趙小波，劉俐君通信作者，李 成，楊 青，黎丁箕，鄭永剛，王 勤

(1.達(dá)州市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，四川 達(dá)州 635000；2.達(dá)州市職業(yè)技術(shù)學(xué)院，四川 達(dá)州 635000)

0 引言

開(kāi)展獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)能力比對(duì)，是評(píng)價(jià)獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)技術(shù)水平，加強(qiáng)獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制的有效方法[1]，更是強(qiáng)化獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)能力建設(shè)，提升動(dòng)物疫病監(jiān)測(cè)預(yù)警水平的重要舉措[2]。2020年10月，達(dá)州市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心組織全市7個(gè)縣級(jí)獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行了檢測(cè)能力比對(duì)，并對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行分析，以期有針對(duì)性地改進(jìn)提高。

1 材料與方法

1.1 比對(duì)項(xiàng)目

共設(shè)H5亞型禽流感抗體(H5-AI Ab)、O口蹄疫抗體(O-FMD Ab)和非洲豬瘟病毒(ASFV)核酸檢測(cè)3個(gè)比對(duì)項(xiàng)目。其中H5-AI Ab檢測(cè)采用HI方法，按照《高致病性禽流感診斷技術(shù)》(GB/T18936-2003)進(jìn)行[3]；O-FMD Ab檢測(cè)采用競(jìng)爭(zhēng)ELISA方法、ASFV核酸檢測(cè)采用RT-PCR方法，參照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

1.2 比對(duì)材料

1.2.1 檢測(cè)試劑

市中心統(tǒng)一提供禽流感病毒H5亞型(Re-11)血凝抑制試驗(yàn)抗原(哈爾濱維科生物技術(shù)有限公司、批號(hào)2019009)和標(biāo)準(zhǔn)陰性、陽(yáng)性血清；口蹄疫病毒O型競(jìng)爭(zhēng)ELISA抗體檢測(cè)試劑盒(批號(hào)020092017)和非洲豬瘟病毒熒光PCR檢測(cè)試劑盒(批號(hào)040222012)由青島立見(jiàn)診斷技術(shù)發(fā)展中心提供；DNA提取試劑由各實(shí)驗(yàn)室自備。

1.2.2 比對(duì)樣品

每個(gè)項(xiàng)目每個(gè)縣準(zhǔn)備比對(duì)樣品5份，并設(shè)置重復(fù)樣品。其中H5-AI Ab檢測(cè)比對(duì)樣品抗體滴度設(shè)置﹤1 log 2、4 log 2和7 log 2 3個(gè)參考值(哈爾濱維科生物技術(shù)有限公司制備)；O-FMD Ab、ASFV核酸檢測(cè)比對(duì)樣品設(shè)置陰性、陽(yáng)性和弱陽(yáng)性3個(gè)參考值(青島立見(jiàn)診斷技術(shù)發(fā)展中心制備)。經(jīng)市中心驗(yàn)證后制備盲樣。

1.3 評(píng)判標(biāo)準(zhǔn)

H5-AI Ab檢測(cè)：檢測(cè)結(jié)果與參考值一致或±1；O-FMD Ab和ASFV檢測(cè)：陽(yáng)性、弱陽(yáng)性樣品檢測(cè)結(jié)果為“陽(yáng)性”，陰性樣品檢測(cè)結(jié)果為“陰性”。

2 結(jié)果

2.1 總體結(jié)果

3個(gè)比對(duì)項(xiàng)目平均符合率92.33%，H5-AI Ab、O-FMD Ab、ASFV核酸檢測(cè)符合率分別為94.29%、94.29%、88.57%。2個(gè)縣全部正確，3個(gè)縣符合率為93.33%，如表1所示。

表1 各縣實(shí)驗(yàn)室比對(duì)結(jié)果統(tǒng)計(jì)

2.2 H5-AI Ab

2個(gè)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果與參考值完全一致；參考值為7log2的樣品，1個(gè)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果相差2個(gè)滴度，3個(gè)實(shí)驗(yàn)室相差1個(gè)滴度；參考值為4log2的樣品，5個(gè)實(shí)驗(yàn)室相差1個(gè)滴度。各實(shí)驗(yàn)室的重復(fù)樣品，檢測(cè)結(jié)果一致。

2.3 O-FMD Ab

有5個(gè)實(shí)驗(yàn)室O-FMD Ab檢測(cè)結(jié)果全部正確；A縣1份陰性樣品檢測(cè)為陽(yáng)性，B縣將1份弱陽(yáng)性檢測(cè)為陰性。

2.4 ASFV核酸

3個(gè)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果與參考值完全一致；另外4個(gè)縣弱陽(yáng)性樣品檢測(cè)結(jié)果為陰性。各縣強(qiáng)陽(yáng)性和陰性樣品檢測(cè)結(jié)果較準(zhǔn)確，弱陽(yáng)性的檢出率低。

3 討論

從比對(duì)結(jié)果看，達(dá)州市縣級(jí)獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室具備此3種方法檢測(cè)相應(yīng)動(dòng)物疫病的能力。但個(gè)別實(shí)驗(yàn)室個(gè)別項(xiàng)目檢測(cè)結(jié)果仍有偏差，還需查找原因加以改進(jìn)提高。

血凝抑制試驗(yàn)受器材、稀釋液、抗原、待檢血清、紅細(xì)胞、人員操作及其他因素影響，試驗(yàn)結(jié)果易出現(xiàn)偏差[4]。個(gè)別實(shí)驗(yàn)室測(cè)定抗原滴度較高，導(dǎo)致比對(duì)結(jié)果抗體滴度偏高。個(gè)別樣品檢測(cè)結(jié)果偏倚方向與其余4份樣品不一致，可能是由于加樣不準(zhǔn)確或主觀結(jié)果判讀有誤導(dǎo)致。而ELISA試驗(yàn)不易受主觀因素影響，個(gè)別樣品結(jié)果有誤可能是加樣造成污染或加樣量不足導(dǎo)致。

為適應(yīng)非洲豬瘟防控需要，2020年達(dá)州市首次將RT-PCR方法納入比對(duì)項(xiàng)目。但ASFV弱陽(yáng)性樣品符合率較低，而影響RT-PCR試驗(yàn)的因素包括檢測(cè)試劑和檢測(cè)儀器的靈敏度、樣品的病毒含量及人員操作等。本次出現(xiàn)假陰性的可能原因有如下幾點(diǎn)。一是弱陽(yáng)性樣品CT值接近臨界值，病毒含量低，各縣核酸提取試劑的提取效率不同導(dǎo)致個(gè)別實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)失敗。二是個(gè)別實(shí)驗(yàn)室購(gòu)置的簡(jiǎn)易R(shí)T-PCR檢測(cè)儀器靈敏度有待比對(duì)，移液器等未定期進(jìn)行質(zhì)量檢定。三是病毒核酸檢測(cè)技術(shù)剛在縣級(jí)實(shí)驗(yàn)室普及，操作不熟練。工作實(shí)踐中，環(huán)境、唾液、豬肉產(chǎn)品等樣品病毒含量通常較低，所以病毒核酸檢測(cè)能力急需提高。

4 結(jié)語(yǔ)

達(dá)州市縣級(jí)獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)能力仍需加強(qiáng)。一是強(qiáng)化實(shí)驗(yàn)室建設(shè)，配置精良儀器設(shè)備并定期檢定更新。二是定期開(kāi)展培訓(xùn)，提升人員素養(yǎng)。定期開(kāi)展實(shí)驗(yàn)室間、檢測(cè)人員間、儀器設(shè)備間比對(duì)，及時(shí)發(fā)現(xiàn)問(wèn)題整改。三是完善實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理體系和生物安全管理體系，嚴(yán)格操作程序，規(guī)范實(shí)驗(yàn)活動(dòng)。