)安全、健康發(fā)展具有推動作用。

1 材料與方法

1.1 儀器設(shè)備與試劑

超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀(TSQ QUANTUM ACCESS MAX，配ESI源，美國Thermo公司)；營養(yǎng)調(diào)理機(惠爾寶公司)；電子天平(精度0.01 g，瑞士梅特勒公司)；漩渦混勻器(德國IKA公司)；恒溫振蕩器(國華企業(yè))；離心機(TD-40L，上海安亭)。烯酰嗎啉標準品購于農(nóng)業(yè)農(nóng)村部環(huán)境保護科研監(jiān)測所；乙腈和甲醇均為色譜純；水為一級；氯化鈉為分析純；N-丙基乙二胺(PSA)(德國CNW公司)；80%烯酰嗎啉水分散粒劑(陜西美邦農(nóng)藥有限公司)。

1.2 處理設(shè)計

根據(jù)農(nóng)藥登記殘留田間實驗標準操作規(guī)程[16]要求，對葡萄開展田間實驗。

1.2.1 消解動態(tài)

在寧夏銀川和安徽宿州選擇未施用烯酰嗎啉的實驗小區(qū)，按照NY/T 788—2018《農(nóng)藥殘留實驗準則》[17]的要求，以制劑800倍液于葡萄果實生長到成熟個體一半大小時施藥1次，于施藥后2 h、1 d、2 d、3 d、5 d、7 d、10 d、14 d、21 d、30 d、45 d采集葡萄果實。各小區(qū)間設(shè)保護帶，另設(shè)空白對照小區(qū)。隨機法采集葡萄的果實，每次每棵樹采集葡萄8～10串果實，不少于2 kg。將樣品棄去病株、殘株，除去果梗，縮分后留取300 g，裝入樣品袋，標簽標記后，-20 ℃低溫保存待用。

1.2.2 最終殘留

設(shè)置高低2個施藥劑量，低劑量按制劑3 200倍稀釋，高劑量按制劑2 133倍稀釋。設(shè)2次施藥和3次施藥2個處理。按照實驗設(shè)計時間開始第1次施藥，施藥間隔期7 d。采樣時間為距離最后一次施藥的間隔時間為7 d、14 d、21 d、28 d。各小區(qū)間設(shè)保護帶，另設(shè)空白對照小區(qū)。樣品采集同上。

1.3 樣品處理

稱取經(jīng)高速勻漿后的葡萄樣品10.00 g于50 mL離心管中，加入20 mL乙腈，在振蕩器振蕩提取1 h后，加入5 g氯化鈉，手動搖勻1 min，放置離心機中3 000 r·min-1離心5 min，取上清液2.0 mL于提前稱取好150 mg PSA的10 mL試管中，渦旋凈化后離心，上層液用0.22 μm針式有機濾膜過濾，吸取200 μL過濾液用甲醇定容至1.00 mL，裝入2 mL進樣小瓶中，待測。

1.4 檢測條件

使用超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀對葡萄樣品進行烯酰嗎啉殘留檢測。檢測條件如下，使用色譜柱為Xterra MS-C18色譜柱(100 mm×2.1 mm，3.5 μm；Waters公司)；柱溫初始溫度為40 ℃；進樣量為1.0 μL；流速為0.3 mL·min-1；流動相為甲醇水溶液；傳輸汽化溫度為300 ℃；輔助氣流速為10 mL·min-1；鞘氣流速為30 mL·min-1；掃描方式為SRM(正)；電壓為3 500 V。

2 結(jié)果與分析

2.1 標準曲線及定量限

將1 000 mg·L-1的烯酰嗎啉標準樣品用甲醇稀釋配得0.01、0.02、0.05、0.10、0.20、0.50 mg·L-1系列標準溶液。在0.01～0.50 mg·L-1，標樣曲線y=3×106x+16 963，線性相關(guān)r=0.999 0。量取0.01 mg·L-1標準溶液色譜圖的峰高(圖1)，以3倍信噪比計算得到本方法檢出限為0.003 mg·kg-1，定量限為0.01 mg·kg-1。

RT、AA、SN分別代表保留時間、峰面積、信噪比。圖2同。

2.2 加標回收及精密度

試驗結(jié)果表明，烯酰嗎啉農(nóng)藥添加質(zhì)量濃度0.01 mg·L-1時，平均回收率93.0%，相對標準偏差11.1%；添加質(zhì)量濃度1.0 mg·L-1時，平均回收率88.4%，相對標準偏差9.5%；添加質(zhì)量濃度5.0 mg·L-1時，平均回收率92.4%，相對標準偏差3.1%。添加譜圖見圖2。

圖2 葡萄樣品中烯酰嗎啉殘留量測定色譜

2.3 消解動態(tài)及最終殘留

對消解動態(tài)結(jié)果進行分析發(fā)現(xiàn)，葡萄中烯酰嗎啉消解動態(tài)曲線均呈指數(shù)函數(shù)關(guān)系。寧夏葡萄樣品的消解方程為Ct=7.612 4e-0.038t，半衰期為18.2 d，r=-0.931 5；安徽葡萄樣品消解方程為Ct=2.623 4e-0.064t，半衰期為10.8 d，r=-0.933 8，消解率最終達到95%，葡萄中烯酰嗎啉的殘留量隨時間逐漸減少。

在最后一次施藥后間隔時間為7、14、21、28 d采集的最終殘留葡萄，對最終殘留結(jié)果進行分析發(fā)現(xiàn)，烯酰嗎啉在葡萄中的殘留量分別為0.081～4.500、0.024～2.970、0.014～2.700和0.010～1.540 mg·kg-1，殘留實驗中值分別為0.27、0.46、0.13和0.36 mg·kg-1。烯酰嗎啉農(nóng)藥最終殘留量隨著采樣時間的延遲呈逐步降低趨勢，殘留量與施藥次數(shù)和施藥量均相關(guān)，隨著施藥次數(shù)和施藥量的增加，殘留量增大。

2.4 風險狀況分析

烯酰嗎啉在我國菠菜、番茄、黃瓜、辣椒、馬鈴薯、葡萄等作物上已有農(nóng)藥殘留登記，根據(jù)《農(nóng)藥每日允許攝入量制定指南》《農(nóng)藥殘留風險評估指南》及衛(wèi)生部2002年發(fā)布的《中國不同人群消費膳食分組食譜》或權(quán)威參考資料中的膳食結(jié)構(gòu)數(shù)據(jù)，基于殘留實驗數(shù)據(jù)開展膳食攝入風險評估，采用安全間隔期14 d采集樣品的殘留中值0.46 mg·kg-1，依據(jù)GB 2763—2019[18]，查詢烯酰嗎啉每日允許攝入量(ADI)值為0.2 mg·kg-1體重(bw)及其在其他食物中的限量值，人群平均體重按照63 kg計算[19]，結(jié)果見表1。普通人群烯酰嗎啉的國家估算每日攝入量(NEDI)為3.68 mg，日允許攝入量為12.6 mg，采用ADI%計算烯酰嗎啉的慢性膳食攝入風險。烯酰嗎啉的國家估算每日攝入量占日允許攝入量的29%，慢性膳食攝入風險概率是29%，結(jié)果表明，烯酰嗎啉在葡萄上的殘留量通常不會對一般人群健康產(chǎn)生不可接受的風險，屬于低風險狀態(tài)。

表1 烯酰嗎啉膳食風險評估情況

3 小結(jié)與討論

用乙腈對葡萄樣品進行提取，采用PSA凈化，超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀檢測，通過對烯酰嗎啉農(nóng)藥在葡萄中進行3個添加水平實驗，結(jié)果表明，其平均回收率為88%～93%，相對標準偏差為3.1%～11.1%，符合農(nóng)殘分析的要求[20-21]。烯酰嗎啉在寧夏、安徽兩地葡萄中的半衰期分別為18.2 和10.8 d，消解曲線符合一級動力學方程Ct=Coe-kt(式中，K為降解速率常數(shù)；C0為農(nóng)藥的初始濃度；Ct為t時刻農(nóng)藥的濃度；t為時間；e是自然對數(shù)的底數(shù))。通過最終殘留實驗，制劑用藥量2 133～3 200倍液，施藥2～3次，采集距末次施藥間隔7、14、21、28 d的最終殘留量為0.01～4.50 mg·kg-1。烯酰嗎啉在葡萄中慢性膳食攝入風險為29%，安全間隔期14 d之后烯酰嗎啉在葡萄中的殘留量處于低風險狀態(tài)。