李欣澤，郝 賀，卓春柳，張立偉，朱 原，劉 洋，石玉祥,2，王風(fēng)申，張永英,2*

（1.河北工程大學(xué)生命科學(xué)與食品工程學(xué)院，河北邯鄲 056000；2.河北省禽病工程技術(shù)研究中心，河北邯鄲 056000；3.河北省中貝佳美生物科技有限公司，河北石家莊 050000）

中國肉雞養(yǎng)殖多集中在北緯20°～40°，夏季日照時間長、高溫高濕，平均氣溫超過30℃，尤其在育成后期肉雞快速生長會加重?zé)釕?yīng)激反應(yīng)，是肉雞養(yǎng)殖業(yè)經(jīng)濟損失的重要因素之一[1-2]。有研究表明，清熱解毒、利尿消炎的中草藥可以提高肉雞生長性能、改善機體免疫和抗氧化功能，緩解熱應(yīng)激對肉雞生長發(fā)育的影響[3-5]。當(dāng)前畜牧生產(chǎn)中應(yīng)用的中藥多是粉散劑，因其粗纖維含量較高、分子量較大，而肉雞大腸較短，尤其是非正常環(huán)境下生長的肉雞消化功能減弱，會嚴(yán)重影響中藥有效成分的吸收利用。近年來，益生菌發(fā)酵中藥可分解粗纖維，將難以吸收的大分子物質(zhì)轉(zhuǎn)化為易被腸道吸收的小分子物質(zhì)，進而提高藥效和利用率，將中藥中有毒成分進行分解轉(zhuǎn)化而降低中藥毒副作用，發(fā)酵過程還產(chǎn)生菌體蛋白和多糖等新的活性物質(zhì)，從而改變其原有性能并擴大應(yīng)用范圍[6]。

本團隊前期研究發(fā)現(xiàn)，中草藥可以提高熱應(yīng)激肉雞的生長性能、免疫與及抗氧化功能[7-8]。在此基礎(chǔ)上，本試驗旨在探討在熱應(yīng)激條件下不同比例微生物發(fā)酵中藥對肉雞生長性能、免疫功能、抗氧化功能及肌肉中氨基酸含量的影響，為后期發(fā)酵中藥研究及其在肉雞上的應(yīng)用提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料 試驗所用中藥制劑主要由黃芪、板藍根、淫羊藿等中草藥組成，由中貝佳美生物科技有限公司粉碎加工制備成中藥添加劑（80 目）；乳桿菌、枯草芽孢桿菌、酵母菌（活菌數(shù)均為5×107CFU/mL）按1:1:1混合獲得發(fā)酵菌液。稱取中藥制劑50 g 于250 mL 三角瓶中，高壓滅菌后將50 mL 發(fā)酵菌液接種至中藥復(fù)方中，37℃發(fā)酵24 h，制得發(fā)酵中藥。

1.2 試驗設(shè)計 本試驗采用單因素隨機分組試驗設(shè)計，于邯鄲種雞場購買300 只1 日齡羅斯308 肉雞飼養(yǎng)于試驗雞舍中，試驗時選取180 只28 日齡健康、體重（700±25）g 的羅斯308 肉雞，隨機分為6 組，每組3個重復(fù)，每個重復(fù)10 只雞，公、母各半。對照組肉雞全天飼養(yǎng)于裝有空調(diào)的恒溫動物房內(nèi)，飼喂基礎(chǔ)日糧；熱應(yīng)激組和4 個試驗組肉雞全天飼養(yǎng)于試驗雞舍中，其中熱應(yīng)激組飼喂基礎(chǔ)日糧，4 個試驗組在熱應(yīng)激組基礎(chǔ)上日糧分別添加1.5 g/kg 中藥和0.5、1.0、1.5 g/kg 發(fā)酵中藥。試驗期14 d。

1.3 基礎(chǔ)日糧及飼養(yǎng)管理 試驗于2019 年7 月中旬在河北工程大學(xué)生命學(xué)院試驗雞舍和裝有空調(diào)的恒溫動物房內(nèi)進行。恒溫動物房全天保持（23±1）℃，相對濕度控制在55%～65%；試驗雞舍白天平均34℃，夜間平均25℃，相對濕度控制在60%～70%。肉雞均采用立體籠養(yǎng)（3 層籠），每籠飼養(yǎng)10 只肉雞。人工持續(xù)光照，乳頭式飲水器供水，自由采食，雞舍按照 AA 肉雞飼養(yǎng)管理規(guī)程進行日常管理?；A(chǔ)日糧參照中國雞飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)（2004）設(shè)計，其組成及營養(yǎng)成分見表1。

表1 基礎(chǔ)日糧組成及營養(yǎng)成分（飼喂基礎(chǔ)）

1.4 測定指標(biāo)與方法

1.4.1 生長性能測定 試驗正式開始時，記錄各組肉雞的初始體重，試驗結(jié)束后，準(zhǔn)確計算平均日采食量和平均日增重，并記錄各組肉雞的終末體重，根據(jù)平均日采食量和平均日增重計算耗料增重比。

1.4.2 血清免疫及抗氧化指標(biāo)測定 于試驗結(jié)束后，每個重復(fù)隨機挑選4 只接近平均體重肉雞（每組12 只），公、母各半，心臟采血，3 000 r/min 離心10 min 制備血清，置于-20℃冰箱保存?zhèn)溆?。采用試劑盒測定白細(xì)胞介素-1β（IL-1β）、白細(xì)胞介素-6（IL-6）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、免疫球蛋白G（IgG）、免疫球蛋白A（IgA）及總抗氧化能力（T-AOC）、丙二醛（MDA）含量與過氧化氫酶（CAT）、超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）活性，試劑盒均購自南京建成生物公司，按照試劑盒操作說明書進行測定。

1.4.3 氨基酸含量測定 于試驗結(jié)束后，每個重復(fù)隨機挑選4 只接近平均體重肉雞（每組12 只），公、母各半，取屠宰后胸大肌、腓腸肌各10 g 混勻，參照《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中氨基酸的測定》（GB/T 5009.124-2016），采用L-8900 型氨基酸自動分析儀測定。

1.5 統(tǒng)計分析 試驗數(shù)據(jù)采用SPSS 11.0 的One-Way ANOVA 進行單因素方差分析，顯著差異者用LSD 方法進行多重比較，結(jié)果以平均值± 標(biāo)準(zhǔn)誤表示，以P<0.05 為顯著水平。

2 結(jié)果

2.1 發(fā)酵中藥對熱應(yīng)激肉雞生長性能的影響 由表2可知，與對照組相比，熱應(yīng)激組、1.5 g/kg 中藥組和1.0 g/kg 發(fā)酵中藥組平均日增重和平均日采食量顯著降低，耗料增重比顯著升高，1.0、1.5 g/kg 發(fā)酵中藥組平均日增重、平均日采食量和耗料增重比無顯著差異。與熱應(yīng)激組相比，1.0、1.5 g/kg 發(fā)酵中藥組的平均日增重和平均日采食量顯著升高，耗料增重比顯著降低。

2.2 發(fā)酵中藥對熱應(yīng)激肉雞血清免疫指標(biāo)的影響 由表3 可知，與對照組相比，熱應(yīng)激組和4 個試驗組血清IL-1β、IL-6、IgG 含量均存在顯著差異，熱應(yīng)激組血清IgA 含量顯著降低，但熱應(yīng)激組和4 個試驗組血清TNF-α含量無顯著差異。與熱應(yīng)激組相比，1.0、1.5 g/kg 發(fā)酵中藥組血清IL-1β、IL-6、IgG 含量均顯著升高，4 個試驗組血清TNF-α、IgA 含量呈上升態(tài)勢（P>0.05）。

2.3 發(fā)酵中藥對熱應(yīng)激肉雞血清抗氧化功能的影響 由表4 可知，與對照組相比，熱應(yīng)激組和4 個試驗組血清CAT 活性和T-AOC 含量均顯著降低，但1.5 g/kg 發(fā)酵中藥組血清SOD、GSH-Px 活性和MDA 含量無顯著差異。與熱應(yīng)激組相比，1.0、1.5 g/kg 發(fā)酵中藥組血清CAT 活性顯著升高、MDA 含量顯著降低；0.5、1.0、1.5 g/kg發(fā)酵中藥組血清SOD 活性顯著升高；1.5 g/kg 發(fā)酵中藥組血清GSH-Px 活性顯著升高；4 個試驗組血清T-AOC含量有升高趨勢（P>0.05）。

2.4 發(fā)酵中藥對熱應(yīng)激肉雞肌肉氨基酸含量的影響 由表5 可知，本試驗共測定了16 種氨基酸，其中包括必需氨基酸7 種、鮮味氨基酸10 種。與對照組相比，熱應(yīng)激組和4 個試驗組組必需氨基酸、鮮味氨基酸和總氨基酸含量均無顯著差異。與熱應(yīng)激組相比，4 個試驗組的必需氨基酸、鮮味氨基酸和總氨基酸有升高趨勢（P>0.05）。

3 討 論

3.1 發(fā)酵中藥對熱應(yīng)激肉雞生長性能的影響 生長性能的測定可以評價畜禽生產(chǎn)水平，在熱應(yīng)激條件下肉雞為了維持體溫相對平衡，會通過減少采食量來降低機體產(chǎn)熱，導(dǎo)致生長性能降低[9-10]。由于本試驗肉雞1～27 日齡時飼養(yǎng)于試驗雞舍中，環(huán)境溫度較高，使肉雞產(chǎn)生熱應(yīng)激反應(yīng)，因此造成肉雞生長性能下降，增重較慢。

中草藥含有多種活性物質(zhì)，具有清熱解毒、利尿消腫、調(diào)整胃腸機能等功效，可以提高飼料利用率和畜禽生長性能。本試驗所用黃芪含有大量多糖、黃酮、皂苷及微量元素等成分，黃芪經(jīng)發(fā)酵后可增加酚含量，同時產(chǎn)生新的抗氧化物質(zhì)，可調(diào)節(jié)腸道菌群平衡，增強機體免疫力，提高其生長性能[11]；板藍根含多糖、顛玉紅和氨基酸等多種成分，具有清熱解毒、抗菌、抗病毒作用[12]；淫羊藿含有大量黃酮類成分，具有抗衰老、改善血液流變性、促進生長發(fā)育作用，其含有的淫羊多糖可增強動物免疫力[13]。本試驗中藥發(fā)酵菌是乳桿菌、枯草芽孢桿菌和酵母菌，具有益生作用，可促進動物生長。金四華等[14]在日糧中添加由黃芪、板藍根、金銀花等組成的復(fù)方中草藥后，可緩解高溫高濕對肉雞帶來的負(fù)面影響，提高平均日增重和平均日采食量，降低耗料增重比；孫向婉等[15]報道，由黃芪、杜仲、蒼術(shù)、魚腥草制成的1%復(fù)方中藥能降低耗料增重比，提高肉雞生長性能。但關(guān)于發(fā)酵中藥對熱應(yīng)激條件下畜禽生長的影響鮮有文獻報道。中藥在經(jīng)過微生物發(fā)酵后，可以促進植物細(xì)胞壁的裂解，將細(xì)胞中活性物質(zhì)釋放出來，提高日糧轉(zhuǎn)化率，這可能是發(fā)酵中藥提高肉雞生長性能的原因之一。靳雙星等[16]發(fā)現(xiàn)，在基礎(chǔ)日糧添加0.5%補中益氣湯發(fā)酵制劑后，肉雞平均日增重顯著提高，耗料增重比顯著降低；張凱等[17]在日糧添加發(fā)酵型黃芪提取物，發(fā)現(xiàn)肉仔雞的生長性能和健康狀況有明顯改善。本試驗結(jié)果表明，在肉雞日糧添加中藥與發(fā)酵中藥后，4 個試驗組平均日增重，平均日采食量均有所升高，耗料增重比均有所降低，其中1.0、1.5 g/kg 發(fā)酵中藥組檢測指標(biāo)均優(yōu)于1.5 g/kg 中藥組，說明在日糧添加發(fā)酵中藥的作用效果優(yōu)于中藥。由此表明，在熱應(yīng)激條件下發(fā)酵中藥可以增強機體的調(diào)節(jié)能力，提高機體消化吸收能力，進而提高熱應(yīng)激條件下肉雞的生長性能。但在本試驗中，添加發(fā)酵中藥并沒有完全消除熱應(yīng)激環(huán)境對肉雞生長性能的負(fù)面影響，這可能是由于試驗所用板藍根帶有苦味、淫羊藿帶有腥味，降低了日糧適口性，造成肉雞采食量下降，但0.5、1.0、1.5 g/kg 發(fā)酵中藥組平均日采食量均高于1.5 g/kg 中藥組，可能是因為中藥經(jīng)發(fā)酵后可降低中藥中難聞的味道進而提高了采食量，因此，在選擇中藥時需要考慮到中藥的適口性。

表2 發(fā)酵中藥對熱應(yīng)激肉雞生長性能的影響

表3 發(fā)酵中藥對熱應(yīng)激肉雞血清免疫指標(biāo)的影響

表4 發(fā)酵中藥對熱應(yīng)激肉雞血清抗氧化功能的影響

表5 發(fā)酵中藥對熱應(yīng)激肉雞肌肉氨基酸含量的影響 %

3.2 發(fā)酵中藥對熱應(yīng)激肉雞血清免疫指標(biāo)的影響 血清中免疫球蛋白是誘導(dǎo)機體產(chǎn)生體液免疫的主要抗體，可以反映機體的免疫能力，并保護機體免受外界病原菌的侵害。IgA 是黏膜免疫反應(yīng)產(chǎn)生的效應(yīng)分子，在機體防御和局部抗感染中發(fā)揮重要作用，IgG 是主要由脾臟、淋巴結(jié)中漿細(xì)胞產(chǎn)生的效應(yīng)分子，具有抗菌、抗病毒作用，血清免疫球蛋白含量升高代表機體免疫功能增強。免疫細(xì)胞因子是由多種組織細(xì)胞合成和分泌的具有多種生物學(xué)活性的多肽或糖蛋白，IL-6 具有誘導(dǎo)細(xì)胞生長分化、調(diào)節(jié)機體免疫應(yīng)答等作用，IL-1β可介導(dǎo)多種炎癥反應(yīng)，在免疫應(yīng)答和組織修復(fù)中起到重要作用，TNF-α可直接殺傷腫瘤細(xì)胞并刺激IL-1 產(chǎn)生[18]。研究表明，黃芪、板藍根和淫羊藿中富含的生物堿、苷類、揮發(fā)油和有機酸等多種免疫活性物質(zhì)，可促進機體免疫器官發(fā)育，細(xì)胞免疫、體液免疫反應(yīng)和多種細(xì)胞因子分泌，從而增強機體免疫功能，是機體重要免疫刺激劑[11-13]。另外，乳酸菌類益生菌可激活腸黏膜內(nèi)相關(guān)淋巴細(xì)胞，促進分泌型免疫球蛋白和細(xì)胞因子分泌，進而增強機體免疫功能[19]。李和平等[20]在肉雞日糧中添加2%由板藍根、黃芪、金銀花等組成中藥復(fù)方后，可使39 日齡肉雞血清IgA、IgG 含量顯著提高；鄒志恒等[21]研究表明，在仔豬日糧中添加0.4%由黃芪、黨參、山楂等組成復(fù)方中草藥發(fā)酵制劑，可使仔豬血清IgA、IgG、IgM 含量顯著提高。本試驗結(jié)果表明，在熱應(yīng)激條件下，日糧添加中藥和發(fā)酵中藥可以提高熱應(yīng)激肉雞的機體免疫功能，1.0、1.5 g/kg 發(fā)酵中藥組熱應(yīng)激肉雞免疫功能的提升效果優(yōu)于1.5 g/kg 中藥組，其中1.0、1.5 g/kg 發(fā)酵中藥組血清IL-1β、IgG 含量顯著高于1.5 g/kg 中藥組，說明中藥經(jīng)過發(fā)酵后可以明顯增強機體免疫性能和抗病力，提高肉雞對環(huán)境的適應(yīng)能力。綜合比較，發(fā)酵中藥添加量為1.0 g/kg 時對提高肉雞免疫功能效果最佳。

3.3 發(fā)酵中藥對熱應(yīng)激肉雞血清抗氧化功能的影響 動物機體抗氧化指標(biāo)不僅可以反映動物機體健康程度、免疫能力，還可以反映機體疾病狀態(tài)。MDA 可以反映機體氧化損傷的嚴(yán)重程度；SOD 和CAT 是機體清除細(xì)胞呼吸作用產(chǎn)生的超氧陰離子自由基的重要物質(zhì)，保護細(xì)胞免受自由基損害[22]；T-AOC 可作為機體抗氧化系統(tǒng)的評估指標(biāo)[23]；GSH-Px 可分解機體代謝產(chǎn)生的過氧化物，降低機體氧化損傷。當(dāng)機體發(fā)生應(yīng)激時，T-AOC、MDA 含量和GSH-Px、SOD、CAT 活性之間的動態(tài)平衡遭到破壞[24]。很多中藥都具有抗氧化成分，本試驗所用板藍根中的多種酚羥基化合物[25]，黃芪葉中的多糖、黃酮、皂苷和氨基酸等多種生物活性物質(zhì)[26]，淫羊藿中的淫羊藿苷、多糖和維生素C 等多種成分[27]，均具有不同程度的抗氧化作用，可防止自由基對機體的損傷，提高機體抗氧化能力。喬宏興等[28]研究發(fā)現(xiàn)，日糧添加黃芪和發(fā)酵黃芪均可提高血清CAT 含量、GSH-Px 和T-SOD 活性，且發(fā)酵黃芪作用效果優(yōu)于黃芪；張桂枝等[29]發(fā)現(xiàn)，在肉雞日糧添加0.5%和1.0%補中益氣發(fā)酵制劑可使血清SOD 和GSH-Px 活性顯著升高，MDA 含量顯著降低；龔衛(wèi)忠等[30]報道，由黃芪、麥芽、黨參等制成的復(fù)方中藥超微粉可提高肉雞血清T-AOC和SOD 活性，降低血清中MDA 含量。本試驗結(jié)果表明，在熱應(yīng)激條件下，飼喂中藥和發(fā)酵中藥均可提高肉雞機體抗氧化水平，緩解熱應(yīng)激對機體造成的損傷，且發(fā)酵中藥組效果優(yōu)于中藥組，并隨發(fā)酵中藥劑量的增加效果更佳顯著，當(dāng)發(fā)酵中藥添加量為1.5 g/kg 時效果最佳，說明中藥發(fā)酵后，抗氧化活性成分可能增加；另一方面由于益生菌的加入，調(diào)節(jié)了腸道菌群結(jié)構(gòu)，增加了有效成分的吸收，從而進一步增強了肉雞抗氧化功能的作用效果。由于本次試驗僅對發(fā)酵中藥制劑使用效果進行了初步測定，其作用機制需進一步研究。

3.4 發(fā)酵中藥對熱應(yīng)激肉雞肌肉氨基酸含量的影響 氨基酸作為蛋白質(zhì)組成的基本單位，其數(shù)量、種類和比例是評價雞肉品質(zhì)重要指標(biāo)，其中必需氨基酸主要決定動物產(chǎn)品營養(yǎng)價值，而鮮味氨基酸主要決定食物鮮味[31]。本試驗共測定16 種氨基酸，熱應(yīng)激肉雞肌肉中氨基酸含量未發(fā)生明顯改變，但4 個試驗組鮮味氨基酸、必需氨基酸和總氨基酸含量均較熱應(yīng)激組有所升高。因此，在熱應(yīng)激條件下，日糧添加發(fā)酵中藥在緩解熱應(yīng)激對機體造成損傷的同時，還可以增加機體內(nèi)氨基酸含量。

綜上所述，日糧中不論添加低劑量發(fā)酵中藥（0.5、1.0 g/kg）還是同等劑量發(fā)酵中藥（1.5 g/kg），發(fā)酵中藥組的各項檢測指標(biāo)均優(yōu)于中藥組，可能原因：第一，發(fā)酵過程有助于藥物中有效成分的溶出；第二，在發(fā)酵過程中降解了中藥中大分子物質(zhì)；第三，微生物在發(fā)酵中藥過程中產(chǎn)生新的活性成分；第四，益生菌可以優(yōu)化腸道菌群平衡，增強腸黏膜對營養(yǎng)物質(zhì)的吸收利用[32-33]等。

4 結(jié) 論

在本試驗條件下，日糧添加發(fā)酵中藥可改善熱應(yīng)激肉雞的生長性能，提高機體免疫功能和抗氧化能力，提高肌肉氨基酸含量，其效果優(yōu)于添加中藥，其中以發(fā)酵中藥添加量為1.5 g/kg 時效果最好。