蔣洪亮李躍紅趙陽張馨允陳露徐夢懷游元丁李志冉茂乾焦彥朝

(1.貴州省六盤水口岸服務中心，貴州 六盤水 553000；2.貴陽海關綜合技術中心，貴州 貴陽 550001)

刺梨(Rosa roxburghiiTratt)為薔薇科多年生落葉灌木繅絲花的果實，果實含有豐富的維生素C，被稱為“維C之王”，是滋補健身的珍果，是一種藥食兩用的稀有果實[1,2]?，F代藥理學研究表明，刺梨具有解毒、鎮(zhèn)靜、促進胃腸蠕動、促進消化液分泌、抗動脈粥樣硬化、抗氧化、抗疲勞、抗腫瘤、保肝、調節(jié)機體免疫功能、延緩衰老等作用[3,4]。刺梨產業(yè)作為六盤水市經濟轉型發(fā)展的重點工程，其種植得到大力推廣，故農藥的使用不可避免，農藥殘留的檢測一直是產品質量安全工作中非常重要的一個領域，因此，農藥殘留的檢測對確保刺梨及其產品的質量安全尤為重要。本文研究提取溫度和提取時間對刺梨中甲胺磷和敵敵畏的加標回收率的影響，為六盤水刺梨及其產品中農藥殘留的檢測及分析提供實驗數據基礎。

1 材料與方法

1.1 材料、試劑、器材

1.1.1 材料

刺梨(貴州六盤水)，刺梨粉粹密封，冷藏備用。

1.1.2 試劑

甲胺磷，標準號：GBW(E)082285；批號：A1909238；100μg·mL-1，1.2mL。敵敵畏，標準物質：GBW(E)082244；批號：A2002073；100μg·mL-1，1.2mL。乙腈、無水硫酸鈉、氯化鈉、丙酮、甲苯均為分析純，購于國藥集團。

1.1.3 器材

GC-MSQP2010(島津)；DB-1701毛細管柱(30m×0.25μm×0.25mm Agilent)；ST-16R離心機(賽默飛世爾上海)；梅特勒天平(北京卓信宏業(yè))；刀式研磨儀GM200(德國萊馳)；數顯型多管式旋渦混合器(上海安譜)；氮吹儀(上海沃瓏)；NH2固相萃取柱(Agela)。

1.2 試驗方法

1.2.1 樣品加標處理

1.2.1.1 制樣

取5g刺梨粉碎樣，于50mL離心試管A、B、C、D中，B、C、D離心試管中加入5.0mL丙酮溶劑和140μL 10μg·mL-1的甲胺磷、敵敵畏標準物質溶液，充分搖勻后，把A、B、C、D離心試管中的溶劑揮發(fā)至干燥。

1.2.1.2 樣品提取

在A、B、C、D離心試管中分別加入2.0g氯化鈉和15mL乙腈，A、B、C、D離心試管在25℃條件下，分別在數顯型多管式旋渦混合器上震搖1min、3min、10min后，將A、B、C、D離心試管放于離心機中以3000r·min-1離心5min，取其上清液，再重復上述操作2次，乙腈用量分別為15mL和10mL，合并3次提取上清液。并在30℃、35℃、40℃、45℃和50℃條件下分別進行上述提取過程[5]。

1.2.1.3 上清液凈化

在Cleanertpesticarb/NH2固相萃取柱中加入厚度約為2cm的無水硫酸鈉，用乙腈∶甲苯為3∶1的溶液5.0mL預洗柱，用5.0mL乙腈洗淋，當硫酸鈉粉末上液體將淋洗完時，迅速將柱子移至氮吹試管上，將上清液加入柱內，用5.0mL乙腈潤洗，收集所有洗脫液，并在30℃水浴下用氮吹儀把洗脫液吹至近干。加入2.0mL丙酮復溶，用移液槍把2.0mL樣液移至2個進樣瓶中，放于冰箱中冷藏，以備用于氣相色譜-質譜測定。

1.2.2 標準工作溶液配制

精準吸取10μg·mL-1的標準混合儲備液100μL和50μL于2個進樣瓶中，再向2個進樣瓶中分別加入900μL、950μL的丙酮溶劑，配成1.0μg·mL-1和0.5μg·mL-1的工作液；精準吸取1.0μg·mL-1的工作液100μL和200μL于2個進樣瓶中，加入900μL和800μL的丙酮溶劑，配成0.1μg·mL-1、0.2μg·mL-1的工作液；精準吸取0.5μg·mL-1的工作液100μL于1個進樣瓶中，加入900μL的丙酮溶劑，配成0.05μg·mL-1的工作液，得標準工作液系列濃度為0.05μg·mL-1、0.10μg·mL-1、0.20μg·mL-1、0.50μg·mL-1、1.00μg·mL-1。

1.2.3 色譜條件色譜柱

DB-1701(30m×0.32mm×0.25μm)；升溫程序為90℃保持1min，以10℃·min-1的速率升至290℃，保持2min；進樣口溫度為280℃；進樣量為1μL；進樣方式為不分流進樣，1.5min后打開閥；載氣為高純氦氣；流速為1.2mL·min-1。質譜電子轟擊源為70eV；GC-MS接口溫度為280℃；離子源溫度為250℃；溶劑延遲時間為4.5min；MS開始時間為5min；MS結束時間為15min；采集模式為Scan和MRM數據掃描。

2 結果與分析

2.1 甲胺磷、敵敵畏標準曲線

以甲胺磷、敵敵畏濃度為橫坐標，豐度為縱坐標繪制標準曲線，得到敵敵畏的回歸直線方程：

y=4194725.541782x-12306.754835(R2=0.999592)

甲胺磷的回歸直線方程：

y=2878692.901818x-65263.976675(R2=0.994676)

標準曲線在濃度范圍內線性良好[6]。

2.2 甲胺磷、敵敵畏標準品的色譜圖

1.0μg·mL-1的甲胺磷、敵敵畏標準品溶液通過氣相色譜-質譜聯(lián)用儀檢測，色譜圖結果如圖1。刺梨加標樣經乙腈提取、固相萃取柱凈化，氮吹至近干，加入2.0mL丙酮復溶、過濾，加標樣液通過氣相色譜-質譜聯(lián)用儀檢測，色譜圖結果如圖2。由圖1、2可知，在該條件下敵敵畏和甲胺磷峰型良好、響應強度高、基質效應影響小[7,8]。

圖1 標準物質色譜圖

圖2 加標樣色譜圖

2.3 實驗數據結果

按提取時間和提取溫度對敵敵畏和甲胺磷不同實驗組進行編號，編號見表1。

表1 實驗組編號

刺梨加標樣分別在25℃、30℃、35℃、40℃、45℃、50℃下，經乙腈分別提取1min、3min、10min，固相萃取柱凈化，氮吹至近干，加入2.0mL丙酮復溶、過濾，GC-MS檢測，回收率數據結果見表2。

表2 加標回收率結果

2.4 單因素分析

2.4.1 提取溫度對回收率的影響

提取溫度對回收率的影響結果見圖3至圖5。

圖4 提取3min時，溫度對回收率的影響

圖5 提取10min時，溫度對回收率的影響

由圖3至圖5可知，在提取時間相同條件下，在25～45℃，刺梨加標樣中敵敵畏、甲胺磷的回收率隨著溫度的升高有顯著的提高；45℃之后，敵敵畏的回收率隨溫度的升高趨于平緩，甚至會下降，其中甲胺磷的回收率隨著溫度的升高有明顯的下降。這可能是因為45℃之前，隨著提取溫度的升高，溶劑分子熱運動加劇，分子擴散速度增加，溶劑分子更容易通過刺梨的細胞壁等，敵敵畏、甲胺磷越來越多的進入溶劑中；45℃之后，不同農藥對熱的穩(wěn)定性不同，甚至有些農藥隨著溫度的升高降解很明顯。

2.4.2 提取時間對回收率的影響

提取時間對敵敵畏、甲胺磷回收率的影響結果如圖6、7。

圖6 時間對敵敵畏回收率影響

圖7 時間對甲胺磷回收率影響

由圖6、7可知，在提取溫度相同的條件下，提取時間在1～3min，隨著提取時間的延長，刺梨樣品中敵敵畏、甲胺磷的回收率有顯著的提高；3min之后，隨著提取時間的延長，刺梨中敵敵畏、甲胺磷的回收率總體呈上升趨勢。

3 結論

通過提取溫度及提取時間的變化對刺梨樣品中敵敵畏、甲胺磷加標回收率的影響進行分析。結果表明，采用氣相色譜-質譜聯(lián)用對刺梨樣品中敵敵畏、甲胺磷進行檢測時，提取溫度和提取時間對檢測結果有顯著影響；提取時間相同條件下，提取溫度在45℃范圍內，提高溫度有助于提高檢測結果的準確性，但溫度過高反而降低檢測結果的準確性；提取溫度相同條件下，延長提取時間有助于提高檢測結果的準確性，但結合檢測效率及耗能等，提取時間10min較為合適；尤其是對檢測要求較高的食藥材而言，選擇適當提高溫度和提取時間是很有必要的。