高 波

（景泰縣人民醫(yī)院，甘肅 景泰 730400）

肺結(jié)核為傳染性疾病，患病群體數(shù)量日漸增多，危害性嚴(yán)重，而有效的抗結(jié)核治療依賴于診斷結(jié)果[1]。目前國內(nèi)結(jié)核病實(shí)驗(yàn)室診斷方法較多，包括涂片鏡檢法、固體培養(yǎng)法、比例法藥敏試驗(yàn)等，以上方法在肺結(jié)核病診斷方面因敏感度低、耗時(shí)較長等限制，漏診、誤診情況頻頻發(fā)生[2]。分子生物學(xué)診斷技術(shù)不斷進(jìn)步，逐漸發(fā)展出Xpert MTB/RIF 檢測(cè)技術(shù)，其在結(jié)核病、利福平耐藥檢測(cè)方面應(yīng)用較廣，具有快速檢測(cè)、靈敏度高、特異度高等多重優(yōu)勢(shì)[3]。因此，本研究將Xpert MTB/RIF 檢測(cè)技術(shù)用于肺結(jié)核病診斷過程，診斷結(jié)果報(bào)告如下。

1 臨床資料與方法

1.1 臨床資料

選擇2019 年1 月～2020 年2 月期間于景泰縣人民醫(yī)院就診的疑似肺結(jié)核病患者178 例作為本次研究對(duì)象，男130 例，女48 例，年齡20～69 歲，平均年齡（51.38±8.96）歲。

1.2 方法

標(biāo)本采集：收集178 例患者痰標(biāo)本（清晨痰），及時(shí)送檢，標(biāo)本采集時(shí)178 例患者均未開始抗結(jié)核治療。

涂片鏡檢法：參照《痰涂片鏡檢標(biāo)準(zhǔn)化操作及質(zhì)量保證手冊(cè)》實(shí)施檢測(cè)。

固體培養(yǎng)法：參照《分枝桿菌分離培養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)化操作程序及質(zhì)量保證手冊(cè)》實(shí)施檢測(cè)。

比例法藥敏試驗(yàn)：參照《結(jié)核分枝桿菌藥物敏感性試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)化操作程序及質(zhì)量保證手冊(cè)》實(shí)施檢測(cè)。

Xpert MTB/RIF 檢測(cè)技術(shù)：主要借助全自動(dòng)Gene Xpert 儀器與配套試劑盒檢測(cè)。

以上檢測(cè)結(jié)果提示“無效”“錯(cuò)誤”“無結(jié)果”等情況下，需再次留取標(biāo)本實(shí)施檢測(cè)。

1.3 觀察指標(biāo)

（1）不同檢測(cè)方法陽性檢出情況比較。統(tǒng)計(jì)涂片鏡檢法、固體培養(yǎng)法、Xpert MTB/RIF 檢測(cè)技術(shù)對(duì)痰標(biāo)本的陽性檢出情況。

（2）不同檢測(cè)方法檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌結(jié)果（以固體培養(yǎng)結(jié)果為金標(biāo)準(zhǔn)）。

（3）Xpert MTB/RIF 檢測(cè)技術(shù)檢測(cè)利福平耐藥性情況（以比例法藥敏試驗(yàn)結(jié)果為金標(biāo)準(zhǔn)）。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

數(shù)據(jù)分析使用SPSS23.0，計(jì)數(shù)資料用n（%）表示，組間比較行χ2檢驗(yàn)。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不同檢測(cè)方法陽性檢出情況比較

178 份痰標(biāo)本均采用不同檢測(cè)方法實(shí)施檢測(cè)，涂片鏡檢法：陽性痰標(biāo)本共48 份，陽性率26.97%；固體培養(yǎng)法：陽性痰標(biāo)本共72 份，陽性率40.45%；Xpert MTB/RIF 檢測(cè)技術(shù)：陽性痰標(biāo)本共98 份，陽性率55.06%。固體培養(yǎng)法痰標(biāo)本陽性檢出率高于涂片鏡檢法（χ2=7.241，P=0.007）；Xpert MTB/RIF 檢測(cè)技術(shù)痰標(biāo)本陽性檢出率高于涂片鏡檢法（χ2=29.028，P=0.000）；Xpert MTB/RIF 檢測(cè)技術(shù)痰標(biāo)本陽性檢出率高于固體培養(yǎng)法（χ2=7.611，P=0.006）。

2.2 不同檢測(cè)方法檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌結(jié)果（以固體培養(yǎng)結(jié)果為金標(biāo)準(zhǔn)）

以固體培養(yǎng)結(jié)果為金標(biāo)準(zhǔn)，Xpert MTB/RIF 檢測(cè)技術(shù)檢測(cè)的靈敏度94.44%（68/72）明顯高于涂片鏡檢55.56%（40/72），比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=29.037，P=0.000）；Xpert MTB/RIF 檢測(cè)技術(shù)與固體培養(yǎng)結(jié)果的一致性顯著高于涂片鏡檢法（Kappa=0.625vs 0.507，P＜0.05）。見表1。

表1 不同檢測(cè)方法檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌結(jié)果（以固體培養(yǎng)結(jié)果為金標(biāo)準(zhǔn)）

2.3 Xpert MTB/RIF 檢測(cè)技術(shù)檢測(cè)利福平耐藥性情況（以比例法藥敏試驗(yàn)結(jié)果為金標(biāo)準(zhǔn)）

固體培養(yǎng)結(jié)果顯示陽性菌株共72 份，行菌種初步鑒定，鑒定結(jié)果提示非結(jié)核分枝桿菌共4 份，結(jié)核分枝桿菌共68 份。采用Xpert MTB/RIF 檢測(cè)技術(shù)與比例法藥敏試驗(yàn)對(duì)以上68 份進(jìn)行利福平耐藥性檢測(cè)，結(jié)果提示，Xpert MTB/RIF 檢測(cè)技術(shù)檢測(cè)利福平耐藥率20.59%（14/68）與比例法藥敏試驗(yàn)?zāi)退幝?2.06%（15/68）比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=29.037，P=0.000）；Xpert MTB/RIF 檢測(cè)技術(shù)與比例法藥敏試驗(yàn)符合率98.53%（67/68）。見表2。

表2 Xpert MTB/RIF 檢測(cè)技術(shù)檢測(cè)利福平耐藥性情況（以比例法藥敏試驗(yàn)結(jié)果為金標(biāo)準(zhǔn)）

3 討論

Xpert MTB/RIF 檢測(cè)技術(shù)是半巢式實(shí)時(shí)熒光定量PCR 技術(shù)優(yōu)化所得，靶基因?yàn)閞poB 基因，能依賴于自動(dòng)化系統(tǒng)完成脫氧核糖核酸提取、rpoB 基因擴(kuò)增、目標(biāo)序列（位于rpoB 基因上的192bp 片段）檢測(cè)。另外，根據(jù)分子信標(biāo)、探針等，同樣能輔助肺結(jié)核病診斷、利福平耐藥情況等[4]。研究表明，利福平耐藥情況與rpoB 基因存在關(guān)聯(lián)，若存在利福平耐藥情況，則rpoB 基因會(huì)發(fā)生相應(yīng)突變[5-6]。

本研究結(jié)果顯示：①178 份痰標(biāo)本均采用不同檢測(cè)方法實(shí)施檢測(cè)，涂片鏡檢法：陽性痰標(biāo)本共48份，陽性率26.97%；固體培養(yǎng)法：陽性痰標(biāo)本共72份，陽性率40.45%；Xpert MTB/RIF 檢測(cè)技術(shù)：陽性痰標(biāo)本共98 份，陽性率55.06%。固體培養(yǎng)法痰標(biāo)本陽性檢出率高于涂片鏡檢法；Xpert MTB/RIF 檢測(cè)技術(shù)痰標(biāo)本陽性檢出率高于涂片鏡檢法；Xpert MTB/RIF 檢測(cè)技術(shù)痰標(biāo)本陽性檢出率高于固體培養(yǎng)法。可見，Xpert MTB/RIF 檢測(cè)技術(shù)在提高痰標(biāo)本陽性檢出率方面優(yōu)勢(shì)突出，其應(yīng)用價(jià)值明顯優(yōu)于涂片鏡檢法、固體培養(yǎng)法。原因可能是，Xpert MTB/RIF檢測(cè)技術(shù)其是半巢式實(shí)時(shí)熒光定量PCR 技術(shù)優(yōu)化所得，集脫氧核糖核酸提取、PCR 擴(kuò)增、目標(biāo)序列檢測(cè)等多個(gè)步驟于一體，具有檢測(cè)快、污染幾率低、靈敏度高等多重優(yōu)勢(shì)。②以固體培養(yǎng)結(jié)果為金標(biāo)準(zhǔn)，Xpert MTB/RIF 檢測(cè)技術(shù)檢測(cè)的靈敏度94.44%（68/72）明顯高于涂片鏡檢55.56%（40/72），比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；Xpert MTB/RIF 檢測(cè)技術(shù)檢測(cè)的Kappa 值明顯優(yōu)于涂片鏡檢。提示，與涂片鏡檢法相較，XpertMTB/RIF 檢測(cè)技術(shù)在肺結(jié)核病原學(xué)診斷方面能提供更有力的證據(jù)。③XpertMTB/RIF 檢測(cè)技術(shù)檢測(cè)利福平耐藥率20.59%（14/68）與比例法藥敏試驗(yàn)?zāi)退幝?2.06%（15/68）比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=29.037，P=0.000）；Xpert MTB/RIF 檢測(cè)技術(shù)與比例法藥敏試驗(yàn)符合率98.53%（67/68），此結(jié)果進(jìn)一步證實(shí)了Xpert MTB/RIF 檢測(cè)技術(shù)對(duì)利福平耐藥性情況的高診斷價(jià)值，其與金標(biāo)準(zhǔn)符合率較高。與劉揚(yáng)等[7]研究結(jié)果相似。

綜上所述，Xpert MTB/RIF 檢測(cè)技術(shù)在肺結(jié)核病診斷、利福平耐藥性情況等方面均有著較高的可行性、可靠性。