詹亞琨羅 艷鄒 蓓

(1.南昌大學(xué)第二附屬醫(yī)院急診科, 南昌 330006; 2.南昌大學(xué)第二附屬醫(yī)院影像中心,南昌 330006;3.南昌大學(xué)第二附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科,南昌 330006)

創(chuàng)傷性腦損傷(traumatic brain injury,TBI) 是臨床上最常見(jiàn)的神經(jīng)外科疾病之一[1]。臨床上主要表現(xiàn)為眩暈、頭痛或者意識(shí)障礙,進(jìn)而導(dǎo)致各種神經(jīng)功能障礙、運(yùn)動(dòng)障礙甚至喪失生活自理能力[2]。目前造成TBI 的主要因素是交通事故和暴力事件。因其后期的高致死率、高致殘率,給患者的家庭以及社會(huì)都帶來(lái)沉重的負(fù)擔(dān)。因此尋找可靠的治療手段,恢復(fù)患者的神經(jīng)功能,提高患者的生存率,已成為神經(jīng)外科領(lǐng)域的研究重點(diǎn)。研究表明[3]創(chuàng)傷性腦損傷后腦組織的炎癥反應(yīng)是后期病程發(fā)展中最重要的病理改變。Hinson 等[4]研究指出TBI 后神經(jīng)細(xì)胞的線粒體功能障礙參與了腦損傷后的病理演變的全過(guò)程。因此從目前神經(jīng)外科醫(yī)治手段出發(fā),尋找藥物控制炎性反應(yīng)以及降低或者緩解神經(jīng)細(xì)胞的線粒體障礙已成為控制創(chuàng)傷性腦損傷病程發(fā)展的有效途徑[5]。重組人促紅細(xì)胞生成素(recombinant human erythropoietin,rhEPO)是臨床上治療由腎功能不全引起的貧血的常用藥物。藥理學(xué)研究表明[6]rhEPO 具有抗氧化、抗細(xì)胞凋亡、以及促進(jìn)神經(jīng)細(xì)胞再生的作用。近年來(lái)研究證明[7]rhEPO 在TBI 中具有腦組織保護(hù)的作用,對(duì)中風(fēng)、腦出血、以及創(chuàng)傷性腦損傷等神經(jīng)系統(tǒng)疾病具有潛在的治療作用。周龍等[8]研究證明rhEPO 能夠減輕TBI 小鼠的腦損傷,抑制炎癥反應(yīng),改善T 細(xì)胞平衡。因此本研究通過(guò)建立創(chuàng)傷性腦損傷大鼠模型,從rhEPO 對(duì)線粒體以及炎性反應(yīng)的角度來(lái)探討rhEPO 對(duì)創(chuàng)傷性腦損傷神經(jīng)細(xì)胞的保護(hù)機(jī)制,為日后的臨床研究提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。

1 材料和方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

36 ～40 月齡,SPF 級(jí),280 ～ 320 g,雄性 SD 大鼠共計(jì)60 只,提供自我院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心[SCXK(贛)2018-0009],依照我院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物管理辦法,所有大鼠在本院動(dòng)物房中[SYXK(贛)2018-0003],室溫 18℃ ～25℃,濕度在(56±5)%內(nèi),適應(yīng)性喂養(yǎng)一周后進(jìn)行實(shí)驗(yàn);本研究中涉及動(dòng)物的實(shí)驗(yàn)操作中給與動(dòng)物人道的關(guān)懷按3R 原則進(jìn)行,并經(jīng)本院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物管理倫理委員會(huì)批準(zhǔn)(IACUC-2019-093)。

1.2 主要試劑與儀器

重組人促紅細(xì)胞生成素(Recombinant human erythropoietin,rhEPO)采購(gòu)自北京四環(huán)生物制藥有限公司;Rh123 染色劑采購(gòu)自Sigma 公司;動(dòng)力相關(guān)蛋白1(Drp-1)、分裂蛋白 1(Fis-1)、融合蛋白 2(Mfn 2)、視神經(jīng)萎縮蛋白1 (Opa 1)抗體采購(gòu)自美國(guó)Abcam 公司;BCA 蛋白濃度測(cè)定試劑盒、3,3’-二氨基聯(lián)苯胺(3,3’-diaminobenzidine,DAB)化學(xué)發(fā)光試劑盒采購(gòu)自南京建成生物技術(shù)有限公司;IL-1β、IL-6 和 TNF-α 抗體采購(gòu)自美國(guó) (Cell Signaling Technology,CST)公司;實(shí)驗(yàn)用動(dòng)物麻醉劑5%戊巴比妥鈉(德國(guó)進(jìn)口分裝,每瓶250 g)采購(gòu)自北京化學(xué)試劑公司;冰凍切片包埋劑采購(gòu)自美國(guó)櫻花公司。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 創(chuàng)作性腦損傷大鼠模型的制備以及實(shí)驗(yàn)分組處理

將已進(jìn)行適應(yīng)性喂養(yǎng)的大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組(sham 組)模型組、rhEPO 干預(yù)組(治療組),每組20 只,其中模型組、治療組采用改良過(guò)的Feeney 自由落體撞擊大鼠頭部來(lái)建立創(chuàng)傷性大鼠模型:將戊巴比妥鈉(5%,0.15 mL/100 g)腹腔注射以麻醉大鼠,將大鼠以俯臥位固定,沿顱骨正中線行縱切口,暴露右側(cè)頂骨,在矢狀縫旁開(kāi)2 mm 處,以顱骨鉆造一個(gè)直徑5 mm 的孔。使用致傷力度為20 g 的小錘從50 cm 的高度自由落下,以制成大鼠右側(cè)大腦腦挫裂傷,保持大鼠硬腦膜完整,止血結(jié)束后無(wú)菌手術(shù)針縫合;本實(shí)驗(yàn)中動(dòng)物實(shí)驗(yàn)處理手段符合動(dòng)物倫理學(xué)標(biāo)準(zhǔn)。sham 組大鼠除不撞擊操作外,其余同上。術(shù)后各組大鼠均出現(xiàn)不同程度的肢體抽搐,四肢平衡協(xié)調(diào)性變差,呼吸不規(guī)則,瞳孔擴(kuò)大或縮小,瞳孔對(duì)光反應(yīng)減弱,睫毛反射、刺痛反應(yīng)以及角膜反射消失,部分出現(xiàn)口腔或鼻腔出血現(xiàn)象甚至?xí)簳r(shí)性昏迷,但經(jīng)行為學(xué)觀察各行為異常在30 min 內(nèi)恢復(fù)認(rèn)定造模手術(shù)成功。在造模結(jié)束后,治療組每日定時(shí)以5000 IU/kg 劑量rhEPO 進(jìn)行腹腔注射,sham組和模型組腹腔注射等劑量生理鹽水,連續(xù)給藥7 d后處死大鼠,并且斷頭取腦,將各組大鼠的全腦組織在5%多聚甲醛中進(jìn)行室溫固定,48 h 后,以大鼠挫傷灶為中心,以2 cm 為半徑,切取2 mm 厚的標(biāo)本,常規(guī)脫水后,以液氮封存,置于深冷冰箱中待測(cè)。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中 sham 組死亡2 只,模型組死亡3只,治療組死亡1 只,最終每組均納入15 只大鼠進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

1.3.2 HE 染色觀察各組大鼠腦組織病理學(xué)形態(tài)變化

從深冷冰箱中取出各種大鼠的腦組織標(biāo)本,在分析天平上分別稱取100 mg,制成5 μm 厚度大小的切片,HE 染色,US-2018 熒光顯微鏡觀察各組大鼠腦組織損傷情況。

1.3.3 各組大鼠腦組織線粒體膜電位的檢測(cè)

取各組大鼠的腦組織樣品,在分析天平上分別稱取100 mg,常規(guī)方法固定,常規(guī)裂解后,制成單細(xì)胞懸液,按Rh123 試劑盒要求進(jìn)行染色,清洗,US-2018 熒光顯微鏡下觀察,細(xì)胞核周圍綠色的亮點(diǎn)即為攝取了Rh123 的線粒體。對(duì)圖像中的綠色熒光強(qiáng)度使用圖像軟件Image J 1.41 進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

1.3.4 透射電鏡觀察各組大鼠腦組織細(xì)胞的線粒體超微結(jié)構(gòu)改變

從深冷冰箱中取出各種大鼠的腦組織標(biāo)本,在分析天平上分別稱取100 mg,將大鼠腦組織制成超薄組織切片:①用30%聚甲醛和0.05%鋨酸將其固定1 h。②無(wú)菌脫水5 min。③置于預(yù)冷4℃乙醇3 min。④環(huán)氧樹(shù)脂 812 浸透 5 min,石蠟包埋。⑤鈾鉛進(jìn)行雙重染色,制成50 nm 的超薄切片,上透射電鏡觀察,應(yīng)用Simple-PCI8.0 圖像軟件進(jìn)行分析,獲取大鼠腦組織細(xì)胞的線粒體比表面積、體密度、數(shù)密度、以及比膜面積等參數(shù)。

1.3.5 免疫組化檢測(cè)組各組標(biāo)本中IL-1β、IL-6 和TNF-α 的表達(dá)

從深冷冰箱中取出各種大鼠的腦組織標(biāo)本,在分析天平上分別稱取100 mg,根據(jù)免疫組化試劑盒要求進(jìn)行固定,包埋,切片,抗原修復(fù),封閉,清洗,滴入一抗,孵育,加入二抗,顯色,復(fù)染,脫水,封片,顯微鏡下觀察。用MetaMorPH 圖像軟件進(jìn)行系統(tǒng)分析 IL-1β、IL-6 和 TNF-α 的陽(yáng)性細(xì)胞比例。

1.3.6 蛋白免疫印跡檢測(cè) Drp-1、Fis-1、Mfn 2、Opa 1 的表達(dá)水平

從深冷冰箱中取出各種大鼠的腦組織標(biāo)本,在分析天平上分別稱取100 mg,常規(guī)提取總蛋白及測(cè)定其濃度,取50 μg 蛋白上樣,經(jīng)凝膠電泳,轉(zhuǎn)膜,封閉,分別加稀釋好的一抗(1 ∶1000),4℃過(guò)夜孵育。次日,加適量二抗(1 ∶5000), 洗膜,顯色,拍照及灰度掃描,以GAPDH 作為內(nèi)參蛋白,Image J 軟件分析條帶的灰度值。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用軟件SPSS 19.0 進(jìn)行實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)分析,采用平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)進(jìn)行來(lái)表示符合正態(tài)分布的計(jì)量資料,采用單因素方差分析進(jìn)行多組間比較,采用獨(dú)立t檢驗(yàn)進(jìn)行兩兩組間比較,當(dāng)P<0.05 表示具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 HE 染色

HE 觀察各組大鼠腦組織病理變化如圖1 所示,sham 組大鼠腦組織結(jié)構(gòu)清晰,細(xì)胞排列規(guī)則,無(wú)腫脹,無(wú)出血等現(xiàn)象,未見(jiàn)炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。模型組大鼠腦組織腦水腫嚴(yán)重,可見(jiàn)明顯的出血壞死病灶,病灶區(qū)可見(jiàn)大量變性環(huán)死的神經(jīng)細(xì)胞,病灶周圍可見(jiàn)大量的炎性細(xì)胞浸潤(rùn),并且細(xì)胞核固縮明顯,細(xì)胞間隙增大,細(xì)胞基質(zhì)疏松。治療組大鼠腦組織腦水腫明顯減輕,病灶區(qū)及水腫區(qū)明顯變小,壞死細(xì)胞減少,炎性細(xì)胞浸潤(rùn)較少。

2.2 各組大鼠腦組織線粒體膜電位的檢測(cè)

本研究采用羅丹明123(rhodamine 123,Rh123)熒光染色來(lái)檢測(cè)線粒體膜電位(mitochondrial membrane potential,MMP)的變化,進(jìn)而能夠反映細(xì)胞線粒體結(jié)構(gòu)的完整性。Rh123 染色結(jié)果如圖2 所示,與sham 組相比,模型組大鼠腦組織細(xì)胞Rh123熒光強(qiáng)度明顯減弱(P<0.05),線粒體膜損傷嚴(yán)重;與模型組相比,治療組腦組織中細(xì)胞Rh123 熒光強(qiáng)度明顯增強(qiáng)(P<0.05),說(shuō)明治療組大鼠腦組織中線粒體損傷有所恢復(fù)。

2.3 各組大鼠腦組織中與線粒體動(dòng)力學(xué)相關(guān)蛋白的表達(dá)

腦組織細(xì)胞基質(zhì)中的線粒體處于動(dòng)態(tài)相對(duì)平衡的細(xì)胞器,主要通過(guò)線粒體內(nèi)外膜的裂解和融合而改變其形狀,使其在長(zhǎng)的相互連接的網(wǎng)絡(luò)狀性態(tài)和不連接的破碎的性態(tài)之間相互轉(zhuǎn)換,細(xì)胞生物學(xué)上將這中動(dòng)態(tài)平衡過(guò)程稱為細(xì)胞線粒體的動(dòng)力學(xué)[9-10]。動(dòng)力相關(guān)蛋白1(Drp-1)和分裂蛋白1(Fis-1)是調(diào)節(jié)線粒體膜裂解的主要蛋白,Drp-1 通過(guò)接頭蛋白Fis-1 相互作用定位在線粒體膜上,進(jìn)而促進(jìn)線粒體裂解; 調(diào)節(jié)線粒體外膜相融合的蛋白是融合蛋白2(Mfn 2),調(diào)節(jié)線粒體內(nèi)膜相融合的是為視神經(jīng)萎縮蛋白1(Opa 1)。

本研究中采用研究采用Western blot 法檢測(cè)各組大鼠腦組織中 Drp-1、Fis-1、Mfn 2、Opa 1 蛋白的表達(dá)水平以進(jìn)一步提示rhEPO 對(duì)腦組織線粒體的作用機(jī)制,,結(jié)果顯示,和sham 組相比,模型組大鼠腦組織中Drp-1、Fis-1 蛋白的表達(dá)明顯升高(P<0.05),Mfn 2、Opa 1 蛋白的表達(dá)明顯降低(P<0.05);和模型組組相比,治療組大鼠腦組織中Drp-1、Fis-1 蛋白的表達(dá)明顯降低(P<0.05),Mfn 2、Opa 1 蛋白的表達(dá)明顯升高(P<0.05),見(jiàn)圖3。

2.4 透射電鏡觀察各組大鼠腦組織細(xì)胞的線粒體超微結(jié)構(gòu)改變

為更加直觀的了解各組大鼠腦組織中線粒體的變化,本研究中采用電鏡觀察線粒體超微結(jié)構(gòu),結(jié)果如圖4 所示,sham 組大鼠腦組織內(nèi)細(xì)胞結(jié)構(gòu)完整,胞膜完整,線粒體形態(tài)正常,嵴結(jié)構(gòu)清晰可辨,并且排列整齊,細(xì)胞基質(zhì)內(nèi)高爾基體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、核糖體等內(nèi)容物結(jié)構(gòu)完整,清晰可辨,無(wú)腫脹、溶解等現(xiàn)象。模型組大鼠腦組織中細(xì)胞內(nèi)容物或腫脹或結(jié)構(gòu)重疊或者破裂,線粒體出現(xiàn)腫脹現(xiàn)象,多數(shù)線粒體出現(xiàn)空泡樣改變,嵴結(jié)構(gòu)變形或者變少或者缺失,部分線粒體嵴病變成為空泡樣嵴,線粒體基膜模糊,整個(gè)神經(jīng)元內(nèi)線粒體總數(shù)量明顯減少。治療組大鼠腦組織內(nèi)線粒體超微結(jié)構(gòu)有所好轉(zhuǎn),線粒體空泡樣變性明顯緩解,稍見(jiàn)腫脹,線粒體的數(shù)量明顯增多,結(jié)構(gòu)趨于正常,僅有部分線粒體輕度腫脹,線粒體嵴結(jié)構(gòu)的數(shù)目和形態(tài)也趨于正常,偶見(jiàn)線粒體嵴斷裂或消失。

注:A:sham 組;B:模型組;C:治療組。白色箭頭所指為神經(jīng)元細(xì)胞。圖1 HE 染色結(jié)果Note.A, sham group.B, model group.C, treatment group.The white arrows refer to neuronal cells.Figure 1 The result of HE staining

注:A:sham 組;B:模型組;C:治療組。與 sham 組相比,?P<0.05;與模型組相比,#P<0.05。下同。圖2 Rh123 染色結(jié)果Note.A, sham group.B, model group.C, treatment group.Compared with rats in the sham group, ?P <0.05.Compared with rats in the model group, #P <0.05.The same as below.Figure 2 The result of Rh123 staining

各組大鼠腦組織線粒體體視學(xué)分析如圖5 所示,與sham 組相比,模型組腦組織中線粒體的體密度數(shù)值、比表面積、比膜面積以及數(shù)密度數(shù)值均明顯減小(P<0.05),說(shuō)明模型組的線粒體損傷嚴(yán)重;與模型組相比,治療組線粒體的體密度數(shù)值、比表面積、比膜面積以及數(shù)密度數(shù)值均明顯增大(P<0.05),說(shuō)明治療組的線粒體損傷有所恢復(fù)。

2.5 各組大鼠腦組織中 IL-1β、IL-6 和 TNF-α 的表達(dá)

各組大鼠腦組織中 IL-1β、IL-6 和 TNF-α 的表達(dá)如圖6～8 所示,與sham 組相比,模型組大鼠腦組織IL-1β、IL-6 和 TNF-α 陽(yáng)性細(xì)胞比例出現(xiàn)了明顯升高(P<0.05),與模型組相比,治療組腦組織中細(xì)胞 IL-1β、IL-6 和 TNF-α 陽(yáng)性細(xì)胞比例出現(xiàn)了明顯降低(P<0.05)。

3 討論

創(chuàng)傷性腦損傷(TBI)是嚴(yán)重危害人類健康的急性的神經(jīng)系統(tǒng)疾病。因TBI 所引發(fā)的一系列并發(fā)癥嚴(yán)重影響了TBI 的根治性治愈[11]。研究表明[12]炎性反應(yīng),線粒體損傷以及興奮性氨基酸神經(jīng)毒性作用使導(dǎo)致TBI 后腦神經(jīng)功能受損的重要原因。因此尋找一種能有效控制炎性反應(yīng)或者緩解線粒體功能障礙的的藥物或者治療手段是改善TBI 患者治療及預(yù)后的的關(guān)鍵所在。

圖3 Western blot 檢測(cè)結(jié)果Figure 3 Result of Western blot

圖4 電鏡觀察結(jié)果Figure 4 Result of electron microscope

圖5 各組大鼠腦組織線粒體體視學(xué)分析Figure 5 Stereoscopic analysis of mitochondrial in brain tissue of rats in each group

重組人促紅細(xì)胞生成素(rhEPO)是體內(nèi)調(diào)節(jié)紅細(xì)胞生成的糖蛋白。大量的動(dòng)物模型實(shí)驗(yàn)證明[13]rhEPO 在神經(jīng)保護(hù)方面發(fā)揮了抗氧化、抗炎癥、減輕腦水腫、抗興奮性毒性,以及促血管新生、血腦屏障保護(hù)的作用。隨著臨床研究的進(jìn)展,rhEPO 在創(chuàng)傷性腦損傷和缺血性腦卒中發(fā)揮的的神經(jīng)保護(hù)引起關(guān)注。段淼等[14]研究報(bào)道rhEPO 能夠改善腦損傷后新生大鼠的認(rèn)知功能。楊利輝等[15]連續(xù)3 周給與急性缺血性腦卒中患者皮下注射rhEPO,發(fā)現(xiàn)rhEPO 能減少急性缺血性腦血管病患者的梗死面積,改善其臨床療效。已有臨床研究證實(shí)[16]rhEPO能夠抑制炎性反應(yīng),抑制急性腦損傷后的神經(jīng)細(xì)胞的凋亡和具有促進(jìn)血管生成的作用。但是有關(guān)rhEPO 在TBI 后腦損傷的線粒體功能障礙中的作用少見(jiàn)報(bào)道。

本研究中采用改良過(guò)的Feeney 自由落體撞擊大鼠頭部來(lái)建立創(chuàng)傷性大鼠模型[17],造模操作過(guò)程簡(jiǎn)便易行,造模結(jié)束后HE 觀察模型組大鼠腦組織腦水腫嚴(yán)重,可見(jiàn)明顯的出血壞死病灶,病灶區(qū)可見(jiàn)大量變性環(huán)死的神經(jīng)細(xì)胞,病灶周圍可見(jiàn)大量的炎性細(xì)胞浸潤(rùn),并且細(xì)胞核固縮明顯,細(xì)胞間隙增大,細(xì)胞基質(zhì)疏松,TBI 癥狀明顯。采用rhEPO 治療后,治療組大鼠腦組織腦水腫明顯減輕,病灶區(qū)及水腫區(qū)明顯變小,壞死細(xì)胞減少,炎性細(xì)胞浸潤(rùn)較少,TBI 癥狀明顯減輕。

圖6 免疫組化檢測(cè)IL-1β 的表達(dá)Figure 6 Immunohistochemical detection of the expression of IL-1β

圖7 免疫組化檢測(cè)IL-6 的表達(dá)Figure 7 Immunohistochemical detection of the expression of IL-6

圖8 免疫組化檢測(cè)TNF-α 的表達(dá)Figure 8 Immunohistochemical detection of the expression of TNF-α

線粒體是細(xì)胞的“power house”,是細(xì)胞進(jìn)行能量代謝的主要場(chǎng)所。因此線粒體結(jié)構(gòu)的損傷是最能體現(xiàn)細(xì)胞病變或者損傷的指標(biāo)[18]。本研究中采用Rh123 染色、Wetern blot 法來(lái)研究各組大鼠腦組織中線粒體膜電位的變化以及與線粒體動(dòng)力學(xué)相關(guān)的蛋白的表達(dá)。結(jié)果表明:與sham 組相比,模型組大鼠腦組織細(xì)胞Rh123 熒光強(qiáng)度明顯減弱(P<0.05),腦組織中Drp-1、Fis-1 蛋白的表達(dá)明顯升高(P<0.05),Mfn 2、Opa 1 蛋白的表達(dá)明顯降低(P<0.05),說(shuō)明模型組大鼠腦組織中線粒體膜結(jié)構(gòu)的損傷嚴(yán)重。與模型組相比,治療組腦組織中細(xì)胞Rh123 熒光強(qiáng)度明顯增強(qiáng)(P<0.05),腦組織中Drp-1、Fis-1 蛋白的表達(dá)明顯降低(P<0.05),Mfn 2、Opa 1 蛋白的表達(dá)明顯升高(P<0.05),說(shuō)明治療組大鼠腦組織中線粒體損傷有所恢復(fù)。為進(jìn)一步研究線粒體的的損傷情況,本研究中采用電鏡觀察線粒體的超微結(jié)構(gòu)的變化并進(jìn)行體視學(xué)分析,結(jié)果表明:模型組大鼠腦組織中細(xì)胞內(nèi)容物或腫脹或結(jié)構(gòu)重疊或者破裂,線粒體出現(xiàn)腫脹現(xiàn)象,多數(shù)線粒體出現(xiàn)空泡樣改變,嵴結(jié)構(gòu)變形或者變少或者缺失,部分線粒體嵴因線粒體外室腫脹擴(kuò)張,成為空泡樣嵴,線粒體基膜模糊,整個(gè)神經(jīng)元內(nèi)線粒體總數(shù)量明顯減少。治療組大鼠腦組織內(nèi)線粒體超微結(jié)構(gòu)有所好轉(zhuǎn),空泡樣變性明顯緩解,稍見(jiàn)腫脹,線粒體的數(shù)量明顯增多,結(jié)構(gòu)趨于正常,僅有部分線粒體輕度腫脹,線粒體嵴結(jié)構(gòu)的數(shù)目和形態(tài)也趨于正常,偶見(jiàn)線粒體嵴斷裂或消失。各組大鼠腦組織線粒體體視學(xué)分析結(jié)果表明,與sham 組相比,模型組大鼠細(xì)胞中腦組織中線粒體的體密度數(shù)值、比表面積、比膜面積以及數(shù)密度數(shù)值均明顯減小(P<0.05),說(shuō)明模型組的線粒體損傷嚴(yán)重;與模型組相比,治療組腦組織中神經(jīng)細(xì)胞中線粒體的腦組織中線粒體的體密度數(shù)值、比表面積、比膜面積以及數(shù)密度數(shù)值均明顯增大(P<0.05),說(shuō)明治療組的線粒體損傷有所恢復(fù)。

炎性反應(yīng)在TBI 進(jìn)程中發(fā)揮了重要的作用。L-1β、IL-6 和 TNF-α 是最常見(jiàn)的炎性因子。有研究報(bào)道證明[19]rhEPO 能夠明顯抑制心臟、肺等臟器損傷后的炎性反應(yīng)。但未見(jiàn)有rhEPO 與腦損傷后炎性反應(yīng)的的關(guān)系的的報(bào)道。本研究采用免疫組化和Wetern blot 法檢測(cè)炎性因子的表達(dá),結(jié)果都表明,與sham 組相比,模型組大鼠腦組織細(xì)胞IL-1β、IL-6 和TNF-α 明顯升高(P<0.05),與模型組相比,治療組腦組織中細(xì)胞 IL-1β、IL-6 和 TNF-α 明顯降低(P<0.05)。說(shuō)明rhEPO 能明顯抑制TBI 后腦損傷的炎性反應(yīng)。

綜上所述,重組人促紅細(xì)胞生成素可以減輕創(chuàng)傷性腦損傷后的炎性反應(yīng),減輕線粒體損傷,從而發(fā)揮對(duì)創(chuàng)傷性腦損傷后的腦組織的保護(hù)作用。但如何將rhEPO 的這種保護(hù)作用于臨床上靶向治療創(chuàng)傷性腦損傷后的腦血管疾病,仍需進(jìn)一步的探索。