莊澤龍 李厚標(biāo) 鄭梅珍 林婷婷 吳奕煌 蔡宗敏 洪加全 蔡建明 江潔芳

本文主要探索陳年鐵觀音茶葉中的茶多糖及茶多酚含量隨年份變化趨勢。茶多糖以醇析法[1]獲得，并用硫酸-苯酚法[2]測定茶多糖含量。茶多酚采用國家標(biāo)準(zhǔn)GB/T 8313-2018 《茶葉中茶多酚和兒茶素類含量的檢測方法》進(jìn)行測試。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，隨著年份的增加茶葉中的茶多糖含量呈增加趨勢，茶多酚的含量基本不變。

鐵觀音茶屬于烏龍茶中的一種，是半發(fā)酵茶，產(chǎn)自福建安溪縣，是中國十大名茶之一。鐵觀音茶葉經(jīng)烘焙、冷卻、密封后儲(chǔ)于特制倉窖中促其后熟而成。陳年鐵觀音可分五年、十年、十五年、十八年、二十八年等幾個(gè)檔次。以十年至二十八年者最佳。干茶色澤枯暗，湯色深黃、褐色或紅褐色，味道溫和，沖泡后微甜回甘。茶葉不僅具有提神解渴的功效，而且富含具有保健功能的茶多酚[3]（Tea-polgphenols，TP），茶多酚是茶葉中兒茶素類、黃酮類和花色素類化合物的總稱，其中以黃烷醇類物質(zhì)（兒茶素）最為重要。茶多酚是形成茶葉色香味的主要成分之一，也是茶葉中有保健功能的主要成分之一[4]。茶多糖作為一種極具開發(fā)潛力的天然活性物質(zhì)，其功能性研究一直是研究者關(guān)注的重點(diǎn)。大量茶多糖功能性研究實(shí)驗(yàn)證實(shí)，茶多糖具有以下多種生物活性：（1）降血糖[5];（2）降血脂;（3）調(diào)節(jié)免疫;（4）抗凝血，抗血栓;（5）抗氧化等。針對(duì)陳香型鐵觀音在貯存過程中緩慢發(fā)酵和氧化后形成獨(dú)特產(chǎn)品后可能發(fā)生的成分變化進(jìn)行檢測。本文研究采用國家標(biāo)準(zhǔn)GB/T 8313-2018 《茶葉中茶多酚和兒茶素類含量的檢測方法》進(jìn)行茶多酚含量的測試[5]，采用醇析法提取茶葉中茶多糖，并用硫酸-苯酚法測定茶多糖含量。研究結(jié)果為陳香型鐵觀音的產(chǎn)品品質(zhì)提供客觀、科學(xué)的依據(jù)。

材料與方法

實(shí)驗(yàn)材料

不同年份的陳年鐵觀音茶葉（貯存年份分別為：8年、13年、15年、20年、25年），該茶葉由福建安溪鐵觀音集團(tuán)股份有限公司贊助提供。

試劑

乙醇：品牌：西隴化工，規(guī)格：500mL/瓶，等級(jí)：AR;

乙醚：品牌：西隴化工，規(guī)格：500mL/瓶，等級(jí)：AR;

苯酚：品牌：西隴化工，規(guī)格：500mL/瓶，等級(jí)：AR;

硫酸：品牌：西隴化工，規(guī)格：500mL/瓶，等級(jí)：AR;

葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品：品牌：曼哈格，規(guī)格：0.5g/瓶，純度：99.2%;

甲醇：品牌：西隴化工，規(guī)格：500mL/瓶，等級(jí)：HPLC;

碳酸鈉：品牌：西隴化工，規(guī)格：500g/瓶，等級(jí)：AR;

福林酚：濃度：1mol/L;

沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液1000ug/mL;

沒食子酸工作液：10ug/mL、20ug/mL、30ug/mL、40ug/mL、50ug/mL。

實(shí)驗(yàn)儀器

電子天平：品牌：賽多利斯，性能指標(biāo)：Max：220g? ?d=0.1mg;

電熱恒溫水浴鍋：品牌：金壇市文華儀器，型號(hào)：HH-88，性能指標(biāo)：RT-100℃;

紫外分光光度計(jì)：品牌：島津，型號(hào)：UV-2600，性能指標(biāo)：200-860nm，±0.003Abs，狹縫0.2nm，掃描間隔：0.01nm

電熱鼓風(fēng)干燥箱：品牌：上海一恒科學(xué)儀器，型號(hào)：DHG-9245A，性能指標(biāo)：RT-100℃

離心機(jī)：轉(zhuǎn)速3500r/min

實(shí)驗(yàn)方法-茶多糖

醇沉法提取茶多糖[6]

取不同年份的陳年鐵觀音茶葉各約50g，使用粉碎機(jī)粉碎，碎茶應(yīng)可以通過30目篩。用電子天平稱取約10.0g粉碎茶樣，轉(zhuǎn)移至200mL燒杯中，加入100mL蒸餾水，置于80℃的電熱恒溫水浴鍋中水浴3h。后用抽濾裝置將樣液進(jìn)行抽濾，濾液收集至500mL燒杯中。濾渣加入100mL蒸餾水搖勻后重復(fù)80℃水浴3h，重復(fù)以上步驟總共3次，并收集濾液。將濾液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮成50mL左右。待濃縮液冷卻至室溫后加入150mL無水乙醇混勻，放置于暗處24小時(shí)沉淀后抽濾。濾渣收集并使用電熱鼓風(fēng)干燥箱烘干。濾渣可稱重用于計(jì)算茶多糖提取率。

茶多糖待測液準(zhǔn)備

稱量烘干后的各年份陳年鐵觀音茶多糖約0.010g于10mL燒杯，加入1mol/L濃度的硫酸2mL，放置于90℃恒溫水浴2h，冷卻至室溫。用蒸餾水多次洗滌燒杯并轉(zhuǎn)移至100mL容量瓶待測。

標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制

準(zhǔn)確稱取葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品0.0200g至10mL燒杯，用蒸餾水溶解并轉(zhuǎn)移至100mL容量瓶中定容，混勻成標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖溶液。用苯酚-硫酸法，取標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖溶液2/4/6/8/10mL，分別加入50mL的容量瓶中，用蒸餾水定容至刻度線，混勻成5個(gè)曲線點(diǎn)溶液。分別取1mL5個(gè)曲線點(diǎn)溶液分別加入1.5mL的5%苯酚溶液和7.5mL濃硫酸，混勻靜置0.5h。后用紫外分光光度計(jì)于485nm處測定各點(diǎn)吸光度。

以糖質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

陳年鐵觀音茶多糖測定

取1mL茶多糖待測液按照上段文字中步驟獲得待測液吸光度。在曲線上查得茶多糖含量。

實(shí)驗(yàn)方法-茶多酚

干物質(zhì)含量的測定

準(zhǔn)確稱取醇沉法提取茶多糖所得混合磨勻的茶葉2.0克于恒重好的稱量瓶內(nèi)，至于103℃干燥箱中，瓶蓋斜支于瓶邊，干燥4h后蓋好取出，放入干燥器內(nèi)冷卻0.5h后稱量，然后再放入103℃干燥1h左右，蓋好取出放入干燥箱冷卻后再稱重，重復(fù)以上操作至恒重。按下式計(jì)算干物質(zhì)含量。

供試液的制備

母液制備：準(zhǔn)確稱取醇沉法提取茶多糖所得粉碎好的茶樣0.2000g于10ml離心管中，加入在70℃中預(yù)熱過70%甲醇水溶液5mL，攪勻，置于70℃水浴中，浸提10min（隔5分鐘攪拌一次），冷卻至室溫，在轉(zhuǎn)速3500r/min離心機(jī)離心10min，后將上清液轉(zhuǎn)移至10mL容量瓶，剩余殘?jiān)谟?mL的70%甲醇水溶液提取一次，重復(fù)以上操作，合并提取液定容至10mL。搖勻，用0.45um水膜過濾待用。

測試液：移取母液1.0mL于100ml容量瓶中，用水定容至刻度，搖勻，待測。

測定

用移液管分別移取沒食子酸工作液、水（作空白對(duì)照）及測試液各1.0mL于刻度試管內(nèi)，在每個(gè)試管內(nèi)分別加入5.0mL福林酚試劑，搖勻，反應(yīng)3min-8min，加入4.0mL7.5%碳酸鈉溶液，加水定容至刻度、搖勻。室溫下放置60min，用10mm比色皿、在765nm波長下用分光光度計(jì)測定吸光度（A、A0）

根據(jù)沒食子酸工作液的吸光度A與各工作液的沒食子酸濃度，制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。

結(jié)果計(jì)算

結(jié)果匯總（表1、表2、圖1）

結(jié)果與分析

從以上數(shù)據(jù)可以看出，隨著鐵觀音茶葉年份增加，茶葉中茶多糖含量呈增加趨勢;不同年份鐵觀音茶葉中茶多酚的含量變化不大，含量比較穩(wěn)定。茶多糖是茶葉中具有多種生物活性的復(fù)合多糖，因原料、發(fā)酵方式和發(fā)酵程度的不同，茶多糖的單糖組成、分子量以及高級(jí)結(jié)構(gòu)也發(fā)生了不同程度的變化，因此發(fā)酵茶多糖呈現(xiàn)出了特定的生物活性。陳香型鐵觀音在發(fā)酵制備過程中，隨著年份的增加，鐵觀音茶葉自身酶系統(tǒng)進(jìn)行酶氧化發(fā)酵作用會(huì)促使茶多糖的結(jié)構(gòu)發(fā)生轉(zhuǎn)化，茶多糖的含量會(huì)逐漸增加。

隨著鐵觀音茶葉年份增加，茶葉中茶多糖含量呈增加趨勢，茶多酚含量基本不變。因此對(duì)于陳香型鐵觀音而言，鐵觀音茶多糖含量隨著年份的增加而增加，因此更具有潛在生物活性價(jià)值。在我國，飲茶已經(jīng)擁有5000 多年的歷史，而陳香型鐵觀音在茶葉中占有舉足輕重的地位，且擁有廣大的消費(fèi)群體。陳香型鐵觀音具有茶多糖和茶多酚等多種生理功能的成分，對(duì)人體健康具有重要作用。因此進(jìn)一步研究陳香型鐵觀音精深加工及茶多糖分子量、結(jié)構(gòu)及含量的變化機(jī)理，從而顯著提高陳香型鐵觀音的附加值，具有重要的意義。

參考文獻(xiàn)

[1] 秦建鮮，莫璐，黃鎖義，等.廣西壯藥雞骨草多糖含量測定[J].微量元素與健康研究，2016，33（2）：44-47.

[2] 鄭旭偉，黃占波，楚冬海，等.苯酚硫酸法與蒽酮硫酸法測定托盤根多糖含量的比較[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2016，44（23）.

[3] 一文.茶多酚生產(chǎn)應(yīng)用與開發(fā)前景[J] .開發(fā)指南，2003.（11）：21-23

[4] 王黎明，夏文水.茶多糖降血糖機(jī)制的體外研究[J].食品與生物技術(shù)學(xué)報(bào)，2010，（3）：354-358.

[5]? GB/T 8313-2018 茶葉中茶多酚和兒茶素類含量的檢測方法

[6] 任健，楊志宏，劉鐘棟.醇沉法提取茶多糖的研究[J].山東食品發(fā)酵，2004，132 （1）：33-35.

項(xiàng)目名稱：國家茶葉質(zhì)量安全工程技術(shù)研究中心開放課題基金項(xiàng)目;項(xiàng)目編號(hào)：2018NTQS0201;

作者簡介：莊澤龍，本科，助理工程師，主要從事茶葉理化指標(biāo)檢測

通訊作者*： 江潔芳， 碩士，食品生物技術(shù)工程師，主要從事食品安全與檢測

1.福建省國鼎檢測技術(shù)有限公司

2.國家茶葉質(zhì)量安全工程技術(shù)研究中心

3.福建安溪鐵觀音集團(tuán)

4. 廣東省中鼎檢測技術(shù)有限公司