黃曉東，顧 穎，張 健，周慧華，蓋春蕾，陳百堯，曹海鵬,，安 健

（1上海海洋大學(xué)/國(guó)家水生動(dòng)物病原庫(kù)，上海201306；2上海海洋大學(xué)/上海水產(chǎn)養(yǎng)殖工程技術(shù)研究中心，上海201306；3山東省海洋生物研究院，山東青島266104；4連云港市海洋與漁業(yè)發(fā)展促進(jìn)中心，江蘇連云港222000）

0 引言

中華絨螯蟹(Eriocheir sinensis)，俗稱河蟹，原產(chǎn)于東亞，自然分布于中國(guó)東部太平洋沿岸至朝鮮半島，現(xiàn)已成為中國(guó)重要的水產(chǎn)特色養(yǎng)殖品種之一[1]。2019年，中國(guó)河蟹養(yǎng)殖產(chǎn)量約75萬t，產(chǎn)值超500億元，已經(jīng)成為漁業(yè)經(jīng)濟(jì)中重要的支柱產(chǎn)業(yè)[2]。然而，由于中華絨螯蟹養(yǎng)殖規(guī)模的不斷增大，水質(zhì)惡化、病害頻發(fā)等問題常給養(yǎng)殖造成較大的經(jīng)濟(jì)損失[3]。中草藥和微生物制劑以其“安全、綠色、無殘留”的優(yōu)點(diǎn)，對(duì)提高水產(chǎn)動(dòng)物機(jī)體的免疫機(jī)能、抗病能力以及促生長(zhǎng)都有良好的協(xié)同作用[4]，在水產(chǎn)養(yǎng)殖中展示了廣闊的發(fā)展前景和良好的經(jīng)濟(jì)效益[5]。湯保貴等[6]研究發(fā)現(xiàn)微生物和中草藥聯(lián)合制劑能顯著促進(jìn)羅非魚幼魚生長(zhǎng)，提高飼料利用率，同時(shí)具有較明顯的降亞硝酸鹽作用。王繼芬等[7]研究指出微生物制劑與中草藥處理的凡納濱對(duì)蝦親蝦日死亡率由0.2%下降到0.01%，產(chǎn)卵量提高了10%，幼體孵化率提高了11%，育苗成功率達(dá)到80%。于明超等[8]試驗(yàn)結(jié)果表明飼料中同時(shí)添加中草藥和芽孢桿菌可顯著提高凡納濱對(duì)蝦的增重率和特定增長(zhǎng)率，大大降低腸道異養(yǎng)菌和弧菌的數(shù)量。然而，中草藥和微生物制劑聯(lián)用對(duì)中華絨螯蟹養(yǎng)殖的應(yīng)用效果卻極少報(bào)道。鑒此，本研究開展了復(fù)方中草藥與微生物殺菌劑聯(lián)用在中華絨螯蟹養(yǎng)殖中的大田應(yīng)用效果試驗(yàn)，以期為中華絨螯蟹養(yǎng)殖業(yè)的綠色高質(zhì)量發(fā)展提供健康養(yǎng)殖技術(shù)支撐。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

復(fù)方中草藥，由黃連、蘇木、大黃、烏梅按2:1:2:1比例，置于60℃干燥培養(yǎng)箱中烘干后，參照王印庚等[9]的方法由連云港市海洋與漁業(yè)發(fā)展促進(jìn)中心制備；微生物殺菌劑，主要成分為蛭弧菌、解淀粉芽孢桿菌，有效菌含量為2.0×1010CFU/g，由上海海洋大學(xué)研制[10]；中華絨螯蟹苗種，平均體重2.3 g，購(gòu)自安徽銅陵某中華絨螯蟹育苗場(chǎng)；養(yǎng)殖用水，來源于連云港市安峰鎮(zhèn)水庫(kù)，水質(zhì)指標(biāo)為：pH 8.5，水色為褐色，透明度在30～40 cm之間，氨氮為0.23 mg/L，亞硝酸鹽為0.01 mg/L，溶解氧為6 mg/L；養(yǎng)殖池6個(gè)，規(guī)格大小相同，池底平坦，2.87 hm2/池，平均水深1.7 m，由江蘇連云港市大茂水產(chǎn)養(yǎng)殖合作社提供；中華絨螯蟹顆粒飼料，購(gòu)于南通正大飼料有限公司；漂白粉，有效氯含量33%，購(gòu)于南通市高陽漂白粉有限公司；氨氮、亞硝酸鹽、溶解氧等檢測(cè)試劑盒，購(gòu)于杭州陸恒生物科技有限公司。

1.2 試驗(yàn)方法

試驗(yàn)設(shè)1個(gè)對(duì)照組和1個(gè)試驗(yàn)組，每組包括3個(gè)養(yǎng)殖池，每個(gè)養(yǎng)殖池苗種投放密度為1.8萬只/hm2。試驗(yàn)組將復(fù)方中草藥按10 g/kg飼料的劑量與中華絨螯蟹顆粒飼料攪拌均勻自然晾干后投喂中華絨螯蟹，每天于6:00、17:00各拌飼投喂1次，飼料投喂量為86 kg，同時(shí)配合全池潑灑微生物殺菌劑，微生物殺菌劑每10天使用1次，用量為3.75 kg/hm2。對(duì)照組正常投喂中華絨螯蟹顆粒飼料，每天于6:00、17:00各拌飼投喂1次，飼料投喂量為86 kg，每15天用漂白粉消毒1次，用量為7.5 kg/hm2。試驗(yàn)于2019年5—9月份進(jìn)行，試驗(yàn)周期為130天。試驗(yàn)過程中每10天參照張維娜等[11]的方法采取水樣，采用試劑盒法[12]測(cè)定氨氮、亞硝酸鹽、溶解氧等水質(zhì)指標(biāo)，統(tǒng)計(jì)每個(gè)池中中華絨螯蟹的死亡數(shù)量。試驗(yàn)結(jié)束后分別統(tǒng)計(jì)每個(gè)養(yǎng)殖池的產(chǎn)量和產(chǎn)值，計(jì)算公頃產(chǎn)量(kg/hm2)和產(chǎn)值（元/hm2）。

1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)以平均值±偏差表示，采用SPSS 17.0軟件進(jìn)行單因素方差分析，Duncan’s檢驗(yàn)法進(jìn)行多重比較，P＜0.05為差異顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 復(fù)方中草藥與微生物殺菌劑聯(lián)用對(duì)中華絨螯蟹養(yǎng)殖水質(zhì)的影響

試驗(yàn)結(jié)果表明，復(fù)方中草藥與微生物殺菌劑聯(lián)用能夠顯著改善中華絨螯蟹的養(yǎng)殖水質(zhì)，降低養(yǎng)殖水體中的氨氮和亞硝酸鹽含量，提高養(yǎng)殖水體中的溶解氧含量。具體表現(xiàn)在：（1）在試驗(yàn)開始后40天及以后，試驗(yàn)池氨氮含量顯著低于對(duì)照池(P＜0.05)，氨氮最高含量為0.71 mg/L，較對(duì)照池最高氨氮含量(0.85 mg/L)減少了16.47%(P＜0.05)（圖1）；（2）在試驗(yàn)開始后60天及以后，試驗(yàn)池亞硝酸鹽含量顯著低于對(duì)照池(P＜0.05)，亞硝酸鹽最高含量為0.03 mg/L，較對(duì)照池亞硝酸鹽最高含量(0.07 mg/L)減少了57.14%(P＜0.05)（圖2）；（3）在試驗(yàn)開始后30天及以后，試驗(yàn)池溶解氧含量顯著高于對(duì)照池(P＜0.05)，溶解氧最低含量為4.70 mg/L，較對(duì)照池溶解氧最低含量(3.43 mg/L)增加了37.03%(P＜0.05)（圖3）。

圖1 復(fù)方中草藥與微生物殺菌劑聯(lián)用對(duì)中華絨螯蟹養(yǎng)殖水體中氨氮含量的影響

圖2 復(fù)方中草藥與微生物殺菌劑聯(lián)用對(duì)中華絨螯蟹養(yǎng)殖水體中亞硝酸鹽含量的影響

圖3 復(fù)方中草藥與微生物殺菌劑聯(lián)用對(duì)中華絨螯蟹養(yǎng)殖水體中溶解氧含量的影響

2.2 復(fù)方中草藥與微生物殺菌劑聯(lián)用對(duì)中華絨螯蟹死亡數(shù)量的影響

試驗(yàn)結(jié)果表明，復(fù)方中草藥與微生物殺菌劑聯(lián)用能夠顯著減少中華絨螯蟹死亡數(shù)量。具體表現(xiàn)在：在試驗(yàn)開始后的 10、20、30、40、50、60、70、80、90、100、110、120天和130天，試驗(yàn)池中華絨螯蟹的累積死亡數(shù)量分別較對(duì)照池中華絨螯蟹的累積死亡數(shù)量減少了100%(P＜0.05)、84.6%(P＜0.05)、93.3%(P＜0.05)、83.3%(P＜0.05)、87.2%(P＜0.05)、89.4%(P＜0.05)、92.2%(P＜0.05)、87.5%(P＜0.05)、87.9%(P＜0.05)、86.4%(P＜0.05)、90.5%(P＜0.05)、91.3%(P＜0.05)、91.3%(P＜0.05)（圖4），由此說明復(fù)方中草藥與微生物殺菌劑聯(lián)用顯著提升了中華絨螯蟹的成活率。

圖4 復(fù)方中草藥與微生物殺菌劑聯(lián)用對(duì)中華絨螯蟹死亡數(shù)量的影響

2.3 復(fù)方中草藥與微生物殺菌劑聯(lián)用對(duì)中華絨螯蟹養(yǎng)殖效益的影響

試驗(yàn)結(jié)果（表1）表明，復(fù)方中草藥與微生物制劑聯(lián)用能夠顯著提高中華絨螯蟹的養(yǎng)殖效益。具體表現(xiàn)在：試驗(yàn)池中華絨螯蟹的產(chǎn)量、產(chǎn)值分別為3719.50 kg、316.35千元，較對(duì)照池提高了40.7%(P＜0.05)、61.9%(P＜0.05)；同時(shí)每公頃產(chǎn)量、每公頃產(chǎn)值也分別達(dá)到了1295.99 kg、110.23千元，較對(duì)照池增加了40.9%(P＜0.05)、61.9%(P＜0.05)。

表1 復(fù)方中草藥與微生物殺菌劑聯(lián)用對(duì)中華絨螯蟹養(yǎng)殖效益的影響

3 討論

3.1 復(fù)方中草藥與微生物殺菌劑聯(lián)用對(duì)養(yǎng)殖水質(zhì)的影響

氨氮、亞硝酸鹽、溶解氧是中華絨螯蟹養(yǎng)殖的關(guān)鍵水質(zhì)限制因子。黃鶴忠等[13]研究表明，1.0 mg/L氨氮處理中華絨螯蟹20天，中華絨螯蟹的非特異性免疫防御系統(tǒng)會(huì)受到損傷，同時(shí)機(jī)體清除自由基的能力下降，機(jī)體細(xì)胞和組織受到損傷甚至出現(xiàn)死亡。洪美玲等[14]研究發(fā)現(xiàn)，過量亞硝酸鹽進(jìn)入機(jī)體后會(huì)使機(jī)體攜氧能力、免疫能力降低，細(xì)胞膜通透性改變。王煜恒等[15]試驗(yàn)結(jié)果表明，水體中溶解氧的提高可降低非離子氨和亞硝酸鹽對(duì)中華絨螯蟹的毒性效應(yīng)。因此，降低養(yǎng)殖水體中氨氮和亞硝酸鹽含量，提高養(yǎng)殖水體中的溶解氧含量，對(duì)維持中華絨螯蟹的健康水平具有重要的意義。本試驗(yàn)結(jié)果表明，復(fù)方中草藥與微生物殺菌劑聯(lián)用能夠顯著降低養(yǎng)殖水體中氨氮和亞硝酸鹽含量，提高養(yǎng)殖水體中的溶解氧含量，預(yù)示著復(fù)方中草藥與微生物殺菌劑聯(lián)用可降低氨氮、亞硝酸鹽對(duì)中華絨螯蟹非特異性免疫系統(tǒng)的損傷，降低對(duì)中華絨螯蟹的毒性效應(yīng)。至于復(fù)方中草藥與微生物殺菌劑聯(lián)用改善養(yǎng)殖水質(zhì)的原因，可能因?yàn)槲⑸餁⒕鷦┲械挠幸婢鷮?duì)致病菌有裂解消除能力，能夠填補(bǔ)消除致病菌后留下的生態(tài)灶，維持了菌群平衡[16-18]，同時(shí)通過補(bǔ)充有益菌和其他活性因子，促進(jìn)微生物的固氮解磷、氣化、氨化、硝化和反硝化等作用，對(duì)水中殘存的餌料及動(dòng)植物殘骸等有機(jī)物迅速分解，形成CO2、硝酸鹽、硫酸鹽、磷酸鹽等，進(jìn)而被水中的藻類加以利用，使水體中的氨氮與亞硝酸鹽等濃度降低，溶解氧含量增加[19]。

3.2 復(fù)方中草藥與微生物殺菌劑聯(lián)用對(duì)中華絨螯蟹死亡數(shù)量和養(yǎng)殖效益的影響

據(jù)報(bào)道[20]，中草藥含有生物堿、多糖、鞣酸、蒽醌衍生物等多種活性物質(zhì)，對(duì)多種病原微生物可以起到抑殺效果，也可提高中華絨螯蟹的免疫機(jī)能。周永昌等[21]研究發(fā)現(xiàn)，在飼料中添加由甘草、絞股藍(lán)、銀杏葉和人參配伍的復(fù)方中草藥可提高中華絨螯蟹的生長(zhǎng)性能、抗氧化及免疫能力，當(dāng)復(fù)方中草藥添加量為1.0 g/kg時(shí)，蟹血清中的酸性磷酸酶活性以及肝胰腺中超氧化物歧化酶和堿性磷酸酶活性明顯提高，肝胰腺中丙二醛的含量顯著降低。孫學(xué)亮等[22]試驗(yàn)表明，在飼料中添加生芪、連翹能夠增強(qiáng)中華絨螯蟹血清中超氧化物歧化酶、過氧化氫酶活力，降低一氧化氮、丙二醛含量，提高機(jī)體的免疫活性。李思明等[23]試驗(yàn)指出，在飼料中添加蘆筍提取物、薄荷葉、山楂等復(fù)方中草藥可顯著降低中華絨螯蟹的死亡率，提高中華絨螯蟹的免疫能力。此外，潑灑微生物制劑也具有促進(jìn)中華絨螯蟹生長(zhǎng)、防治病害、提高存活率等作用。吳惠仙等[24]研究證實(shí)，潑灑芽孢菌劑在一定程度上防止水體酸化，有益于中華絨螯蟹幼體蛻皮，延緩幼體的發(fā)病死亡。江河等[25]試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，潑灑復(fù)合微生態(tài)制劑對(duì)池養(yǎng)中華絨螯蟹具有良好的防病作用，與對(duì)照池中華絨螯蟹相比，試驗(yàn)池中華絨螯蟹死亡數(shù)量低，攝食旺盛，生長(zhǎng)快，成活率提高了17.3%。本試驗(yàn)結(jié)果表明，復(fù)方中草藥與微生物殺菌劑聯(lián)用顯著減少了中華絨螯蟹的死亡數(shù)量。究其原因，可能是因?yàn)闈姙⑽⑸餁⒕鷦┮种屏损B(yǎng)殖水體中有害微生物繁殖，減少了有害微生物對(duì)中華絨螯蟹的感染，同時(shí)中草藥的添加也抑制腸道有害微生物的生長(zhǎng)，維持腸道微生物菌群的平衡[26]，提高中華絨螯蟹的營(yíng)養(yǎng)利用，增加中華絨螯蟹的抗感染免疫功能和抗病能力，從而提高了存活率和生長(zhǎng)速率，進(jìn)而增加了養(yǎng)殖產(chǎn)量。

3.3 復(fù)方中草藥與微生物殺菌劑聯(lián)用的意義

目前，消毒劑和抗生素的大量使用是影響中華絨螯蟹養(yǎng)殖質(zhì)量安全的重要因素，不僅破壞了養(yǎng)殖微生態(tài)平衡，而且殘留在中華絨螯蟹體內(nèi)的藥物，可能會(huì)誘導(dǎo)產(chǎn)生多種抗性基因，更進(jìn)一步會(huì)對(duì)生態(tài)系統(tǒng)及人類健康產(chǎn)生嚴(yán)重影響[26-28]。因此，利用中草藥制劑和微生物制劑替代化學(xué)消毒劑和抗生素，無疑是當(dāng)今中華絨螯蟹養(yǎng)殖綠色高質(zhì)量發(fā)展的新方向。本研究證實(shí)了復(fù)方中草藥與微生物殺菌劑聯(lián)用能夠顯著改善養(yǎng)殖水質(zhì)，提高中華絨螯蟹的成活率，增加中華絨螯蟹的養(yǎng)殖效益，充分展示了在中華絨螯蟹高效健康養(yǎng)殖應(yīng)用中的潛在價(jià)值，有利于推動(dòng)中華絨螯蟹養(yǎng)殖提質(zhì)增效、蟹農(nóng)增產(chǎn)增收。

4 結(jié)論

復(fù)方中草藥與微生物殺菌劑聯(lián)用對(duì)中華絨螯蟹養(yǎng)殖具有顯著的大田應(yīng)用效果。與中華絨螯蟹的常規(guī)養(yǎng)殖方式相比，復(fù)方中草藥與微生物殺菌劑聯(lián)用能夠顯著降低養(yǎng)殖水體中的氨氮和亞硝酸鹽含量，提高養(yǎng)殖水體中的溶解氧含量，改善養(yǎng)殖水質(zhì)，而且使中華絨螯蟹的累積死亡數(shù)量顯著降低，每公頃產(chǎn)量和每公頃產(chǎn)值分別增加了40.9%和61.9%，顯著提高了中華絨螯蟹的養(yǎng)殖效益。本試驗(yàn)研究為建立中華絨螯蟹的高效綠色健康養(yǎng)殖技術(shù)提供了科學(xué)參考。