杜鵬程，韓 璠，谷九蓮

(新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院第三附屬醫(yī)院消化科，河南 新鄉(xiāng) 453003)

潰瘍性結(jié)腸炎(ulcerative colitis,UC)是一種常見的消化系統(tǒng)疾病，其主要臨床癥狀為腹痛、腹瀉、便血等，對(duì)患者的生活質(zhì)量造成了較大的負(fù)面影響[1]。近年來，隨著人們飲食習(xí)慣的改變，UC發(fā)生率呈升高趨勢(shì)，有統(tǒng)計(jì)顯示，我國UC發(fā)病率為 0.2%～0.5%[2]。UC的病因及發(fā)生機(jī)制尚未完全明確，多數(shù)學(xué)者認(rèn)為患者的生活環(huán)境、免疫力、精神狀況、遺傳基因及腸道菌群等與該病的發(fā)生有密切關(guān)系，腸道菌群結(jié)構(gòu)與UC的關(guān)系受到了眾多學(xué)者的關(guān)注[3-4]。本研究旨在探討UC患者血清單核細(xì)胞趨化蛋白-1(monocyte chemoa-ttractant protein-1,MCP-1)、高遷移率族蛋白B1(high mobility group protein B1,HMGB1)、腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白細(xì)胞介素-6(interleukin-6,IL-6)和白細(xì)胞介素-10(interleukin-10,IL-10)水平與腸道菌群的相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1 一般資料選擇2018年1月至2019年12月新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院第三附屬醫(yī)院消化科收治的100例UC患者為研究對(duì)象，其中急性期45例(急性期組)，緩解期55例(緩解期組)。病例納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)符合UC診斷標(biāo)準(zhǔn)[5]，且經(jīng)組織病理學(xué)檢查確診；(2)臨床資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)有嚴(yán)重的心、肝、腎等功能障礙者；(2)合并出血性疾病者；(3)合并結(jié)腸腫瘤者；(4)腸道手術(shù)史者。急性期組：男23例，女22例；年齡23～82(46.5±10.8)歲，病程0.8～4.5(2.8±1.2)a。緩解期組：男30例，女性25例；年齡21～84(47.8±9.7)歲，病程0.9～4.2(3.0±1.1)a。另選擇同期體檢健康者50例為對(duì)照組，其中男25例，女25例，年齡21～79(45.3±9.2)歲。3組受試者的性別、年齡比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，急性期組與緩解期組患者的病程比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。本研究通過醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，所有患者簽署知情同意書。

1.2 方法

1.2.1 腸道菌群數(shù)量檢測采集3組受試者新鮮糞便樣本1.5 g，加入磷酸鹽緩沖液9 mL，經(jīng)震蕩充分混合。取5個(gè)無菌試管，根據(jù)10倍稀釋原則分別稀釋至10-8，在無菌操作下取20 μL接種于不同培養(yǎng)基。雙歧桿菌、乳酸桿菌、大腸埃希菌及擬桿菌均采用厭氧培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，腸球菌采用需氧培養(yǎng)基培養(yǎng)，應(yīng)用微生物鑒定系統(tǒng)(法國梅里埃公司)進(jìn)行細(xì)菌鑒定，記錄菌群數(shù)量。

1.2.2 血清MCP-1、HMGB1、TNF-α、IL-6、IL-10水平檢測抽取3組受試者晨起空腹肘靜脈血3 mL，3 000 r·min-1離心10 min，取上層血清，-80 ℃保存?zhèn)錅y。采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測血清MCP-1、HMGB1、TNF-α、IL-6、IL-10水平，試劑盒購自武漢博士德生物工程有限公司，嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行操作。

2 結(jié)果

2.1 3組受試者腸道菌群數(shù)量比較結(jié)果見表1。3組受試者腸道內(nèi)雙歧桿菌、乳酸桿菌、大腸埃希菌、腸球菌、擬桿菌的菌群數(shù)量比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。急性期組患者腸道內(nèi)雙歧桿菌、乳酸桿菌數(shù)量低于緩解期組和對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；緩解期組患者腸道內(nèi)雙歧桿菌、乳酸桿菌數(shù)量低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。急性期組患者腸道內(nèi)大腸埃希菌、腸球菌、擬桿菌數(shù)量顯著高于緩解期組和對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；緩解期組患者腸道內(nèi)大腸埃希菌、腸球菌、擬桿菌數(shù)量顯著高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

表1 3組患者腸道菌群數(shù)量比較

2.2 3組受試者血清MCP-1、HMGB1、TNF-α、IL-6及IL-10水平比較結(jié)果見表2。3組受試者血清MCP-1、HMGB1、TNF-α、IL-6、IL-10水平比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。急性期組患者血清MCP-1、HMGB1、TNF-α、IL-6水平顯著高于緩解期組和對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；緩解期組患者血清MCP-1、HMGB1、TNF-α、IL-6水平顯著高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。急性期組患者血清IL-10水平顯著低于緩解期組和對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；緩解期組患者血清IL-10水平顯著低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

表2 3組受試者血清MCP-1、HMGB1、TNF-α、IL-6及IL-10水平比較

2.3 UC患者血清MCP-1、HMGB1、TNF-α、IL-6、IL-10水平與腸道菌群的相關(guān)性結(jié)果見表3。UC患者血清MCP-1、HMGB1、TNF-α、IL-6水平與腸道內(nèi)乳酸桿菌、雙歧桿菌數(shù)量呈顯著負(fù)相關(guān)(P<0.05)，與大腸埃希菌、腸球菌、擬桿菌數(shù)量呈顯著正相關(guān)(P<0.05)。UC患者血清IL-10水平與腸道內(nèi)雙歧桿菌、乳酸桿菌數(shù)量呈顯著正相關(guān)(P<0.05)，與大腸埃希菌、腸球菌、擬桿菌數(shù)量呈顯著負(fù)相關(guān)(P<0.05)。

表3 UC患者血清MCP-1、HMGB1、TNF-α、IL-6、IL-10水平與腸道菌群的相關(guān)性

3 討論

UC是一種慢性非特異性炎癥疾病，常見于中青年人群[6]。UC發(fā)病機(jī)制尚不完全明確，機(jī)體免疫系統(tǒng)與腸道微生物相互作用是引起UC的重要原因，因此，腸道菌群分布可能與UC的發(fā)生有密切的相關(guān)性[7]。人體腸道內(nèi)細(xì)菌量最多，常見的優(yōu)勢(shì)菌群包括雙歧桿菌、乳酸桿菌等，能夠?yàn)槿梭w的消化與吸收產(chǎn)生大量的酶，有助于人體健康；但腸道內(nèi)同時(shí)也存在著多種的條件致病菌，如腸球菌、腸桿菌、假單胞菌等，當(dāng)免疫力下降時(shí)可異常繁殖并引起機(jī)體感染[8]。結(jié)腸是消化系統(tǒng)內(nèi)細(xì)菌定植數(shù)量最密集的地方，其菌群數(shù)量占人體總數(shù)的2%～3%，其中以雙歧桿菌、乳酸桿菌、大腸埃希菌等最為突出[9]。

正常情況下腸道菌群處于相互制約的狀態(tài)，對(duì)腸道吸收、消化等具有直接影響，是構(gòu)成人體功能的重要組成部分[10]。有研究發(fā)現(xiàn)，與健康人比較，UC患者腸道內(nèi)優(yōu)勢(shì)菌群的數(shù)量顯著減少，而腸桿菌、腸球菌的數(shù)量顯著增加，腸道菌群失衡與UC的發(fā)生有一定的相關(guān)性[11]。本研究結(jié)果顯示，急性期組患者腸道內(nèi)雙歧桿菌、乳酸桿菌數(shù)量低于緩解期組和對(duì)照組，緩解期組患者腸道內(nèi)雙歧桿菌、乳酸桿菌數(shù)量低于對(duì)照組；急性期組患者腸道內(nèi)大腸埃希菌、腸球菌、擬桿菌數(shù)量顯著高于緩解期組和對(duì)照組，緩解期組患者腸道內(nèi)大腸埃希菌、腸球菌、擬桿菌數(shù)量顯著高于對(duì)照組；提示隨著UC患者病情嚴(yán)重程度的增加，優(yōu)勢(shì)菌群數(shù)量明顯下降。

MCP-1是一種趨化因子，能夠促進(jìn)多種細(xì)胞因子及炎癥介質(zhì)的表達(dá)。HMGB1可激活天然免疫反應(yīng)和獲得免疫反應(yīng)，同時(shí)也可激活單核細(xì)胞及巨噬細(xì)胞釋放炎癥因子，包括TNF-α、白細(xì)胞介素等。研究顯示，HMGB1在UC的發(fā)生中起重要作用，其可與下游受體相互作用而引起炎癥反應(yīng)和免疫應(yīng)答，導(dǎo)致腸道黏膜出現(xiàn)炎癥、免疫反應(yīng)[12]。TNF-α是一種炎癥啟動(dòng)因子，主要由單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞分泌，在急相反應(yīng)及細(xì)胞凋亡中起重要作用。IL-6是一種重要的促炎因子，有多種生物活性，其可誘導(dǎo)急相反應(yīng)蛋白合成，引起炎癥反應(yīng)[13]。IL-10主要是由輔助性T細(xì)胞2產(chǎn)生，其能夠抑制T細(xì)胞活化，從而抑制細(xì)胞免疫應(yīng)答反應(yīng)。本研究結(jié)果顯示，急性期組患者血清MCP-1、HMGB1、TNF-α、IL-6水平顯著高于緩解期組和對(duì)照組，緩解期組患者血清MCP-1、HMGB1、TNF-α、IL-6水平顯著高于對(duì)照組；急性期組患者血清IL-10水平顯著低于緩解期組和對(duì)照組，緩解期組患者血清IL-10水平顯著低于對(duì)照組；UC患者血清MCP-1、HMGB1、TNF-α、IL-6水平與腸道內(nèi)乳酸桿菌、雙歧桿菌數(shù)量呈顯著負(fù)相關(guān)，與大腸埃希菌、腸球菌、擬桿菌數(shù)量呈顯著正相關(guān)；UC患者血清IL-10水平與腸道內(nèi)雙歧桿菌、乳酸桿菌數(shù)量呈顯著正相關(guān)，與大腸埃希菌、腸球菌、擬桿菌數(shù)量呈顯著負(fù)相關(guān)；提示UC患者炎癥相關(guān)因子與腸道菌群失調(diào)有相關(guān)性。

綜上所述，UC患者腸道菌群分布失衡，雙歧桿菌、乳酸桿菌數(shù)量減少，大腸埃希菌、腸球菌、擬桿菌數(shù)量增加；UC患者血清MCP-1、HMGB1、TNF-α、IL-6、IL-10水平與腸道菌群數(shù)量存在相關(guān)性，臨床可通過檢測上述血清學(xué)指標(biāo)來評(píng)價(jià)UC患者病情變化。