劉蘊(yùn)博

大腸埃希氏菌,通常又將其稱為大腸桿菌,是人類動物腸道中普遍存在的正常菌群,但是部分血清型大腸桿菌也可導(dǎo)致腹瀉發(fā)生。根據(jù)其臨床特點、發(fā)病機(jī)制以及流血病學(xué)等特征,可將致瀉性大腸桿菌分為腸致病性大腸桿菌、腸出血性大腸桿菌、腸產(chǎn)毒性大腸桿菌、腸侵襲性大腸桿菌、腸黏附性大腸桿菌等五種類型［1］。其中腸致病性大腸桿菌可導(dǎo)致嬰幼兒或5 歲以下兒童發(fā)生腹瀉；腸出血性大腸桿菌具有普遍易感性,尤其多發(fā)于老年人和兒童；腸產(chǎn)毒性大腸桿菌不論是對成人,還是對小孩,均可導(dǎo)致其發(fā)??；腸侵襲性大腸桿菌可導(dǎo)致成人或大齡兒童出現(xiàn)菌痢樣腹瀉,腸黏附性大腸桿菌與小兒頑固性腹瀉具有較大關(guān)系［2］。為了解腸致瀉性大腸桿菌在腹瀉患者中的分布情況,本文應(yīng)用實時熒光PCR 檢測技術(shù)對其展開了如下研究。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2019 年10～12 月期間檢查的150 例腹瀉患者糞便標(biāo)本為研究對象,其中男82 例,女68 例。所使用儀器包括實時熒光PCR 儀、高速離心機(jī)、恒溫培養(yǎng)箱；培養(yǎng)基使用GN 增菌液,檢測試劑包括腸產(chǎn)毒性大腸桿菌、腸黏附性大腸桿菌、腸致病性大腸桿菌、腸出血性大腸桿菌、腸侵襲性大腸桿菌實時熒光診斷試劑盒。

1.2 方法 采集糞便標(biāo)本后,首先使用GN 增菌液對其進(jìn)行增菌處理,然后采集增菌液1 ml,以13000 r/min的速度對其進(jìn)行離心處理,離心2 min 后去掉上清,將100 μl 的DNA 提取液充分混勻后,置于沸水中對其進(jìn)行水浴,10 min 后再次以13000 r/min 的速度離心5 min,采集上清液作為實時熒光PCR 反應(yīng)的模板DNA,然后應(yīng)用實時熒光PCR 反應(yīng)體系和擴(kuò)增程序?qū)ζ溥M(jìn)行相應(yīng)操作。

2 結(jié)果

2.1 檢出情況分析 150 例腹瀉糞便樣本中,共檢出致瀉性大腸桿菌36 例,總檢出率為24.00%(36/150)。其中檢出腸致病性大腸桿菌18 例,占比50.00%,腸黏附性大腸桿菌12 例,占比33.33%；腸出血性大腸桿菌3 例,占比8.33%；腸產(chǎn)毒性大腸桿菌2 例,占比5.56%,腸侵襲性大腸桿菌1 例,占比2.78%。見表1。

表1 36 例致瀉性大腸桿菌分布情況分析(n,%)

2.2 患者不同時間及年齡段的病原菌檢出情況分析10 月致瀉性大腸桿菌的檢出率為25.93%,11 月和12 月致瀉性大腸桿菌檢出率分別為26.00%和19.57%,以11 月檢出率較高。從年齡分布情況來看,<5 歲患者的致瀉性大腸桿菌、腸致病性大腸桿菌檢出率相對較高。見表2。

表2 150 例患者不同時間及年齡段的病原菌檢出情況分析［n(%)］

3 討論

腹瀉是一種臨床常見疾病,在各類細(xì)菌性傳染病中,感染性腹瀉所占比重較大,可對患者生活質(zhì)量造成較大影響［3］。有研究學(xué)者采用傳統(tǒng)分離培養(yǎng)及分子生物學(xué)檢測技術(shù)對致瀉性大腸桿菌的分布情況進(jìn)行調(diào)查研究發(fā)現(xiàn),我國致瀉性大腸桿菌主要有五種較為常見的類型,其中腸致病性大腸桿菌、腸產(chǎn)毒性大腸桿菌均較為常見［4］。

本研究結(jié)果顯示,150 例腹瀉糞便樣本中共檢出致瀉性大腸桿菌36 例,總檢出率為24.00%,其中檢出腸致病性大腸桿菌占比50.00%,腸黏附性大腸桿菌占比33.33%；腸出血性大腸桿菌占比8.33%；腸產(chǎn)毒性大腸桿菌占比5.56%,腸侵襲性大腸桿菌占比2.78%。腹瀉患者的致瀉性大腸桿菌以腸致病性大腸桿菌、腸黏附性大腸桿菌為主。據(jù)資料報道,80 年代在各類腸致瀉性大腸桿菌中,以腸產(chǎn)毒性大腸桿菌為主,其次為腸致病性大腸桿菌［5-8］,由此可見,我國的致瀉性大腸桿菌分布情況已經(jīng)發(fā)生了較大改變。通過對本研究所選病例的不同時間的分布情況來看,11 月份的致瀉性大腸桿菌檢出率相對較高,體現(xiàn)了細(xì)菌性腹瀉多發(fā)于夏秋季的流行病原學(xué)特性。<5 歲患者的致瀉性大腸桿菌、腸致病性大腸桿菌檢出率相對較高,說明該類病原菌是導(dǎo)致兒童腹瀉的重要原因,與相關(guān)文獻(xiàn)報道一致［9］。腸黏附性大腸桿菌與小兒頑固性腹瀉具有較大關(guān)系,目前對于該類病原菌主要采用分子生物學(xué)手段進(jìn)行鑒定［10］,本研究運用實時熒光PCR 技術(shù)對其進(jìn)行檢測,敏感性高于傳統(tǒng)的分離培養(yǎng)技術(shù),但各相關(guān)致瀉性大腸桿菌的檢出率仍然較高,分析其原因可能在于：①衛(wèi)生環(huán)境改善和生活水平的提高,極大地改善患者生活條件,可降低患者的腹瀉病發(fā)病率；②本研究所選樣本量較少,且所選取的時間段較窄,無法較為全面的反應(yīng)腹瀉患者的病原菌分布情況,且所采集數(shù)據(jù)無法反映全年情況［11］；③糞便標(biāo)本采集是否規(guī)范、標(biāo)本保存及送檢條件,是否在服用抗生素前采樣等,都可能影響檢出結(jié)果的可靠性。

總而言之,實時熒光PCR 是目前病原菌診斷較普及的分子生物學(xué)技術(shù),具有耗時短和操作簡單等優(yōu)勢,且在敏感性和特異性方面明顯優(yōu)于常規(guī)PCR,是當(dāng)前診斷腹瀉患者各種病原菌分布的首選方法。在病原菌數(shù)量處于常規(guī)分離培養(yǎng)的檢出限以下時,利用分子診斷方法能夠獲得較為準(zhǔn)確地檢測結(jié)果,但隨著實時熒光PCR 技術(shù)的推廣,該技術(shù)在致瀉性大腸桿菌就其他病原菌檢測中發(fā)生了極為重要的作用,可進(jìn)一步推廣應(yīng)用該方法。