劉加紅 盤文政 呂亞瓊

摘要：根結(jié)線蟲病是一種重要的煙草土傳病害，在局部煙區(qū)發(fā)生嚴(yán)重，造成過(guò)巨大經(jīng)濟(jì)損失。采集受根結(jié)線蟲危害的植煙區(qū)土壤，分離出線蟲后，利用已有菌種庫(kù)資源，通過(guò)室內(nèi)菌株發(fā)酵液滅殺線蟲活性試驗(yàn)，篩選出了4株具有防治根結(jié)線蟲的生防菌株，菌株發(fā)酵液原液室內(nèi)殺線效果良好，均達(dá)到80%以上，隨著稀釋倍數(shù)增加滅殺活性不斷降低，320倍時(shí)滅殺活性完全喪失。將篩選出的功能菌與腐熟的萬(wàn)壽菊秸稈有機(jī)肥復(fù)配后形成功能型生物有機(jī)肥，在植煙區(qū)通過(guò)田間小區(qū)試驗(yàn)驗(yàn)證其功能，結(jié)果表明，施用功能型生物有機(jī)肥后，能夠促進(jìn)煙株的早生快發(fā)，在后期能夠促進(jìn)葉片開片，改善烤煙農(nóng)藝性狀，但根結(jié)線蟲危害情況并無(wú)改善，說(shuō)明在根結(jié)線蟲危害極為嚴(yán)重的地塊，生防功能有機(jī)肥對(duì)根結(jié)線蟲的防治效果有限。

關(guān)鍵詞：煙草;根結(jié)線蟲;生防菌株;萬(wàn)壽菊秸稈;農(nóng)藝性狀

煙草（Nicotiana tabacum L.）是茄科煙草屬，一年生或有限多年生草本植物，原產(chǎn)于南美洲。目前在我國(guó)云南、貴州等地大面積種植，是我國(guó)重要的經(jīng)濟(jì)作物之一，其成熟葉片主要用于卷煙生產(chǎn)，具有極高的經(jīng)濟(jì)價(jià)值。因此在烤煙生產(chǎn)過(guò)程中，提高煙葉產(chǎn)量和品質(zhì)極為重要，而煙草病害是影響煙葉產(chǎn)量和品質(zhì)的重要因素[1-3]。

其中，根結(jié)線蟲病是煙草種植的主要病害之一，嚴(yán)重影響煙草的高質(zhì)高產(chǎn)[4-5]，在我國(guó)各大煙草種植區(qū)均有發(fā)生，且危害嚴(yán)重，每年因根結(jié)線蟲危害造成的損失巨大。據(jù)統(tǒng)計(jì)，全國(guó)根結(jié)線蟲直接危害所造成的煙葉經(jīng)濟(jì)損失占侵染性病害造成損失的5.7%[6]，嚴(yán)重制約煙葉的生產(chǎn)發(fā)展。但是由于該病侵染的特殊性、為害的隱蔽性而對(duì)防治工作造成了極大的困擾[7]。并且受環(huán)境和經(jīng)濟(jì)水平所限，我國(guó)大部分缺水旱作煙區(qū)無(wú)法開展水旱輪作，因此多采用化學(xué)手段防治[8-10]，雖取得了一些成效，但因其選擇性差、高殘留和不易降解，也造成了煙葉農(nóng)藥殘留增加、農(nóng)作物生態(tài)環(huán)境被破壞、煙葉品質(zhì)下降、環(huán)境污染加重、抗藥性問(wèn)題日益突出等后果[11-13]。

隨著國(guó)家煙草專賣局提倡綠色防控理念，減少化學(xué)農(nóng)藥使用，采用微生物菌劑或其他綠色防控措施替代化學(xué)農(nóng)藥，已經(jīng)成為煙草病蟲害防控的主要思路。因此，篩選出具有生防功能的微生物，將其應(yīng)用到煙草生產(chǎn)中，并評(píng)價(jià)其針對(duì)煙草根結(jié)線蟲的防控效果，對(duì)煙草根結(jié)線蟲的防控、生態(tài)環(huán)境的保護(hù)以及人們生命健康具有重大意義[14]。

萬(wàn)壽菊別稱臭芙蓉，一年生草本花卉，其花朵提取的色素被廣泛用于食品、化妝品、煙草、醫(yī)藥及禽類飼料中[15-17]。由于其用途廣泛以及具備的經(jīng)濟(jì)價(jià)值，在曲靖地區(qū)大面積種植。萬(wàn)壽菊主要經(jīng)濟(jì)器官是花朵，采收后會(huì)產(chǎn)生大量秸稈，但由于萬(wàn)壽菊秸稈中木質(zhì)素、纖維素的含量較高，直接還田難以自然降解，而且含有多種揮發(fā)性化學(xué)成分，不能作為飼料使用。目前萬(wàn)壽菊秸稈大部分就地焚燒或曬干后作農(nóng)家燃料，均未能得到有效利用，造成了資源的極大浪費(fèi)，且對(duì)環(huán)境造成一定污染[18]。國(guó)內(nèi)多個(gè)學(xué)者均針對(duì)此問(wèn)題進(jìn)行研究，并且有研究表明，萬(wàn)壽菊秸稈提取物對(duì)根結(jié)線蟲具有較好的抑殺作用[19]。

本研究第1階段利用已有菌種庫(kù)資源，篩選能夠防治煙草根結(jié)線蟲的生防菌株，探究其對(duì)煙草根結(jié)線蟲的滅殺效果，同時(shí)研究具有殺線潛力菌株與完全腐熟萬(wàn)壽菊秸稈有機(jī)肥的復(fù)配機(jī)制。第2階段采用田間小區(qū)試驗(yàn)的方式，開展以萬(wàn)壽菊秸稈為原料開發(fā)的生防功能有機(jī)肥對(duì)烤煙生產(chǎn)和線蟲危害的影響研究，通過(guò)對(duì)施肥前后植煙土壤養(yǎng)分、煙株的田間長(zhǎng)勢(shì)長(zhǎng)相和農(nóng)藝性狀、線蟲的發(fā)生狀況、經(jīng)濟(jì)性狀和煙葉品質(zhì)等數(shù)據(jù)的綜合分析，客觀評(píng)價(jià)生防功能有機(jī)肥在曲靖煙區(qū)的應(yīng)用效果，整個(gè)研究對(duì)曲靖植煙區(qū)煙草根結(jié)線蟲及土壤保育具有重要意義，并且為后期的推廣應(yīng)用提供技術(shù)支撐。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

供試菌株為云南省微生物發(fā)酵工程研究中心有限公司自主篩選研發(fā)的具有殺線作用的生防菌株。

供試根結(jié)線蟲采自曲靖市沾益區(qū)大坡鄉(xiāng)植煙區(qū)受根結(jié)線蟲侵染的煙株，煙草品種為云煙97，取受侵染煙株根際土，采用蔗糖離心浮選法分離根結(jié)線蟲。

供試地為曲靖市沾益區(qū)大坡鄉(xiāng)。試驗(yàn)時(shí)間為2019年5—12月。供試作物為煙草品種（云煙97）。

供試肥料：煙草專用復(fù)合肥（氮、P2O5、K2O含量分別為15%、8%、25%）、普通過(guò)磷酸鈣（P2O5含量≥17%）、硝酸鉀（氮、P2O5、K2O含量分別為135%、0%、44.5%）、硫酸鉀（K2O含量≥50%）、鈣鎂磷肥（P2O5含量≥18%）、生防功能有機(jī)肥5號(hào)（萬(wàn)壽菊秸稈有機(jī)肥中添加功能菌Q1、Q2、WSWFJ5），生防功能有機(jī)肥9號(hào)（萬(wàn)壽菊秸稈有機(jī)肥中添加功能菌Q1、Q2、WSWFJ9）、生防功能有機(jī)肥11號(hào)（萬(wàn)壽菊秸稈有機(jī)肥中添加功能菌Q1、Q2、WSWFJ11）、生防功能有機(jī)肥12號(hào)（萬(wàn)壽菊秸稈有機(jī)肥中添加功能菌Q1、Q2、WSWFJ12）。

蔗糖溶液的配制：1 000 mL純凈水+454 g蔗糖（白糖）。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 蔗糖離心懸浮法分離根結(jié)線蟲 按李美芹等的專利中提及的蔗糖離心懸浮法進(jìn)行根結(jié)線蟲的分離[20]。分離完成后，取試管下部帶有線蟲的液體，取1 mL置于培養(yǎng)皿中，于體式顯微鏡下計(jì)數(shù)。

1.2.2 具有拮抗煙草根結(jié)線蟲的功能菌株篩選

1.2.2.1 不同生防菌株對(duì)根結(jié)線蟲滅殺活性測(cè)定 將菌種庫(kù)保存的具有殺線功能的菌株分別接種于Luria-Bertani（LB）液體培養(yǎng)基中進(jìn)行活化，即37 ℃、180 r/min 培養(yǎng)48 h，后將菌液濃度稀釋至 1億CFU/mL，取1 mL置于48孔細(xì)胞培養(yǎng)板中，再加入線蟲懸浮液100 μL（約 100頭）混勻，25 ℃靜置12 h后，于光學(xué)顯微鏡下觀察，記錄線蟲存活情況，計(jì)算校正死亡率（僵直不動(dòng)為死體，彎曲蠕動(dòng)為活體）。設(shè)無(wú)菌LB液體培養(yǎng)基及萬(wàn)壽菊秸稈有機(jī)肥浸出液處理作為對(duì)照，每個(gè)處理設(shè)置5個(gè)重復(fù)。

根據(jù)以下公式計(jì)算線蟲的校正致死率：致死率=死亡線蟲數(shù)/供試線蟲數(shù)×100%;

校正致死率=（處理致死率-對(duì)照致死率）/（1-對(duì)照致死率）×100%。

選取上述試驗(yàn)中對(duì)線蟲校正死亡率在80%以上的菌株分別進(jìn)行處理時(shí)間及處理濃度的測(cè)定，即利用其發(fā)酵原液分別處理線蟲30、60、90、120、150、180 min;利用其發(fā)酵原液以及10、20、40、80、160、320、640倍的稀釋液分別處理線蟲，觀察記錄線蟲的活性情況，計(jì)算校正死亡率，每個(gè)處理設(shè)置5次重復(fù)。

1.2.2.2 不同生防菌株在溫室大棚內(nèi)對(duì)根結(jié)線蟲防效的測(cè)定 試驗(yàn)于云南省微生物發(fā)酵工程研究中心有限公司試驗(yàn)基地溫室大棚內(nèi)進(jìn)行，將健康且長(zhǎng)勢(shì)一致的煙苗移栽至裝有從受危害嚴(yán)重地區(qū)（曲靖市沾益區(qū)大坡鄉(xiāng)）采集的根際土壤的花盆中，制備供試菌株發(fā)酵液，在煙苗移栽后3 d，每盆分別灌根300 mL，同時(shí)設(shè)清水、LB液體培養(yǎng)基、萬(wàn)壽菊秸稈有機(jī)肥浸出液3個(gè)處理作為對(duì)照。90 d后取煙株根系調(diào)查病情指數(shù)，分級(jí)并記錄結(jié)果，調(diào)查方法采用GB/T 23222—2008 《煙草病蟲害分級(jí)及調(diào)查方法》。

1.2.3 功能微生物與完全腐熟的萬(wàn)壽菊秸稈有機(jī)肥復(fù)配 利用能夠防治煙草青枯病的生防菌1號(hào)（Q1）、能夠防治煙草黑脛病的生防菌2號(hào)（Q2）與上述試驗(yàn)中防效較好的菌株分別復(fù)配后添加到完全腐熟的萬(wàn)壽菊秸稈有機(jī)肥中，添加量為肥料總質(zhì)量的1%，添加結(jié)束后按倉(cāng)庫(kù)正常堆貯條件堆放，定期檢測(cè)各生防功能菌的有效活菌數(shù)，同時(shí)每天定時(shí)檢測(cè)堆體上、中、下層的溫度，連續(xù)檢測(cè)10 d，并記錄分析。

1.2.4 植煙地區(qū)田間效果驗(yàn)證 試驗(yàn)安排在曲靖市沾益區(qū)大坡鄉(xiāng)，試驗(yàn)地塊往年發(fā)病較為嚴(yán)重，試驗(yàn)前對(duì)土壤中線蟲的蟲口密度進(jìn)行了統(tǒng)計(jì)，得出土壤中線蟲的蟲口密度為56頭/100 g。

1.2.4.1 試驗(yàn)設(shè)計(jì) 試驗(yàn)采用隨機(jī)區(qū)組設(shè)計(jì)，6個(gè)處理，3次重復(fù)，共18個(gè)小區(qū)。

處理1：空白對(duì)照，不施用任何有機(jī)肥料;處理2：施用萬(wàn)壽菊秸稈有機(jī)肥200 g/株;處理3：施用生防功能有機(jī)肥5號(hào)200 g/株;處理4：施用生防功能有機(jī)肥9號(hào)200 g/株;處理5：施用生防功能有機(jī)肥11號(hào)200 g/株;處理6：施用生防功能有機(jī)肥12號(hào)200 g/株。

每個(gè)小區(qū)植煙60株，株行距為120 cm×60 cm，植煙13 890株/hm2。每個(gè)處理施純氮97.5 kg/hm2，氮、磷、鉀質(zhì)量比為1 ∶ 1.5 ∶ 3，各處理肥料具體用量詳見(jiàn)表1。

施肥方法：煙草專用復(fù)合肥、普鈣、硫酸鉀、萬(wàn)壽菊秸稈有機(jī)肥和生防功能有機(jī)肥作基肥，其中萬(wàn)壽菊秸稈有機(jī)肥和生防功能有機(jī)肥在移栽前塘施，煙草專用復(fù)合肥、普鈣和硫酸鉀在移栽時(shí)中層環(huán)施;硝酸鉀作追肥，在移栽后30 d左右兌水澆施。

植煙株數(shù)按13 890株/hm2計(jì)，單株肥料用量見(jiàn)表2。

1.2.4.2 土壤養(yǎng)分調(diào)查 在施肥前取一個(gè)基礎(chǔ)土樣，烤煙采烤后每個(gè)處理各取1個(gè)土樣，合計(jì)7個(gè)土樣（每個(gè)土樣1 kg），對(duì)每個(gè)樣品的土壤pH值、有機(jī)質(zhì)、全氮、全磷、全鉀、水解性氮、有效磷、速效鉀的含量進(jìn)行檢測(cè)分析。

1.2.4.3 生育期調(diào)查 分別觀察記錄每個(gè)處理50%煙株達(dá)到團(tuán)棵、旺長(zhǎng)、現(xiàn)蕾、封頂、采烤等生育期的時(shí)間。

1.2.4.4 農(nóng)藝性狀調(diào)查 在移栽后50 d和采烤前，每個(gè)小區(qū)試驗(yàn)選擇5株有代表性的煙株測(cè)量其株高、莖圍、葉片數(shù)、最大葉長(zhǎng)和最大葉寬等農(nóng)藝性狀。

1.2.4.5 病害發(fā)生情況調(diào)查 在整個(gè)大田生育期對(duì)其他主要病害的發(fā)生情況以及采烤后取根系調(diào)查各處理根結(jié)線蟲的發(fā)生情況及病情指數(shù)進(jìn)行調(diào)查分級(jí)并記錄結(jié)果，調(diào)查方法采用GB/T 23222—2008《煙草病蟲害分級(jí)及調(diào)查方法》。

1.2.4.6 產(chǎn)質(zhì)量調(diào)查統(tǒng)計(jì) 每個(gè)處理單獨(dú)掛牌烘烤，依據(jù)GB 2635—1992《烤煙》中42級(jí)國(guó)家烤煙分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)分級(jí)，并統(tǒng)計(jì)產(chǎn)量和產(chǎn)值。各處理分別選取X2F、C3F、B2F（X2F表示下部葉橘黃色2級(jí)煙、C3F表示中部葉橘黃色3級(jí)煙、B2F表示上部葉橘黃色2級(jí)煙）各1 kg統(tǒng)一送檢，進(jìn)行煙葉內(nèi)在化學(xué)成分分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 具有拮抗煙草根結(jié)線蟲的菌株篩選

2.1.1 具有滅殺根結(jié)線蟲的功能生防菌篩選 由表3可知，利用試驗(yàn)前期篩選得到的對(duì)線蟲具有滅殺活性的7株生防菌再次進(jìn)行煙草根結(jié)線蟲滅殺活性的篩選發(fā)現(xiàn)，各菌株發(fā)酵液均有滅殺活性，其中5、9、11、12號(hào)菌對(duì)線蟲的校正致死率都在80%以上，分別達(dá)81.12%、84.28%、85.91%、82.36%，后續(xù)試驗(yàn)將選取以上4個(gè)菌株進(jìn)一步開展。

2.1.2 不同稀釋倍數(shù)發(fā)酵液對(duì)線蟲活性的影響 由圖1可知，不同稀釋倍數(shù)發(fā)酵液對(duì)根結(jié)線蟲的校正死亡率隨著發(fā)酵倍數(shù)的增加而降低。稀釋40倍后，各生防功能菌的抑殺活性大幅降低，稀釋160倍后，生防菌的校正致死率均低于10%，稀釋320倍后，各生防菌已基本喪失抑殺活性。

2.1.3 不同處理時(shí)間發(fā)酵液對(duì)線蟲活性的影響 由圖2可知，隨著各菌株發(fā)酵液對(duì)線蟲的處理時(shí)間增長(zhǎng)，對(duì)線蟲的抑殺活性越強(qiáng)，處理時(shí)間為2 h時(shí)，9號(hào)、11號(hào)菌株發(fā)酵液校正死亡率大幅高于5號(hào)、12號(hào)菌株發(fā)酵液，且較為相近，分別為81.69%和8159%;處理時(shí)間為3 h時(shí)，9號(hào)、11號(hào)菌株發(fā)酵液依然極為相近，且均高于其余2株菌株發(fā)酵液。整體而言，9號(hào)與11號(hào)菌株發(fā)酵液對(duì)線蟲抑殺活性較高，且2 h后隨著時(shí)間的延長(zhǎng)抑殺活性增幅較小。

2.1.4 不同生防菌株對(duì)根結(jié)線蟲溫室煙草盆栽防效的測(cè)定 由表4的生防結(jié)果可知，4株生防功能能菌對(duì)煙草根結(jié)線蟲均具有一定的防效，生防功能菌的病情指數(shù)均低于對(duì)照，生防效果依次為WSWFJ11>WSWFJ5>WSWFJ12>WSWFJ9，但本試驗(yàn)的結(jié)果相較于圖1、圖2的結(jié)果而言，并未呈現(xiàn)出一致性。

2.2 功能功能微生物與腐熟萬(wàn)壽菊秸稈復(fù)配

由表5可知，功能微生物與萬(wàn)壽菊秸稈有機(jī)肥復(fù)配后，功能微生物有效活菌數(shù)雖呈下降趨勢(shì)，但參照NY 884—2012《生物有機(jī)肥執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)》中有效活菌數(shù)≥0.2億CFU/g的要求，該肥料遠(yuǎn)超生物有機(jī)肥標(biāo)準(zhǔn)。生防功能微生物加入時(shí)采用的是離心孢子液的形式，其加入的初始量均大于2.0億CFU/g，由于功能菌種均為芽孢桿菌，加之其存活形態(tài)均為芽孢，故其可在有機(jī)肥中長(zhǎng)久存活，且保持活性。各處理中有效活菌數(shù)在180 d內(nèi)均出現(xiàn)下降現(xiàn)象，但其有效活菌數(shù)均維持在1.2億CFU/g以上。

2.3 植煙地區(qū)田間效果驗(yàn)證

2.3.1 生防功能有機(jī)肥對(duì)烤煙大田生育期的影響 由表6可知，不同處理的大田生育期從移栽至封頂?shù)臅r(shí)間基本一致，說(shuō)明施用生防功能有機(jī)肥對(duì)烤煙前、中期的生育期影響不大，也可能是由于試驗(yàn)區(qū)域前期降水量過(guò)低，導(dǎo)致煙株生長(zhǎng)緩慢，未出現(xiàn)生育期差異，后期由于根結(jié)線蟲危害較為嚴(yán)重，已失去采烤價(jià)值，因此煙葉的成熟期未統(tǒng)計(jì)。

2.3.2 生防功能有機(jī)肥對(duì)植煙土壤養(yǎng)分的影響 由表7可知，煙葉采收后各處理的土壤pH值均下降，以處理1的降幅最大;各處理有機(jī)質(zhì)、全氮、全磷、全鉀和速效鉀含量差別不大;處理1、處理2、處理6的水解性氮含量增加，處理3、處理4、處理5降低;處理1、處理2、處理4、處理6的有效磷含量增加，處理3、處理5降低。

2.3.3 生防功能有機(jī)肥對(duì)烤煙農(nóng)藝性狀的影響 移栽后55 d和采烤前各處理煙株農(nóng)藝性狀調(diào)查結(jié)果見(jiàn)表8。移栽后55 d，處理4的農(nóng)藝性狀優(yōu)于其他處理，其株高與其他處理均差異顯著（P<0.05），莖圍與處理1、處理3差異顯著，單株葉數(shù)與處理1、處理2、處理3差異顯著，中部葉最大葉面積與處理1、處理2、處理3、處理6差異顯著。采烤前，以處理4的農(nóng)藝性狀整體表現(xiàn)最優(yōu)，其單株葉數(shù)與處理1、處理2、處理3差異顯著，中部葉最大葉面積與處理2、處理5、處理6差異顯著。

綜合來(lái)看，處理4在前期能夠促進(jìn)煙株的早生快發(fā)，在后期能夠促進(jìn)葉片開片，改善烤煙農(nóng)藝性狀。

2.3.4 生防功能有機(jī)肥對(duì)烤煙病害發(fā)生情況的影響

2.3.4.1 生防功能有機(jī)肥對(duì)根結(jié)線蟲發(fā)生情況的影響 由表9可知，各處理的根結(jié)線蟲病情指數(shù)均在97.00以上，根系干質(zhì)量差別也不大。說(shuō)明在根結(jié)線蟲危害極為嚴(yán)重的地塊，生防功能有機(jī)肥對(duì)根結(jié)線蟲的防治效果不理想。

2.3.4.2 生防功能有機(jī)肥對(duì)烤煙其他主要病害的發(fā)生情況的影響 由表10可知，該地塊其他主要病害為青枯病，主要出現(xiàn)在烤煙生育前期，處理4、處理5、處理6的發(fā)病率低于處理1，說(shuō)明生防功能有機(jī)肥9號(hào)、11號(hào)及12號(hào)對(duì)青枯病發(fā)生有抑制作用，其中處理4的病情指數(shù)最低，說(shuō)明生防功能有機(jī)肥9號(hào)對(duì)青枯病預(yù)防效果最明顯。

2.3.5 生防功能生物有機(jī)肥料對(duì)煙株產(chǎn)值及產(chǎn)量的影響 由于前期干旱，后期整塊試驗(yàn)地根結(jié)線蟲病危害極為嚴(yán)重，烤煙失去采烤價(jià)值，烤煙經(jīng)濟(jì)性狀未統(tǒng)計(jì)。

2.3.6 生防功能有機(jī)肥對(duì)煙葉化學(xué)成分的影響 由于前期干旱，后期整塊試驗(yàn)地根結(jié)線蟲病危害極為嚴(yán)重，烤煙失去采烤價(jià)值，烤煙未采烤，因此未分析煙葉化學(xué)成分。

3 結(jié)論與討論

本研究利用云南省微生物發(fā)酵工程研究中心有限公司菌種庫(kù)中7株具有殺線蟲功能的生防功能菌篩選出的發(fā)酵液研究發(fā)現(xiàn)，對(duì)煙草根結(jié)線蟲的校正致死率在80%以上的生防菌株包括 WSWFJ5、WSWFJ9、WSWFJ11、WSWFJ12共計(jì)4株，且均為芽孢桿菌，對(duì)根結(jié)線蟲的校正致死率分別達(dá)81.12%、84.28%、85.91%、82.36%，其發(fā)酵液隨著稀釋倍數(shù)的增加對(duì)線蟲滅殺活性逐漸下降，稀釋至320倍后滅殺活性完全喪失。同時(shí)，這4株生防功能菌發(fā)酵液對(duì)根結(jié)線蟲的校正致死率隨著處理時(shí)間的延長(zhǎng)而升高，與譚可菲等的研究結(jié)果[21]一致，均在2 h以后效果最優(yōu)，對(duì)煙草根結(jié)線蟲的校正致死率分別為79.94%、81.69%、81.59%、78.94%。將4株生防功能菌株直接用于發(fā)生煙草根結(jié)線蟲病煙株，其防效分別為44.32%、38.46%、46.84%、42.53%，與發(fā)酵液實(shí)驗(yàn)室滅殺活性試驗(yàn)結(jié)果未呈現(xiàn)出一致性，推測(cè)是因?yàn)樵谕寥乐形⑸锃h(huán)境較為復(fù)雜，各生防菌株生存能力及代謝物分泌的能力受到一定影響，但整體而言，4株生防功能菌對(duì)煙草根結(jié)線蟲均具有一定的抑殺作用，在溫室盆栽試驗(yàn)中也表現(xiàn)出了一定防效。

將以上4株生防功能菌與另2株生防菌以及腐熟完全的萬(wàn)壽菊秸稈有機(jī)肥按一定添加比例復(fù)配，在正常包裝堆放后，有機(jī)肥本身并不會(huì)出現(xiàn)再次升溫發(fā)酵的情況，同時(shí)，萬(wàn)壽菊生防功能有機(jī)肥中功能菌有效活菌數(shù)達(dá)到生物有機(jī)肥標(biāo)準(zhǔn)且高于標(biāo)準(zhǔn)，證明該方案可行。

然后本研究采用田間小區(qū)試驗(yàn)的方式，客觀評(píng)價(jià)以萬(wàn)壽菊秸稈為原料開發(fā)的生防功能有機(jī)肥在曲靖煙區(qū)的應(yīng)用效果。結(jié)果表明：不同處理間煙株的生育期表現(xiàn)一致，推測(cè)可能是由于試驗(yàn)區(qū)域在煙株移栽后至團(tuán)棵期間未有降雨，導(dǎo)致煙株前期的生育期增長(zhǎng);生防功能有機(jī)肥9號(hào)在前期能夠促進(jìn)煙株的早生快發(fā)，在后期能夠促進(jìn)葉片開片，改善烤煙農(nóng)藝性狀，同時(shí)能夠提高烤煙對(duì)根結(jié)線蟲和青枯病的抗病性，減少病害的發(fā)生。

總而言之，在豐富的微生物資源中，可篩選出對(duì)煙草根結(jié)線蟲具有滅殺功能的菌株，并且可與腐熟的萬(wàn)壽菊秸稈復(fù)配形成穩(wěn)定且具有生防功能的有機(jī)肥。但在田間試驗(yàn)中，由于氣候原因及試驗(yàn)地選取不當(dāng)而造成田間小區(qū)試驗(yàn)效果不理想。針對(duì)此情況，本研究團(tuán)隊(duì)將重新選取多個(gè)試驗(yàn)地塊繼續(xù)進(jìn)行生防功能有機(jī)肥的田間效果驗(yàn)證，為生防功能有機(jī)肥在煙草根結(jié)線蟲防控方面提供理論基礎(chǔ)及技術(shù)支撐。

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