蔣洪亮李躍紅趙陽張馨允陳露徐夢懷游元丁李志冉茂乾焦彥朝

(1.貴州省六盤水口岸服務(wù)中心，貴州 六盤水 553000；2.貴陽海關(guān)綜合技術(shù)中心，貴州 貴陽 550001)

刺梨(Rosa roxburghiiTratt)為薔薇科多年生落葉灌木繅絲花的果實，果實含有豐富的維生素C，被稱為“維C之王”，是滋補健身的珍果，是一種藥食兩用的稀有果實[1,2]?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，刺梨具有解毒、鎮(zhèn)靜、促進(jìn)胃腸蠕動、促進(jìn)消化液分泌、抗動脈粥樣硬化、抗氧化、抗疲勞、抗腫瘤、保肝、調(diào)節(jié)機體免疫功能、延緩衰老等作用[3,4]。刺梨產(chǎn)業(yè)作為六盤水市經(jīng)濟轉(zhuǎn)型發(fā)展的重點工程，其種植得到大力推廣，故農(nóng)藥的使用不可避免，農(nóng)藥殘留的檢測一直是產(chǎn)品質(zhì)量安全工作中非常重要的一個領(lǐng)域，因此，農(nóng)藥殘留的檢測對確保刺梨及其產(chǎn)品的質(zhì)量安全尤為重要。本文研究提取溫度和提取時間對刺梨中甲胺磷和敵敵畏的加標(biāo)回收率的影響，為六盤水刺梨及其產(chǎn)品中農(nóng)藥殘留的檢測及分析提供實驗數(shù)據(jù)基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料、試劑、器材

1.1.1 材料

刺梨(貴州六盤水)，刺梨粉粹密封，冷藏備用。

1.1.2 試劑

甲胺磷，標(biāo)準(zhǔn)號：GBW(E)082285；批號：A1909238；100μg·mL-1，1.2mL。敵敵畏，標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)：GBW(E)082244；批號：A2002073；100μg·mL-1，1.2mL。乙腈、無水硫酸鈉、氯化鈉、丙酮、甲苯均為分析純，購于國藥集團(tuán)。

1.1.3 器材

GC-MSQP2010(島津)；DB-1701毛細(xì)管柱(30m×0.25μm×0.25mm Agilent)；ST-16R離心機(賽默飛世爾上海)；梅特勒天平(北京卓信宏業(yè))；刀式研磨儀GM200(德國萊馳)；數(shù)顯型多管式旋渦混合器(上海安譜)；氮吹儀(上海沃瓏)；NH2固相萃取柱(Agela)。

1.2 試驗方法

1.2.1 樣品加標(biāo)處理

1.2.1.1 制樣

取5g刺梨粉碎樣，于50mL離心試管A、B、C、D中，B、C、D離心試管中加入5.0mL丙酮溶劑和140μL 10μg·mL-1的甲胺磷、敵敵畏標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)溶液，充分搖勻后，把A、B、C、D離心試管中的溶劑揮發(fā)至干燥。

1.2.1.2 樣品提取

在A、B、C、D離心試管中分別加入2.0g氯化鈉和15mL乙腈，A、B、C、D離心試管在25℃條件下，分別在數(shù)顯型多管式旋渦混合器上震搖1min、3min、10min后，將A、B、C、D離心試管放于離心機中以3000r·min-1離心5min，取其上清液，再重復(fù)上述操作2次，乙腈用量分別為15mL和10mL，合并3次提取上清液。并在30℃、35℃、40℃、45℃和50℃條件下分別進(jìn)行上述提取過程[5]。

1.2.1.3 上清液凈化

在Cleanertpesticarb/NH2固相萃取柱中加入厚度約為2cm的無水硫酸鈉，用乙腈∶甲苯為3∶1的溶液5.0mL預(yù)洗柱，用5.0mL乙腈洗淋，當(dāng)硫酸鈉粉末上液體將淋洗完時，迅速將柱子移至氮吹試管上，將上清液加入柱內(nèi)，用5.0mL乙腈潤洗，收集所有洗脫液，并在30℃水浴下用氮吹儀把洗脫液吹至近干。加入2.0mL丙酮復(fù)溶，用移液槍把2.0mL樣液移至2個進(jìn)樣瓶中，放于冰箱中冷藏，以備用于氣相色譜-質(zhì)譜測定。

1.2.2 標(biāo)準(zhǔn)工作溶液配制

精準(zhǔn)吸取10μg·mL-1的標(biāo)準(zhǔn)混合儲備液100μL和50μL于2個進(jìn)樣瓶中，再向2個進(jìn)樣瓶中分別加入900μL、950μL的丙酮溶劑，配成1.0μg·mL-1和0.5μg·mL-1的工作液；精準(zhǔn)吸取1.0μg·mL-1的工作液100μL和200μL于2個進(jìn)樣瓶中，加入900μL和800μL的丙酮溶劑，配成0.1μg·mL-1、0.2μg·mL-1的工作液；精準(zhǔn)吸取0.5μg·mL-1的工作液100μL于1個進(jìn)樣瓶中，加入900μL的丙酮溶劑，配成0.05μg·mL-1的工作液，得標(biāo)準(zhǔn)工作液系列濃度為0.05μg·mL-1、0.10μg·mL-1、0.20μg·mL-1、0.50μg·mL-1、1.00μg·mL-1。

1.2.3 色譜條件色譜柱

DB-1701(30m×0.32mm×0.25μm)；升溫程序為90℃保持1min，以10℃·min-1的速率升至290℃，保持2min；進(jìn)樣口溫度為280℃；進(jìn)樣量為1μL；進(jìn)樣方式為不分流進(jìn)樣，1.5min后打開閥；載氣為高純氦氣；流速為1.2mL·min-1。質(zhì)譜電子轟擊源為70eV；GC-MS接口溫度為280℃；離子源溫度為250℃；溶劑延遲時間為4.5min；MS開始時間為5min；MS結(jié)束時間為15min；采集模式為Scan和MRM數(shù)據(jù)掃描。

2 結(jié)果與分析

2.1 甲胺磷、敵敵畏標(biāo)準(zhǔn)曲線

以甲胺磷、敵敵畏濃度為橫坐標(biāo)，豐度為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到敵敵畏的回歸直線方程：

y=4194725.541782x-12306.754835(R2=0.999592)

甲胺磷的回歸直線方程：

y=2878692.901818x-65263.976675(R2=0.994676)

標(biāo)準(zhǔn)曲線在濃度范圍內(nèi)線性良好[6]。

2.2 甲胺磷、敵敵畏標(biāo)準(zhǔn)品的色譜圖

1.0μg·mL-1的甲胺磷、敵敵畏標(biāo)準(zhǔn)品溶液通過氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀檢測，色譜圖結(jié)果如圖1。刺梨加標(biāo)樣經(jīng)乙腈提取、固相萃取柱凈化，氮吹至近干，加入2.0mL丙酮復(fù)溶、過濾，加標(biāo)樣液通過氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀檢測，色譜圖結(jié)果如圖2。由圖1、2可知，在該條件下敵敵畏和甲胺磷峰型良好、響應(yīng)強度高、基質(zhì)效應(yīng)影響小[7,8]。

圖1 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)色譜圖

圖2 加標(biāo)樣色譜圖

2.3 實驗數(shù)據(jù)結(jié)果

按提取時間和提取溫度對敵敵畏和甲胺磷不同實驗組進(jìn)行編號，編號見表1。

表1 實驗組編號

刺梨加標(biāo)樣分別在25℃、30℃、35℃、40℃、45℃、50℃下，經(jīng)乙腈分別提取1min、3min、10min，固相萃取柱凈化，氮吹至近干，加入2.0mL丙酮復(fù)溶、過濾，GC-MS檢測，回收率數(shù)據(jù)結(jié)果見表2。

表2 加標(biāo)回收率結(jié)果

2.4 單因素分析

2.4.1 提取溫度對回收率的影響

提取溫度對回收率的影響結(jié)果見圖3至圖5。

圖4 提取3min時，溫度對回收率的影響

圖5 提取10min時，溫度對回收率的影響

由圖3至圖5可知，在提取時間相同條件下，在25～45℃，刺梨加標(biāo)樣中敵敵畏、甲胺磷的回收率隨著溫度的升高有顯著的提高；45℃之后，敵敵畏的回收率隨溫度的升高趨于平緩，甚至?xí)陆?，其中甲胺磷的回收率隨著溫度的升高有明顯的下降。這可能是因為45℃之前，隨著提取溫度的升高，溶劑分子熱運動加劇，分子擴散速度增加，溶劑分子更容易通過刺梨的細(xì)胞壁等，敵敵畏、甲胺磷越來越多的進(jìn)入溶劑中；45℃之后，不同農(nóng)藥對熱的穩(wěn)定性不同，甚至有些農(nóng)藥隨著溫度的升高降解很明顯。

2.4.2 提取時間對回收率的影響

提取時間對敵敵畏、甲胺磷回收率的影響結(jié)果如圖6、7。

圖6 時間對敵敵畏回收率影響

圖7 時間對甲胺磷回收率影響

由圖6、7可知，在提取溫度相同的條件下，提取時間在1～3min，隨著提取時間的延長，刺梨樣品中敵敵畏、甲胺磷的回收率有顯著的提高；3min之后，隨著提取時間的延長，刺梨中敵敵畏、甲胺磷的回收率總體呈上升趨勢。

3 結(jié)論

通過提取溫度及提取時間的變化對刺梨樣品中敵敵畏、甲胺磷加標(biāo)回收率的影響進(jìn)行分析。結(jié)果表明，采用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用對刺梨樣品中敵敵畏、甲胺磷進(jìn)行檢測時，提取溫度和提取時間對檢測結(jié)果有顯著影響；提取時間相同條件下，提取溫度在45℃范圍內(nèi)，提高溫度有助于提高檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性，但溫度過高反而降低檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性；提取溫度相同條件下，延長提取時間有助于提高檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性，但結(jié)合檢測效率及耗能等，提取時間10min較為合適；尤其是對檢測要求較高的食藥材而言，選擇適當(dāng)提高溫度和提取時間是很有必要的。