韋小芳 歐傳話 李紹龍 毛小玲

肝細(xì)胞癌是肝癌最常見的亞型，屬國內(nèi)常見惡性腫瘤之一，具有高度侵襲性及轉(zhuǎn)移性，近年來其發(fā)病率呈逐年增長趨勢，位居全球因惡性腫瘤致死亡人數(shù)的第三位，與長期大量飲酒、乙肝或丙肝病毒感染、攝入含有真菌代謝產(chǎn)物等密切相關(guān)[1]。雖然近年來其診斷和治療手段均取得了較大的突破，如高分辨率螺旋CT、肝動脈血管造影及肝動脈化療栓塞、熒光腹腔鏡肝切除術(shù)等，但患者生存率仍不太理想[2-6]。目前上市靶向治療藥物作用有限，故積極探尋新的能早期預(yù)測肝細(xì)胞癌及其預(yù)后的分子標(biāo)志物尤為重要，以期提供一種新的腫瘤治療靶點(diǎn)[7-8]。本研究采用免疫組化法檢測Twist在136例肝細(xì)胞癌患者中的表達(dá)。

資料與方法

一、一般資料

入選肝細(xì)胞癌患者136例，樣本納入時間為2013年1月至2017年1月。納入標(biāo)準(zhǔn)：所有患者均于入院后確診[9]；術(shù)前所有患者均未行分子靶向治療等；臨床隨訪資料完整(中位隨訪時間為20個月)。排除標(biāo)準(zhǔn)：①重要臟器功能異常；②肝細(xì)胞癌以外其他類型肝癌，如混合細(xì)胞性肝癌、彌漫性肝癌；③其他部位惡性腫瘤。136例患者中，腫瘤直徑5 cm以上46例；TNM分期：Ⅰ～Ⅳ期分別50例、37例、30例、19例；配對癌旁肝組織85例?；颊呔炇鹬橥鈺?。

二、研究方法

對腫瘤組織蠟塊行病理學(xué)分級，Twist蛋白表達(dá)采用免疫組化法檢測。細(xì)胞質(zhì)見棕黃色顆粒判斷為Twist蛋白陽性。由2位經(jīng)驗(yàn)豐富的病理科醫(yī)師以雙盲法進(jìn)行閱片，按照染色強(qiáng)度打分，0～3分，分別代表無染色、淡黃、棕黃、棕褐。后結(jié)合陽性細(xì)胞所占百分比進(jìn)行評分，占比0、1%～25%、26%～50%、51%～75%、76%～100% 分別賦值0～4分，計算染色強(qiáng)度與陽性細(xì)胞百分比乘積，達(dá)4分或以上為免疫反應(yīng)陽性。

三、統(tǒng)計學(xué)分析

結(jié) 果

一、不同組織中Twist蛋白表達(dá)分析

Twist蛋白免疫組化染色表現(xiàn)為棕黃色顆粒，呈彌漫性分布(圖1)。癌組織Twist陽性表達(dá)率為66.2%(90/136) vs癌旁肝組織5.9%(5/85)顯著較高(χ2=77.590，P<0.05)。

圖1 Twist陽性染色免疫組化染色(×400)

二、Twist陽性、陰性患者臨床病理參數(shù)差異分析

136例癌組織標(biāo)本中有90例Twist蛋白陽性表達(dá)，46例Twist蛋白陰性表達(dá)。Twist陽性組病理分級為Ⅲ～Ⅳ級、TNM分期為Ⅲ～Ⅳ期、腫瘤細(xì)胞分化程度為低分化、包膜不完整、血管侵襲所占比例顯著高于Twist陰性組(P<0.05)，見表1。

表1 Twist蛋白表達(dá)與肝細(xì)胞癌患者臨床病理 參數(shù)的相關(guān)性(%，±s)分析

三、不同Twist蛋白表達(dá)者預(yù)后分析

Twist陽性、陰性者3年累積生存率分別為57.8%和65.2%，兩組基本相當(dāng)(Log-rank值=2.133，P=0.162，圖2)。

圖2 兩組3年累積生存率比較

討 論

本研究結(jié)果顯示，組織內(nèi)Twist過度表達(dá)可能與肝細(xì)胞癌有關(guān)，與既往報道相符[10]。薛棟等[11]報道發(fā)現(xiàn)，肝癌組織中Twist蛋白陽性表達(dá)率比癌旁肝組織更高。另有報道也證實(shí)Twist在肝細(xì)胞癌中高表達(dá)[12]。Twist表達(dá)可經(jīng)阻斷細(xì)胞分化、對抗凋亡、通過抑制可變閱讀框基因/鼠雙微體2基因/p53途徑而阻抑p53腫瘤抑制通路等途徑誘發(fā)癌癥[13]。筆者認(rèn)為，Twist基因癌基因特性明顯，可經(jīng)多種途徑抑制細(xì)胞凋亡，考慮可能通過抑制E-鈣黏蛋白表達(dá)、誘導(dǎo)上皮細(xì)胞間質(zhì)化來促進(jìn)腫瘤形成、發(fā)展及轉(zhuǎn)移。與Zhao等[14]在胃癌中的研究結(jié)果是一致的，證實(shí)Twist表達(dá)與肝細(xì)胞癌密切相關(guān)。

此外，本研究結(jié)果顯示，Twist陽性組Ⅲ～Ⅳ級病理分級、Ⅲ～Ⅳ期TNM分期、低分化、包膜不完整、血管侵襲所占比明顯較高，提示Twist表達(dá)可用于病情評估。Zhang等[15]報道指出，Twist在肝癌組織中高表達(dá)，與分期、分化程度、血管侵襲等密切相關(guān)，證實(shí)了本結(jié)論。腫瘤進(jìn)展、擴(kuò)散是一系列病理改變的多步驟過程，此過程受激活或抑制、相互拮抗或協(xié)同等影響，推測Twist激活和Twist誘導(dǎo)上皮細(xì)胞間質(zhì)化可能是腫瘤轉(zhuǎn)移的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。此外，有報道顯示，Twist高表達(dá)可能提示肝癌侵襲危險性及不良轉(zhuǎn)歸，因此關(guān)注Twist表達(dá)對肝癌的預(yù)后評估有一定參考意義[16]。本研究中，發(fā)現(xiàn)Twist陽性組患者與陰性組患者3年累積生存率基本相當(dāng)，可能與選取病例數(shù)偏少、觀察時間較短等因素有關(guān)，有待今后深入研究。

綜上，肝細(xì)胞癌患者癌組織Twist表達(dá)與病理學(xué)分級、TNM分期、分化程度、血管侵襲和預(yù)后密切相關(guān)，臨床應(yīng)引起足夠重視。