孟洋，盧紅梅，楊雙全，章之柱，陳莉*，劉兵，王利萍

1(貴州大學(xué) 貴州省發(fā)酵工程與生物制藥重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，貴州 貴陽，550025)2(貴州大學(xué) 釀酒與食品工程學(xué)院，貴州 貴陽，550025) 3(貴州大學(xué) 化學(xué)與化工學(xué)院，貴州 貴陽，550025)

鐵皮石斛為蘭科石斛屬植物，藥食兩用，具有良好的藥用價(jià)值和生理功能，如生津益胃，清熱滋陰，美容養(yǎng)顏等[1-3]。鐵皮石斛中含有大量多糖[4]、黃酮[5]、多酚[6]、生物堿[7]等，具有抗氧化[8]、降血糖[9]、抗腫瘤[10]、抗菌[11]及神經(jīng)保護(hù)作用[12]等功效。鐵皮石斛花是石斛屬石斛草的花朵，同為食物與藥物[13]，每年5～7月、10～11月盛開，花期較短[14]。有研究表明，鐵皮石斛花中含有多糖、黃酮、多酚以及花色苷等，對(duì)體外抗氧化以及降血糖有一定的功效[15-17]。近年來，隨著鐵皮石斛種植面積的不斷擴(kuò)大，鐵皮石斛花的產(chǎn)量不斷增加，但主要研究仍集中于石斛莖部位，對(duì)鐵皮石斛花研究較少，其開發(fā)的產(chǎn)品形式單一，且價(jià)格昂貴，既限制了消費(fèi)群體又易導(dǎo)致資源浪費(fèi)[18]。本研究將鐵皮石斛花與菊花及茉莉花進(jìn)行復(fù)配，旨在得到一種兼具良好功效和口感，且價(jià)格適中，受眾廣泛的復(fù)合花茶產(chǎn)品。

超過一定范圍的自由基容易誘發(fā)人體疾病，加速機(jī)體衰老，抗氧化物質(zhì)通過消除自由基從而起到保護(hù)機(jī)體，減少損傷的作用[19]。目前，降血糖功效研究主要集中于體外、細(xì)胞及動(dòng)物實(shí)驗(yàn)三方面，體外實(shí)驗(yàn)通過降低α-葡萄糖苷酶和α-淀粉酶的活性來阻礙食物中碳水化合物的消化吸收，抑制這些酶就可以有效控制糖尿病患者的血糖水平[20]。繆園欣等[21]發(fā)現(xiàn)，鐵皮石斛花總黃酮對(duì)DPPH自由基、羥自由基有明顯的清除作用, 當(dāng)質(zhì)量濃度達(dá)10 mg/mL時(shí), 其清除率分別為89.77%和80.01%。本研究將石斛花茶與菊花、茉莉花進(jìn)行混料設(shè)計(jì)，以活性成分含量結(jié)合感官評(píng)價(jià)，通過權(quán)重評(píng)分方式得出最佳配比，同時(shí)對(duì)3種復(fù)配原料及復(fù)配花茶進(jìn)行了體外抗氧化及體外降血糖試驗(yàn)，旨在為拓展石斛花多元化產(chǎn)品的開發(fā)提供一定的理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

1.1.1 材料

鐵皮石斛花茶，實(shí)驗(yàn)室自制；茉莉花(干花)，山東才和銳生物技術(shù)有限公司；胎菊(干花)，中閩飄香食品有限公司。

1.1.2 試劑

濃硫酸，重慶茂業(yè)化學(xué)試劑有限公司；蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品、α-淀粉酶、α-葡萄糖苷酶、阿卡波糖、對(duì)硝基苯基- α-D-葡萄糖吡喃苷，上海源葉生物科技有限公司；福林酚、Tris、ABTS，北京索寶來科技有限公司；DPPH，梯希愛(上海)化成工業(yè)發(fā)展有限公司。

1.1.3 儀器與設(shè)備

智能型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱，上?，槴\實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司；智能化靜態(tài)微波真空干燥機(jī)，貴陽新奇微波工業(yè)有限責(zé)任公司；SPECTRA MAX 190光吸收全波長酶標(biāo)儀，美谷分子儀器(上海)有限公司；L5S紫外可見分光光度計(jì)，上海儀電分析儀器有限公司；KH-700V型超聲波清洗器，昆山禾創(chuàng)超聲儀器有限公司；VaCo5-Ⅱ-D真空冷凍干燥儀，德國Zirbus儀器公司。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 鐵皮石斛復(fù)配花茶制作工藝篩選

1.2.1.1 鐵皮石斛復(fù)配花茶工藝流程

鐵皮石斛復(fù)配花茶工藝流程如圖1所示。

圖1 工藝流程圖Fig.1 Process flow chart

1.2.2 指標(biāo)測(cè)定

1.2.2.1 茶湯制備

取鐵皮石斛復(fù)配花茶1 g，茶水比1∶50，用沸水沖泡2次，每次沖泡30 min，過濾，將2次所得的茶湯混合，待用。

1.2.2.2 苯酚-硫酸法測(cè)定多糖

樣品測(cè)定液的制備：準(zhǔn)確吸取2 mL茶湯至10 mL離心管中，準(zhǔn)確加入8 mL無水乙醇溶液，搖勻，4 ℃冷藏12 h，取出后4 000 r/min離心20 min，去上清，沉淀用體積分?jǐn)?shù)80%乙醇洗滌2次，每次加8 mL 80%(體積分?jǐn)?shù))乙醇，用蒸餾水將沉淀加熱溶解，定容至50 mL容量瓶中，搖勻，即得樣品測(cè)定液。

分別移取葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液(0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL)、水及待測(cè)液(作空白對(duì)照)1 mL于10 mL具塞試管中，補(bǔ)水至1 mL，加入5%苯酚溶液1 mL，搖勻，加入5 mL 濃硫酸，搖勻，90 ℃水浴20 min，冰浴5 min，在488 nm波長處測(cè)定吸光度。根據(jù)不同濃度的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液及其測(cè)定結(jié)果繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(y=9.925 7x+0.01，相關(guān)系數(shù)R2=0.999 5)，依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線和茶湯稀釋倍數(shù)，計(jì)算出茶湯樣品中多糖的含量[22]。

1.2.2.3 硝酸鋁比色法測(cè)定總黃酮

分別移取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液(0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0 mL)、水(作空白對(duì)照)及茶湯各1.0 mL于試管內(nèi)，補(bǔ)70%(體積分?jǐn)?shù))乙醇溶液至5 mL，加0.4 mL 50 g/L亞硝酸鈉水溶液，混勻，靜置6 min，加0.4 mL 100 g/L硝酸鋁水溶液，混勻，靜置6 min，加4 mL 40 g/L氫氧化鈉水溶液，混勻，反應(yīng)15 min，在510 nm 波長下測(cè)定其吸光度。根據(jù)不同濃度的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液及其測(cè)定結(jié)果繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(y=0.012 5x+0.009 4，相關(guān)系數(shù)R2=0.999 1)，依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線和茶湯稀釋倍數(shù)，計(jì)算出茶湯樣品中總黃酮的含量[23]。

1.2.2.4 福林酚法測(cè)定總酚

分別移取沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)溶液、水(作空白對(duì)照)及茶湯各1.0 mL于試管內(nèi)，加入5.0 mL蒸餾水，1 mL福林-酚試劑，充分混勻后加入 3 mL 75 g/L碳酸鈉溶液，振蕩搖勻，于75 ℃水浴中避光反應(yīng) 30 min，765 nm 波長下比色測(cè)定吸光度。根據(jù)不同濃度的沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)溶液及其測(cè)定結(jié)果繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(y=0.012 5x+0.009 4，相關(guān)系數(shù)R2=0.999 1)，依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線和茶湯稀釋倍數(shù)，計(jì)算出茶湯樣品中總酚的含量[24]。

1.2.3 感官評(píng)價(jià)

參照GB/T 23776—2018《茶葉感官評(píng)審方法》進(jìn)行測(cè)定。感官評(píng)分計(jì)算如公式(1)所示：

Y=A×a+B×b+...E×e

(1)

式中：Y,茶葉審評(píng)總得分；A、B...E,各品質(zhì)因子審評(píng)得分；a、b...c,各品質(zhì)因子評(píng)分系數(shù)。

1.2.4 石斛花復(fù)配茶復(fù)配方式篩選

利用鐵皮石斛花茶與菊花、茉莉花進(jìn)行混料設(shè)計(jì)中的單純形格子設(shè)計(jì)，參照多糖、多酚、黃酮提取方法以沸水浸提方式測(cè)定其多糖、黃酮、多酚含量變化，并結(jié)合感官評(píng)價(jià)進(jìn)行權(quán)重分析，得到鐵皮石斛復(fù)配花茶最佳復(fù)配方式。

表1 鐵皮石斛復(fù)配花茶單純形格子設(shè)計(jì)Table 1 Single-pure lattice design of Dendrobium candidum complex camellia

1.2.5 多指標(biāo)權(quán)重確定[25]

本試驗(yàn)采用綜合評(píng)價(jià)體系，各指標(biāo)所占權(quán)重比例由課題組評(píng)定得出，以功能成分和感官為考核目標(biāo)，產(chǎn)品研制的目標(biāo)是以抗氧化及降血糖功能為主，同時(shí)兼具較好口感。功能成分決定了產(chǎn)品的食用價(jià)值及產(chǎn)品品質(zhì)，而感官評(píng)分決定了口感及觀賞性，因此功能成分權(quán)重占75%，感官占25%。有研究表明，石斛花、菊花和茉莉花中的多糖、黃酮、多酚都是與抗氧化功能及降血糖功能相關(guān)的主要功能成分，因此每項(xiàng)分別占25%。故得到多糖、黃酮、多酚及感官評(píng)分權(quán)重系數(shù)分別為0.25、0.25、0.25、0.25。通過SPPSAU軟件進(jìn)一步采用層次分析法對(duì)該權(quán)重設(shè)定進(jìn)行了驗(yàn)證，各指標(biāo)成分的評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)見表2，建立的4項(xiàng)評(píng)價(jià)指標(biāo)成對(duì)比較判斷優(yōu)先矩陣見表3。

表2 各層次評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)Table 2 Grading criteria at all levels

表3 指標(biāo)成對(duì)比較判斷優(yōu)先矩陣Table 3 Indicator pairwise comparison judgment priority matrix

1.2.6 體外抗氧化及體外降血糖測(cè)定方法

1.2.6.1 DPPH自由基清除能力測(cè)定

分別配制質(zhì)量濃度為0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mg/mL的樣品水提液，參照王麗霞等[26]測(cè)定方法進(jìn)行測(cè)定。對(duì)DPPH自由基清除率計(jì)算如公式(2)所示：

(2)

式中：A0為 DPPH-乙醇溶液和蒸餾水的吸光度值；A1為 DPPH-乙醇溶液和樣品溶液的吸光度值；A2為樣品溶液和無水乙醇溶液的吸光度值。

1.2.6.2 超氧陰離子自由基清除率測(cè)定

分別配制質(zhì)量濃度為0.5、1.0、2.0、4.0、6.0、8.0 mg/mL的不同樣品溶液，參照張娥珍等[27]測(cè)定方法進(jìn)行測(cè)定。對(duì)超氧陰離子自由基的清除率計(jì)算如公式(3)所示：

(3)

式中：A0為用蒸餾水代替樣品提取液的吸光度；A1為樣品提取液與試劑的吸光度;A2為樣品溶液本身的吸光度，以蒸餾水代替鄰苯三酚。

1.2.6.3 羥自由基清除率的測(cè)定

分別配制質(zhì)量濃度為0.5、1.0、2.0、4.0、6.0、8.0 mg/mL的不同樣品溶液，參照王紅靜[28]測(cè)定方法進(jìn)行測(cè)定。羥自由基清除率計(jì)算如公式(4)所示：

(4)

式中：A0為用蒸餾水代替樣品提取液的吸光度；A1為樣品提取液與試劑的吸光度；A2為樣品溶液本身的吸光度，以蒸餾水代替0.3%雙氧水溶液。

1.2.6.4 鐵還原力的測(cè)定

分別配制質(zhì)量濃度為0.5、1.0、2.0、4.0、6.0、8.0 mg/mL的不同樣品溶液，參照王炬等[24]測(cè)定方法進(jìn)行測(cè)定；以VC為對(duì)照，實(shí)驗(yàn)重復(fù)3 次。

1.2.6.5 ABTS+自由基清除率的測(cè)定

以7 mmol/L ABTS、2.45 mmol/L K2S2O8等體積混合，室溫避光反應(yīng)16 h，用95%乙醇稀釋至混合溶液在734 nm處吸光度為0.70(±0.02)，得到ABTS+溶液。分別配制質(zhì)量濃度為0.25、0.5、0.75、1.0、2.0 mg/mL的不同樣品水提溶液，參照黎恩立[29]測(cè)定方法進(jìn)行測(cè)定。ABTS+自由基清除率計(jì)算如公式(5)所示：

(5)

式中：A0為用95%乙醇溶液代替樣品提取液的吸光度；A1為樣品提取液與試劑的吸光度；A2為樣品溶液本身的吸光度，以95%乙醇溶液代替ABTS+工作液。

1.2.6.6 α-葡萄糖苷酶抑制活性的測(cè)定

分別配制質(zhì)量濃度為0.5、1.0、2.0、4.0、6.0、8.0 mg/mL的不同樣品水提溶液，取50 μL樣品提取液于試管中，加入50 μL 0.5 U/mL α-葡萄糖苷酶溶液充分混合，在37 ℃下水浴10 min，加入50 μL 2.5 mmol/L對(duì)硝基苯基-α-D-葡萄糖吡喃苷溶液和200 μL磷酸鹽緩沖溶液(0.1 mol/L，pH 6.8)，在37 ℃下孵育30 min，最后加入500 μL 1 mol/L的碳酸鈉溶液終止反應(yīng)，在405 nm處測(cè)定吸光度[30]。α-葡萄糖苷酶抑制率計(jì)算如公式(6)所示：

(6)

式中：A0為用緩沖液代替樣品提取液的吸光度；A1為樣品提取液與試劑的吸光度;A2為樣品溶液本身的吸光度，以緩沖液代替α-葡萄糖苷酶液。

1.2.6.7 α-淀粉酶抑制活性的測(cè)定

分別配制質(zhì)量濃度為0.5、1.0、2.0、4.0、6.0、8.0 mg/mL的不同樣品溶液，參照譚青云等[31]測(cè)定方法進(jìn)行測(cè)定，利用公式(7)計(jì)算α-淀粉酶抑制率。

(7)

式中：A0為用去離子水代替樣品提取液的吸光度；A1為樣品提取液與試劑的吸光度；A2為樣品溶液本身的吸光度，以去離子水代替α-淀粉酶液。

1.3 數(shù)據(jù)分析

采用Design Expert(8.0)、Excel 2010、SPSS Statistics 20和Origin 9.0軟件分別進(jìn)行數(shù)據(jù)分析和圖表的繪制。

2 結(jié)果與分析

2.1 層次分析法確定多指標(biāo)權(quán)重

通過層次分析方法公式計(jì)算，得多糖、黃酮、多酚、感官評(píng)價(jià)權(quán)重系數(shù)均為0.25，隨機(jī)一致性比率CR=CI/RI，(CI為一致性指標(biāo)，RI為平均隨機(jī)一致性指標(biāo)) 為評(píng)價(jià)計(jì)算的權(quán)重系數(shù)是否合理的指標(biāo), 本實(shí)驗(yàn)CR=0.000<0.1，說明權(quán)重系數(shù)有效合理，可用于鐵皮石斛復(fù)配花茶復(fù)配方式綜合評(píng)分，詳見表4、表5。

表4 AHP層次分析結(jié)果Table 4 AHP hierarchical analysis results

表5 RI值表Table 5 RI value table

2.2 復(fù)配方式結(jié)果分析

表6列出了鐵皮石斛復(fù)配花茶水提物的多糖、多酚、黃酮的含量，利用Design Expert(8.0.6)軟件，對(duì)表4中的試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行二次多項(xiàng)回歸擬合，分別建立3個(gè)指標(biāo)(Y多糖，Y多酚，Y黃酮)的回歸模型，各回歸模型的方程如下：

Y多糖=21.48X1+17.08X2+17.99X3

Y多酚=19.69X1+17.83X2+30.77X3+13.72X1X2+2.16X1X3-2.51X2X3-56.50X1X2X3

Y黃酮=14.62X1+16.05X2+51.42X3+27.82X1X2-1.84X1X3-11.74X2X3

表6 混料試驗(yàn)結(jié)果 單位：mg/100mL

對(duì)以上3個(gè)模型進(jìn)行分析，其結(jié)果分別見表7～表9。由表7可知，二次模型的F值為5.03，大于F0.05(2，7)=4.74，說明P<0.05，所得回歸方程在≤0.05時(shí)達(dá)到顯著，多糖含量回歸方程的決定系數(shù)R2=0.589 7，說明模型的擬合度較好。由表8可知，二次模型的F值為102.17，大于F0.01(6，3)=27.91，說明P<0.01，所得的回歸方程極顯著，多酚含量回歸方程的決定系數(shù)R2=0.995 1，說明模型的擬合度很好，回歸方程校正系數(shù)為R2(adj)=0.958 4。由表9可知，二次模型的F值為313.39，大于F0.01(5，4)=15.52，說明P<0.01，表明所得的黃酮含量的回歸方程達(dá)到極顯著，黃酮含量回歸方程的決定系數(shù)R2=0.997 5，說明模型的擬合度很好，回歸方程校正系數(shù)為R2(adj)=0.994 3，表明99.43%試驗(yàn)數(shù)據(jù)的變異性可用該回歸模型進(jìn)行解釋。此模型在被研究的整個(gè)回歸區(qū)域擬合良好，可用于響應(yīng)值的預(yù)測(cè)。

表7 多糖含量回歸模型方差分析Table 7 Analysis of variance for regression model of polysaccharide content

表8 多酚含量回歸模型方差分析Table 8 Analysis of variance of polyphenol content regression model

表9 黃酮含量回歸模型方差分析Table 9 Analysis of variance of flavonoid content regression model

A-應(yīng)響應(yīng)面圖；B-等高線圖圖2 三種組分對(duì)黃酮含量的影響Fig.2 Effects of three components on flavonoids content

由黃酮含量模型得到石斛花茶、茉莉花、菊花對(duì)黃酮含量響應(yīng)面圖及等高線圖(圖2)。從圖2中的響應(yīng)曲面圖可知黃酮含量的最大值約為51.27 mg/100mL。

2.2.1 不同復(fù)配方式的感官評(píng)價(jià)結(jié)果

由表10可知，經(jīng)過混料設(shè)計(jì)得到的10種配比方式對(duì)感官品質(zhì)的影響較大，最大感官評(píng)分與最小感官評(píng)分差值達(dá)到7.01分，其中S5試驗(yàn)組評(píng)分最高，達(dá)到92.04分。

表10 不同復(fù)配方式感官評(píng)價(jià)結(jié)果分析Table 10 Analysis of sensory evaluation results of different compound methods

2.2.2 綜合分析

通過對(duì)表中11個(gè)試驗(yàn)組進(jìn)行多糖、黃酮、多酚含量測(cè)定，結(jié)合感官評(píng)價(jià)通過權(quán)重方式得出綜合結(jié)果，如表11所示。10個(gè)試驗(yàn)組評(píng)分相差較大，其中S5試驗(yàn)組評(píng)分最高，綜合得分為48.25，S1實(shí)驗(yàn)組為最低評(píng)分試驗(yàn)組，綜合得分為34.14，二者相差14.11分。因此，從石斛花復(fù)配茶復(fù)配方式選擇中可得出結(jié)論，S5試驗(yàn)組為最佳復(fù)配方式試驗(yàn)組，其配比為m(石斛花)∶m(茉莉花)∶m(菊花)=5∶1∶4，此配比水提物多糖、多酚、黃酮含量分別為18.89、30.85、51.27 mg/100mL，按所得配比進(jìn)行包裝保存待用。

表11 石斛復(fù)配花茶不同復(fù)配方式綜合結(jié)果分析Table 11 Analysis of comprehensive results of different compound methods of Dendrobium officinale

2.3 石斛花復(fù)配茶功能結(jié)果分析

對(duì)鐵皮石斛花、菊花、茉莉花及鐵皮石斛復(fù)配花茶進(jìn)行沸水浸提，提取方式與鐵皮石斛復(fù)配花茶茶湯提取方法相同，以VC為陽性對(duì)照對(duì)4種水浸提物進(jìn)行抗氧化研究。

2.3.2 體外抗氧化試驗(yàn)結(jié)果分析

2.3.2.1 DPPH自由基清除率

由圖3、表12可知，當(dāng)質(zhì)量濃度為1 mg/mL時(shí)，4種花茶水提物以及VC對(duì)DPPH自由基清除能力由大到小依次為VC、菊花、復(fù)配花茶、茉莉花、鐵皮石斛花茶，清除率分別達(dá)到(94.86%、83.88%、73.38%、59.84%、53.91%，其中菊花水提物對(duì)DPPH自由基清除率與鄺春林[32]的研究結(jié)果相近。通過對(duì)4種水提物與陽性對(duì)照VC的IC50值比較發(fā)現(xiàn)，VC的IC50值優(yōu)于4種花茶水提物，由低到高的順序是菊花、石斛復(fù)配花茶、茉莉花以及石斛花，IC50值分別為0.006、0.35、0.49、0.88、0.89 mg/mL。

圖3 DPPH自由基清除率結(jié)果Fig.3 DPPH free radical scavenging results

表12 IC50綜合結(jié)果Table 12 IC50 comprehensive results

2.3.2.2 羥自由基清除率的測(cè)定

由圖4、表12可知，在質(zhì)量濃度為8 mg/mL時(shí)，4種水提物以及VC對(duì)羥自由基的清除能力由大到小依次為VC、鐵皮石斛花茶、石斛復(fù)配花茶、菊花茶、茉莉花茶，清除率依次為98.37%、85.87%、73.91%、66.85%、60.60%。通過對(duì)4種水提物與陽性對(duì)照VC的IC50值比較發(fā)現(xiàn)，VC的IC50值為1.28 mg/L，優(yōu)于4種花茶水提物，由低到高的順序是鐵皮石斛花3.51 mg/L、鐵皮石斛花復(fù)配茶4.21 mg/L、菊花5.13 mg/L以及茉莉花5.88 mg/mL。

圖4 羥自由基清除率結(jié)果Fig.4 Hydroxyl radical clearance results

2.3.2.3 超氧陰離子自由基清除率的測(cè)定

由圖5、表12可知，4種花茶水提物以及VC對(duì)超氧陰離子自由基有較好的清除作用。在濃度為10 mg/mL時(shí)，VC對(duì)超氧陰離子自由基的清除率達(dá)到99.80%，高于4種水提物，其中菊花96.78 %、鐵皮石斛復(fù)配花茶84.37%、鐵皮石斛花57.24%、茉莉花51.65%。通過對(duì)4種水提物與陽性對(duì)照VC的IC50值比較發(fā)現(xiàn)，VC的IC50值為0.31 mg/mL，優(yōu)于4種花茶水提物，由低到高的順序是石斛復(fù)配花茶 5.70 mg/mL、菊花2.59 mg/mL、石斛花8.76 mg/mL以及茉莉花9.32 mg/mL。

圖5 超氧陰離子自由基清除率結(jié)果Fig.5 Results of superoxide anion clearance

2.3.2.4 鐵還原能力測(cè)定

在鐵還原能力測(cè)定中，吸光值越高，代表還原能力越強(qiáng)，由圖6可知，在8 mg/mL濃度時(shí)陽性對(duì)照VC的吸光值為2.06，大于4種花茶水提物吸光度，即還原能力最強(qiáng)，4種花茶水提物鐵還原吸光值大小依次為菊花1.40、鐵皮石斛復(fù)配花茶1.28、鐵皮石斛花0.88、茉莉花0.51。

圖6 鐵還原能力結(jié)果Fig.6 Results of iron reduction capability

2.3.2.5 ABTS+自由基清除率的測(cè)定

由圖7、表12可知，4種花茶水提物以及VC對(duì)ABTS+自由基有較好的清除作用。在質(zhì)量濃度為2 mg/mL時(shí)，VC對(duì)ABTS+自由基的清除率達(dá)到99.84%，高于4種花茶，其中菊花99.35%、鐵皮石斛復(fù)配花茶96.91%、鐵皮石斛花75.48%、茉莉花46.10%。通過對(duì)4種水提物與陽性對(duì)照VC的IC50值比較發(fā)現(xiàn)，VC的IC50值為0.04 mg/mL，低于4種花茶水提物，由低到高的順序是菊花0.65 mg/mL、石斛復(fù)配花茶0.78 mg/mL、石斛花1.34 mg/mL以及茉莉花2.30 mg/mL。

圖7 ABTS+自由基清除率結(jié)果Fig.7 ABTS+ free radical scavenging results

通過4種花茶水提物以及陽性對(duì)照VC對(duì)以上5種自由基的清除率進(jìn)行測(cè)定，可以得出結(jié)論,隨著樣品濃度的增加，鐵皮石斛花茶、復(fù)配茶對(duì)5種自由基的清除率也不斷增加，直至清除率恒定。VC的抗氧化活性高于菊花、鐵皮石斛復(fù)配花茶、鐵皮石斛花茶以及茉莉花，且經(jīng)過復(fù)配所得產(chǎn)品抗氧化活性明顯強(qiáng)于鐵皮石斛花茶。

2.3.3 體外降血糖試驗(yàn)結(jié)果分析

2.3.3.1 α-葡萄糖苷酶抑制活性試驗(yàn)

由圖8、表13可知，鐵皮石斛花茶、復(fù)配茶、菊花及阿卡波糖對(duì)α-葡萄糖苷酶有較好的抑制作用，而茉莉花對(duì)α-葡萄糖苷酶的抑制作用較弱。在質(zhì)量濃度為8 mg/mL時(shí)，阿卡波糖對(duì)α-淀粉酶的抑制率達(dá)到80.90%，高于4種水提物，其中石斛花茶71.21%、石斛花復(fù)配茶63.78%、菊花57.80%、茉莉花36.52%。通過對(duì)4種花茶水提物與陽性對(duì)照阿卡波糖的IC50值比較發(fā)現(xiàn)，阿卡波糖的IC50值為1.60 mg/mL，低于4種花茶，由低到高的順序是鐵皮石斛花4.47 mg/mL、鐵皮石斛花復(fù)配茶5.86 mg/mL、菊花6.57 mg/mL。茉莉花對(duì)α-葡萄糖苷酶抑制作用較弱，所以不計(jì)算IC50值。

圖8 α-葡萄糖苷酶活性抑制結(jié)果Fig.8 Results of inhibition of α-glucosidase activity

表13 α-葡萄糖苷酶、α-淀粉酶活性IC50Table 13 α-glucosidase and α-amylase activity IC50

2.3.3.2 α-淀粉酶抑制活性試驗(yàn)

由圖9、表13可知，鐵皮石斛花茶、復(fù)配茶以及阿卡波糖對(duì)α-淀粉酶有較好的抑制作用，而菊花與茉莉花對(duì)α-淀粉酶的抑制作用較弱。在質(zhì)量濃度為10 mg/mL 時(shí)，阿卡波糖對(duì)α-淀粉酶的抑制率達(dá)到99.27%，高于4種花茶水提物，其中鐵皮石斛花89.94%、石斛復(fù)配花茶70.85%、菊花32.79%、茉莉花10.36%。通過對(duì)4種水提物與陽性對(duì)照阿卡波糖的IC50值比較發(fā)現(xiàn)，阿卡波糖的IC50值為1.39 mg/mL，低于4種花茶水提物，由低到高的順序是石斛花3.26 mg/mL、石斛花復(fù)配茶5.50 mg/mL。由于菊花與茉莉花對(duì)α-淀粉酶抑制作用較弱，所以不計(jì)算IC50值。

圖9 α-淀粉酶活性抑制結(jié)果Fig.9 Results of inhibition of α-amylase activity

通過3種原料與鐵皮石斛復(fù)配花茶對(duì)以上2種酶進(jìn)行活性抑制試驗(yàn)，可以得出結(jié)論，隨著樣品質(zhì)量濃度的增加，對(duì)2種酶的活性抑制率也不同程度增加。阿卡波糖的降血糖活性優(yōu)于鐵皮石斛花茶、鐵皮石斛花復(fù)配茶、菊花以及茉莉花，鐵皮石斛花茶與鐵皮石斛復(fù)配花茶降血糖效果較好，其抑制能力強(qiáng)于菊花及茉莉花，在一定濃度下有較好的降血糖作用。

綜上所述，該復(fù)配比例能較好地提高提高花茶產(chǎn)品的抗氧化活性，其原因可能是在復(fù)配過程中增加了黃酮及多酚的含量，使抗氧化活性明顯增強(qiáng)；相較于石斛花茶，該復(fù)配比例的降血糖作用有一定降低，其原因可能是在復(fù)配過程中，多糖含量有所降低，但總體來看，其降低幅度不大，且要高于菊花和茉莉花，而且復(fù)配后的花茶比單一的石斛花茶口感更豐富，價(jià)格適中。因此，對(duì)于促進(jìn)石斛花資源的開發(fā)利用，拓寬消費(fèi)群體具有積極意義。

3 結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)將石斛花茶與茉莉花、菊花進(jìn)行混料設(shè)計(jì)，以多糖、黃酮及多酚含量為篩選指標(biāo)，結(jié)合感官評(píng)價(jià)通過權(quán)重方式得到石斛花復(fù)配茶的最優(yōu)復(fù)配比例為，m(石斛花)∶m(茉莉花)∶m(菊花)=5∶1∶4，此配比有效成分含量綜合較高，多糖為18.89 mg/100mL、多酚為 30.85 mg/100mL、黃酮為51.27 mg/100mL，且滋味最好，普遍接受度高。在功能性研究中發(fā)現(xiàn)，隨著質(zhì)量濃度的增加，鐵皮石斛花茶與復(fù)配茶對(duì)體外抗氧化及降血糖的作用明顯增強(qiáng)，同濃度條件下復(fù)配茶對(duì)5種自由基抑制率普遍高于鐵皮石斛花，證明此復(fù)配比例有利于提高抗氧化活性功效；在降血糖活性研究中，鐵皮石斛花復(fù)配茶降血糖效果明顯高于菊花和茉莉花，略低于鐵皮石斛花茶。本研究制備得到了一種兼具良好口感與功能性的鐵皮石斛花復(fù)配茶產(chǎn)品，為其工業(yè)化生產(chǎn)提供了理論支持，有利于推進(jìn)石斛產(chǎn)業(yè)的進(jìn)一步發(fā)展。