林授 江偉梅 詹友知 林洪鏗

自人類免疫缺陷病毒（human immunodeficiency virus，HIV）被證實(shí)可通過(guò)輸血傳播以來(lái)，血液安全問(wèn)題已成為醫(yī)療界，乃至全社會(huì)的關(guān)注熱點(diǎn)之一。如何最大程度上降低HIV經(jīng)輸血傳播，保障血液安全，是采供血人員工作的重中之重，全球都將HIV作為血液檢測(cè)的強(qiáng)制性篩查項(xiàng)目之一。獻(xiàn)血人群中的HIV感染者可分為新近感染和既往感染，新近感染的獻(xiàn)血者是造成HIV經(jīng)輸血傳播的最大隱患[1，2]，但國(guó)內(nèi)輸血行業(yè)對(duì)此關(guān)注較少，尚未見此類研究報(bào)道。新近感染指血清陽(yáng)轉(zhuǎn)后，可檢測(cè)到HIV抗體產(chǎn)生，但感染時(shí)間較短。相較于新近感染，既往感染時(shí)間相對(duì)較長(zhǎng)，二者的血清抗體反應(yīng)在抗體滴度、所占比例、特異性及親和力等方面不同，可通過(guò)Vironostika-LSEIA法、親和力測(cè)定試驗(yàn)、BED-CEIA等試驗(yàn)進(jìn)行鑒別。本文通過(guò)對(duì)CDC（疾病預(yù)防控制中心）確證的HIV抗體陽(yáng)性獻(xiàn)血者標(biāo)本進(jìn)行限制性抗原親和力酶聯(lián)免疫法（LAg-Avidity EIA）與BED捕獲酶聯(lián)免疫法（BEDCEIA）檢測(cè)，區(qū)分HIV-1新近感染與既往感染，再對(duì)判定為新近感染的獻(xiàn)血者特征進(jìn)行分析，現(xiàn)報(bào)道如下。

材料與方法

1 標(biāo)本 2011年～2018年來(lái)自福州地區(qū)的自愿無(wú)償獻(xiàn)血者，經(jīng)獻(xiàn)血前征詢體檢符合《獻(xiàn)血者健康檢查要求》[3]，并經(jīng)ALT、HBsAg和梅毒抗體金標(biāo)法初篩檢測(cè)合格。在采集全血或成分血液同時(shí)留取血液檢測(cè)標(biāo)本，所有標(biāo)本采用EDTA-K2抗凝，HIV項(xiàng)目血清學(xué)抗體或核酸反應(yīng)性的標(biāo)本均置于-80℃凍存，在進(jìn)行新近感染檢測(cè)之前將樣本置于4℃復(fù)融，待室溫平衡后再檢測(cè)，檢測(cè)后剩余樣本放回-80℃凍存。

2 試劑與儀器 ELISA檢測(cè)試劑為法國(guó)BIO-RAD公司HIV抗原抗體檢測(cè)試劑和北京萬(wàn)泰生物藥業(yè)有限公司HIV抗原抗體檢測(cè)試劑；核酸檢測(cè)試劑為Grifols公司的Procleix Ultrio和Procleix Ultrio Plus HBV/HCV/HIV-1核酸聯(lián)合檢測(cè)試劑盒（TMA-化學(xué)發(fā)光法）及其鑒別試劑；CDC確證試劑為新加坡MP生物醫(yī)學(xué)亞太有限公司生產(chǎn)的HIV1+2型抗體免疫印跡（WB）試劑；新近感染檢測(cè)試劑為采用美國(guó)SEDIA公司的HIV-1 LAg-Avidity EIA檢測(cè)試劑盒（批號(hào)：KM0601）、MAXIM公司的HIV-1 LAg-Avidity EIA檢測(cè)試劑盒（批號(hào)：J7795A）和美國(guó)SEDIA公司的BED HIV-1 Incidence CEIA檢測(cè)試劑盒（批號(hào)：HD1301）。使用主要檢測(cè)設(shè)備有TIGRIS全自動(dòng)核酸檢測(cè)系統(tǒng)（美國(guó)Gene-Probe公司）、FAME全自動(dòng)酶免分析儀及STAR全自動(dòng)加樣儀（均為瑞士HAMILTON公司產(chǎn)品）、奧地利Anthos 2010型酶標(biāo)儀和新加坡MP Biomedicals公司的全自動(dòng)蛋白印跡儀等。所有試劑均在有效期內(nèi)使用，儀器設(shè)備按廠家規(guī)定進(jìn)行定期維護(hù)、校準(zhǔn)。

3 方法

3.1 篩查確證：按照《血站技術(shù)操作規(guī)程》[4]和《全國(guó)艾滋病檢測(cè)技術(shù)規(guī)范》[5]要求，獻(xiàn)血者血液標(biāo)本采用2種ELISA試劑和1種核酸試劑（NAT）分別進(jìn)行HIV抗原/抗體和核酸檢測(cè)，任何檢測(cè)結(jié)果為反應(yīng)性的標(biāo)本送CDC進(jìn)行HIV抗體確證檢測(cè)。CDC采用WB方法對(duì)血液篩查HIV項(xiàng)目為反應(yīng)性的標(biāo)本進(jìn)行HIV抗體確證檢測(cè)，對(duì)確證為不確定的獻(xiàn)血者進(jìn)行跟蹤采樣檢測(cè)。

3.2 新近感染檢測(cè)：分別采用MAXIM和SEDIA 2種LAg-Avidity EIA法HIV-1新近感染檢測(cè)試劑對(duì)所有確證陽(yáng)性的標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)，對(duì)2種試劑檢測(cè)結(jié)果不一致的標(biāo)本采用BED試劑進(jìn)行復(fù)核。

3.3 結(jié)果判定：標(biāo)本檢測(cè)OD值與校準(zhǔn)品OD值的比值為樣本的ODn值，初篩時(shí)采用單孔重復(fù)，當(dāng)樣本的ODn值＞2.0時(shí)，直接判定為既往感染；當(dāng)ODn值≤2.0時(shí)，進(jìn)行3孔重復(fù)確證檢測(cè)。試驗(yàn)過(guò)程設(shè)置2孔陰性對(duì)照、3孔校準(zhǔn)品、3孔弱陽(yáng)性對(duì)照和3孔強(qiáng)陽(yáng)性對(duì)照，只有所有對(duì)照品和校準(zhǔn)品滿足試劑盒要求的范圍時(shí)檢測(cè)結(jié)果有效，否則重新進(jìn)行檢測(cè)。當(dāng)ODn值＞1.5時(shí)，判定為既往感染，ODn值≤1.5時(shí)判定為新近感染。3種試劑中只有當(dāng)2種試劑檢測(cè)均判為新近感染時(shí)，結(jié)果判定為新近感染，代表血清轉(zhuǎn)陽(yáng)期小于180天，其他情況均判定為既往感染。

結(jié) 果

1 2011年～2018年間共收集HIV抗體確證陽(yáng)性的標(biāo)本109份，經(jīng)SEDIA與MAXIM HIV-1 LAg-Avidity新近感染檢測(cè)試劑判定均為新近感染的標(biāo)本共39份。另有9份標(biāo)本單一試劑結(jié)果判定為新近感染，結(jié)果不一致的9份標(biāo)本再用BED法檢測(cè)，有4份判定為新近感染。最終判定為新近感染的標(biāo)本共43份，占39.45%，具體檢測(cè)情況見表1和表2。

表1 SEDIA與MAXIM 2種LAg試劑HIV-1新近感染檢測(cè)情況

表2 SEDIA與MAXIM檢測(cè)不一致標(biāo)本BED檢測(cè)情況

2 經(jīng)3種試劑檢測(cè)43例標(biāo)本判定為新近感染，判為新近感染的獻(xiàn)血者性別、年齡、文化程度、獻(xiàn)血次數(shù)及職業(yè)分布見表3。

討 論

雖然2011年～2018年福州地區(qū)無(wú)償獻(xiàn)血人群中HIV確證陽(yáng)性率在2013年達(dá)到最高峰（0.03%）后呈現(xiàn)下降趨勢(shì)，但每年確證陽(yáng)性率還維持在0.02%左右，略高于全國(guó)無(wú)償獻(xiàn)血人群HIV平均陽(yáng)性率0.018%[6]，與華東地區(qū)其他省市[7-9]相比，也處于中高位水平。HIV的輸血傳播幾乎都是來(lái)自新近感染獻(xiàn)血者血液的“窗口期”感染，在本研究中收集的109例HIV感染的無(wú)償獻(xiàn)血者標(biāo)本中，新近感染者為43例，占比高達(dá)39.45%?？梢姳镜貐^(qū)臨床用血安全仍面臨嚴(yán)重威脅，遏制HIV經(jīng)輸血傳播仍然是我們血站工作者乃至全社會(huì)面臨的重要課題。目前核酸檢測(cè)方法雖可將HIV檢測(cè)的窗口期縮短至11天，但處于窗口期的獻(xiàn)血者捐獻(xiàn)的血液仍無(wú)法檢出，存在傳播疾病的風(fēng)險(xiǎn)。安全獻(xiàn)血是減少“窗口期”疾病傳播的關(guān)鍵。因此，血站應(yīng)加強(qiáng)安全獻(xiàn)血教育宣傳，讓存在高危行為的獻(xiàn)血者自覺避免獻(xiàn)血。

表3 2011年～2018年HIV-1新近感染獻(xiàn)血者基本情況

做好HIV新近感染獻(xiàn)血者防控的前提是區(qū)分新近感染和既往感染者，在CDC系統(tǒng)針對(duì)特定人群此項(xiàng)工作已開展得較為成熟，但在我國(guó)血站系統(tǒng)幾乎還未開展HIV新近感染的監(jiān)測(cè)。目前，HIV-1新近感染可通過(guò)多種實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)進(jìn)行，隨著檢測(cè)技術(shù)日趨成熟國(guó)內(nèi)外已有較多應(yīng)用報(bào)道，較為常用的方法有BED捕獲酶聯(lián)免疫法（BED-CEIA）和限制性抗原親和力酶聯(lián)免疫法（LAg-Avidity EIA）[10]，后者因評(píng)估結(jié)果更為準(zhǔn)確逐步得到廣泛應(yīng)用[11]。本研究使用2種LAg-Avidity EIA試劑對(duì)經(jīng)CDC確證為抗體陽(yáng)性的獻(xiàn)血者進(jìn)行HIV-1新近感染檢測(cè)，再對(duì)2種試劑檢測(cè)不一致的標(biāo)本采用BED法進(jìn)行復(fù)核，最終判定43例HIV-1新近感染獻(xiàn)血者。本研究所收集的標(biāo)本全部來(lái)自自覺健康的無(wú)癥狀獻(xiàn)血者，標(biāo)本均送省CDC進(jìn)行HIV確證試驗(yàn)，若遇為既往確認(rèn)陽(yáng)性的的獻(xiàn)血者CDC會(huì)予以告知，而CD4+T淋巴細(xì)胞＜200個(gè)/μL的人員已處于發(fā)病期狀態(tài)，故本研究涉及的試驗(yàn)背景為已排除了既往確認(rèn)陽(yáng)性及CD4+T淋巴細(xì)胞＜200 個(gè)/μL的情況。

從本地區(qū)新近感染獻(xiàn)血者特征分析顯示，男性占95.35%，年齡在18～30歲間占69.76%，受教育文化程度高中以上占62.79%，高校學(xué)生占25.58%，職員占27.91%，可見本地區(qū)無(wú)償獻(xiàn)血者HIV新近感染者中，以文化程度高的年輕男性為主，這是非常值得我們關(guān)注的防控點(diǎn)。在福州地區(qū)受人們生活方式轉(zhuǎn)變、城市改造和地鐵修建等各種客觀因素的影響，近年來(lái)街頭無(wú)償獻(xiàn)血量明顯下降，高校大學(xué)生越來(lái)越成為保障血液供應(yīng)不可或缺的一部分，高校男生則是這支獻(xiàn)血隊(duì)伍的主力軍與中堅(jiān)力量。男性大學(xué)生正處于性活躍期，對(duì)新鮮事物充滿好奇，又尚未受到婚姻家庭等責(zé)任約束，性觀念開放，對(duì)男男性行為接受度較高，加上自我防護(hù)意識(shí)差，特別容易受到HIV感染，近年來(lái)其他地區(qū)也陸續(xù)報(bào)道無(wú)償獻(xiàn)血者HIV感染的趨勢(shì)正由一般人群向高校青年男男性行為者轉(zhuǎn)變[12-14]。在這類人群中他們發(fā)生高危行為后往往不愿意去醫(yī)療機(jī)構(gòu)或CDC等相關(guān)機(jī)構(gòu)檢測(cè)，而將參加獻(xiàn)血作為檢測(cè)的方式，忽視該行為可能導(dǎo)致因窗口期漏檢發(fā)生HIV的輸血傳播嚴(yán)重后果，這給血液安全埋下一個(gè)極大隱患。為降低經(jīng)輸血傳播HIV殘余風(fēng)險(xiǎn)，我國(guó)采供血機(jī)構(gòu)已在血清學(xué)檢測(cè)基礎(chǔ)上全面增加HIV核酸檢測(cè)，在最大程度上縮短HIV檢測(cè)窗口期，但由于病毒檢測(cè)窗口期的客觀存在，單憑檢測(cè)完全阻斷HIV經(jīng)輸血傳播，是不切合實(shí)際也是無(wú)法做到的。針對(duì)這些特定人群，我們采供血機(jī)構(gòu)工作人員在引導(dǎo)高校學(xué)生積極參與無(wú)償獻(xiàn)血的同時(shí)，應(yīng)加大開展高校艾滋病防控知識(shí)宣教工作的力度，建立低危的固定獻(xiàn)血者隊(duì)伍，在現(xiàn)場(chǎng)進(jìn)行血液采集時(shí)工作人員應(yīng)加強(qiáng)與獻(xiàn)血者的溝通交流，仔細(xì)觀察并判斷其是否存在高危行為跡象和潛在的獻(xiàn)血隱患，告知利用獻(xiàn)血檢測(cè)HIV或惡意報(bào)復(fù)獻(xiàn)血須承擔(dān)的法律責(zé)任，勸說(shuō)高危人員放棄獻(xiàn)血，淘汰不宜獻(xiàn)血者，從源頭上徹底阻斷HIV經(jīng)輸血傳播，保障臨床血液安全。

利益沖突所有作者均聲明不存在利益沖突