劉林科，菅憶晨，王占銘，李世杰，王榮軍，寧長(zhǎng)申，張素梅，菅復(fù)春

(河南農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院，河南 鄭州 450046)

近年來，伴隨著我國(guó)人民生活水平的提高，對(duì)羊肉的需求量日益增加，羊養(yǎng)殖數(shù)量也快速增長(zhǎng)[1]。在養(yǎng)殖過程中，各種疫病的發(fā)生常給生產(chǎn)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失，其中寄生蟲感染是影響羊等小型反芻動(dòng)物生產(chǎn)效益的重要因素之一[2]。羊腸道寄生蟲病可引起羊食欲不振、貧血、腹瀉、生長(zhǎng)發(fā)育不良，甚至造成死亡[3]。有些寄生蟲病還能導(dǎo)致母羊妊娠率和后代存活率降低、產(chǎn)品產(chǎn)量及質(zhì)量下降[4]。我國(guó)地域遼闊，羊品種豐富，不同地域、品種羊的腸道寄生蟲感染情況，以及羊?qū)纳x的抵抗力可能存在差異[2]。為了解我國(guó)部分地區(qū)羊春夏季節(jié)腸道寄生蟲流行規(guī)律，對(duì)全國(guó)8個(gè)省寄生蟲感染情況進(jìn)行調(diào)查，以期為有效防控腸道寄生蟲病提供參考，本次調(diào)查選取4大優(yōu)勢(shì)肉羊區(qū)域內(nèi)的河南、江蘇、吉林、遼寧、甘肅、貴州作為主要采樣地，以及海南和青海共8個(gè)省份，涉及13個(gè)品種羊的共472份羊糞樣進(jìn)行檢測(cè)。

1 材料與方法

1.1 樣品收集

2019年4月至7月，對(duì)全國(guó)8個(gè)省16個(gè)地區(qū)的羊采集新鮮糞便樣品，每份樣品20～30 g，收集于潔凈自封袋中，標(biāo)明采集時(shí)間、地點(diǎn)、癥狀等相關(guān)背景信息，共采集樣品472份，每份樣品加入適量2.5%重鉻酸鉀，保存于4 ℃冰箱中備檢。

1.2 樣品檢查方法

每份樣品分別取5 g左右，采用水洗離心沉淀法、盧戈氏碘液染色法和飽和蔗糖溶液漂浮法進(jìn)行檢測(cè)[5]，并使用MoticBA310顯微鏡對(duì)觀察到的卵囊和蟲卵進(jìn)行拍照。

1.3 糞便檢查結(jié)果鑒定

對(duì)鏡檢檢查到的寄生蟲卵囊、包囊、蟲卵等，依據(jù)其形態(tài)結(jié)構(gòu)，參照文獻(xiàn)[5]進(jìn)行種類鑒定。

1.4 球蟲的孢子化培養(yǎng)及蟲種鑒定

參考陶立等[6]的方法，對(duì)黑山羊、波爾山羊和奶山羊的糞便樣品進(jìn)行球蟲卵囊收集和培養(yǎng)，置于4 ℃冰箱保存?zhèn)溆?，并依?jù)形態(tài)進(jìn)行蟲種鑒定[6-9]。

1.5 數(shù)據(jù)分析

數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)采用Pearson卡方檢驗(yàn)，P<0.01表示差異極顯著，P<0.05表示差異顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 羊腸道寄生蟲總體感染情況

對(duì)不同地區(qū)羊腸道寄腸蟲感染情況調(diào)查結(jié)果見表1。

表1 不同地區(qū)羊感染腸道寄生蟲的種類和感染率

本次調(diào)查的472份羊糞便樣品中，腸道寄生蟲總感染率為85.38%(403/472)，共檢測(cè)到球蟲、阿米巴、線蟲、絳蟲4類寄生蟲的卵囊、包囊或蟲卵，感染率分別為68.86%(325/472)、44.49%(210/472)、29.24%(138/472)、1.91%(9/472)。

2.2 腸道寄生蟲混合感染情況

在472份樣品中，共403份樣品檢測(cè)出寄生蟲，其中單種病原感染率為38.98%(184/472)。2種寄生蟲混合感染率為35.38%(167/472)，3種寄生蟲混合感染率為10.38%(49/472)，4種寄生蟲混合感染率為0.64%(3/472)，總混合感染率為46.40%(219/472)。

2.3 不同品種羊腸道寄生蟲感染情況

在13個(gè)品種的羊中，黑山羊、波爾山羊、絨山羊、金堂山羊、努比亞山羊、撒能奶山羊、夏洛萊綿羊7種羊的球蟲感染率在80.00%以上。黑山羊、槐山羊、奶山羊、細(xì)毛羊、美利奴綿羊4種羊的線蟲感染率在40.00%以上。絳蟲只在白山羊，黑山羊，波爾山羊，奶山羊，湖羊5種羊中被檢測(cè)到。絨山羊和夏洛萊綿羊的球蟲感染率高達(dá)80.00%以上，但沒有檢測(cè)到線蟲。金堂山羊和努比亞山羊100.00%球蟲感染率的同時(shí)，線蟲感染率很低，分別只有10.00%和13.79%。

表2 不同品種羊感染腸道寄生蟲感染情況

2.4 不同性別羊腸道寄生蟲感染情況

對(duì)雌雄間的不同腸道寄生蟲感染率進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，結(jié)果見表3。母羊和公羊的球蟲感染率分別為77.78%(210/270)和30.91%(17/55)，母羊球蟲感染率高于公羊，差異極顯著(P<0.01)。母羊和公羊的絳蟲感染率分別為0.74%(2/270)和5.45%(3/55)，母羊絳蟲感染率低于公羊，差異顯著(P<0.05)。母羊和公羊見阿米巴原蟲和線蟲的感染率差異不明顯(P>0.05)。

表3 不同性別羊腸道寄生蟲感染情況

2.5 寄生蟲種類鑒定

在472份樣品中共檢測(cè)到4種線蟲，1種絳蟲。線蟲分別為細(xì)頸線蟲0.21%(1/472)、毛首線蟲3.39%(16/472)、類圓線蟲27.12%(128/472)、毛細(xì)線蟲0.21%(1/472)，絳蟲為擴(kuò)展莫尼茨絳蟲1.91%(9/472)。對(duì)阿米巴原蟲未定種。在波爾山羊、黑山羊、奶山羊的樣品中共檢測(cè)到10種艾美耳球蟲(見圖1)。

A.毛首線蟲蟲卵(400×)；B.細(xì)頸線蟲蟲卵(200×)；C.毛細(xì)線蟲蟲卵(400×)；D.類圓線蟲蟲卵(400×)；E.擴(kuò)展莫尼茨絳蟲蟲卵(400×)；F.阿米巴原蟲包囊(1 000×)；G.阿氏艾美耳球蟲(1 000×)；H.未孢子化球蟲卵囊(1 000×)；I.艾麗艾美耳球蟲(1 000×)；J.蒼白艾美耳球蟲(1 000×)；K.斑點(diǎn)艾美耳球蟲(1 000×)；L.家山羊艾美耳球蟲(1 000×)；M.山羊艾美耳球蟲(1 000×)；N.阿撒他艾美耳球蟲(1 000×)；O.羊艾美耳球蟲(1 000×)；P.顆粒艾美耳球蟲(1 000×)；Q.克氏艾美耳球蟲(1 000×)圖1 本次調(diào)查發(fā)現(xiàn)的寄生蟲卵囊、包囊和蟲卵

3種山羊感染球蟲的種類及感染率詳見表4。波爾山羊中發(fā)現(xiàn)的球蟲種類豐富(10種)，其中阿氏和阿薩他艾美耳球蟲為優(yōu)勢(shì)蟲種，其次是山羊、艾麗、家山羊、克氏、顆粒艾美耳球蟲，感染比例較少的為蒼白、斑點(diǎn)和羊艾美耳球蟲。而海南黑山羊感染球蟲有7種，優(yōu)勢(shì)種類分別是艾麗、阿薩他、克氏艾美耳球蟲。薩能奶山羊共感染6種球蟲，其中羊、艾麗、山羊艾美耳球蟲為優(yōu)勢(shì)種類。

表4 3種山羊球蟲種類分布及感染率

3 討論

3.1 羊腸道寄生蟲感染情況分析

本次調(diào)查中羊腸道寄生蟲總感染率為85.38%(403/472)。與景紀(jì)春等[10]對(duì)河南地區(qū)舍飼湖羊腸道寄生蟲的調(diào)查結(jié)果(97.47%)，蔡為民等[11]對(duì)江蘇地區(qū)19個(gè)羊場(chǎng)羊腸道寄生蟲的調(diào)查結(jié)果(90.32%)，以及李夢(mèng)婕等[12]對(duì)河南、吉林、遼寧和山東地區(qū)羊腸道寄生蟲的調(diào)查結(jié)果(97.2%)相比，本研究結(jié)果的感染率較低。與唐莉等[13]對(duì)安徽省、河南省、江蘇省和山東省部分地區(qū)羊腸道寄生蟲的報(bào)道(54.99%)，以及張艷艷等[14]對(duì)新疆規(guī)模化舍飼羊場(chǎng)羊腸道寄生蟲的調(diào)查結(jié)果(69.28%)相比，本研究結(jié)果相對(duì)較高。在混合感染方面，本次調(diào)查總混合感染率為42.58%(201/472)，與景紀(jì)春[10]、蔡為民[11]、李夢(mèng)婕等[12]的報(bào)道相比較低。表明我國(guó)不同地區(qū)羊腸道寄生蟲感染情況雖有差別，但整體上羊腸道寄生蟲感染率依然很高，混合感染情況普遍。

此外，本研究共調(diào)查了16個(gè)地區(qū)的羊場(chǎng)，其中的12個(gè)地區(qū)羊場(chǎng)的羊腸道寄生蟲感染率均在80%及以上，甘肅武威0(0/3)、江蘇南通66.67%(8/12)、江蘇徐州54.63%(59/108)、青海共和66.67%(2/3)的感染率較低。其中甘肅武威和青海共和的樣品量較小，不足以代表總體的感染情況，還需進(jìn)一步研究完善該地區(qū)的調(diào)查數(shù)據(jù)。江蘇徐州羊場(chǎng)在平時(shí)并未做過驅(qū)蟲，但其寄生蟲感染率卻相對(duì)較低，這可能與其高架床養(yǎng)殖模式有關(guān)。張宇新等[15]的報(bào)道也顯示了高架床養(yǎng)殖的感染率61.34%(73/119)明顯低于平地放養(yǎng)98.54%(135/137)，兩者差異極顯著。這說明高架床養(yǎng)殖模式有利于羊腸道寄生蟲的防控，應(yīng)積極推廣。

馬來西亞的調(diào)查結(jié)果顯示，其球蟲病患病率為89.2%，胃腸道線蟲病患病率為52.3%[16]。韓國(guó)的報(bào)道顯示其羊腸道寄生蟲感染率為69.3%[17]。巴西帕拉伊巴報(bào)道的羊腸道寄生蟲感染率為75.9%[18]。說明羊腸道寄生蟲感染在不同地理環(huán)境，不同發(fā)展程度的國(guó)家都普遍存在，是全國(guó)乃至全球羊養(yǎng)殖業(yè)面臨的一個(gè)挑戰(zhàn)。

3.2 羊腸道寄生蟲優(yōu)勢(shì)蟲種

本次調(diào)查結(jié)果顯示，球蟲仍為羊腸道寄生蟲的優(yōu)勢(shì)蟲種，且在羔羊中最為嚴(yán)重。與張艷艷等[14]報(bào)道結(jié)果相一致。中國(guó)東北黑龍江省綿羊球蟲感染率為92.9%，山羊?yàn)?7.9%[19]。羔羊的球蟲感染強(qiáng)度和患病率顯著高于成年羊。本次調(diào)查對(duì)部分羊場(chǎng)羊的球蟲感染強(qiáng)度進(jìn)行了半定量分析，發(fā)現(xiàn)22份高感染強(qiáng)度樣品中有18份為羔羊。這與羔羊易感性高、抵抗力低，且容易被帶蟲母羊傳染有關(guān)。目前研究已證實(shí)，球蟲病會(huì)引起羊只腹瀉進(jìn)而導(dǎo)致增重遲緩，給養(yǎng)殖場(chǎng)帶來潛在的經(jīng)濟(jì)損失。羔羊感染球蟲后，卵囊排出在斷奶期前后達(dá)到高峰，隨后由于宿主免疫功能的增強(qiáng)而逐漸減少[20]，這也對(duì)本研究的結(jié)果做出了合理的解釋。因此，要關(guān)注妊娠母羊的球蟲防控，以防止母子傳播。羔羊球蟲嚴(yán)重感染的危險(xiǎn)因素包括：養(yǎng)殖密度大、衛(wèi)生條件差和生理、營(yíng)養(yǎng)等應(yīng)激因素[20]。在當(dāng)下集約化養(yǎng)殖條件下，隨著養(yǎng)殖密度加大，球蟲病也隨之高發(fā)，養(yǎng)殖場(chǎng)應(yīng)注意避免這些不利因素，并采取對(duì)產(chǎn)前母羊用藥驅(qū)蟲和哺乳期驅(qū)蟲等措施，減少羔羊染蟲率。

除球蟲外，線蟲也是反芻動(dòng)物生產(chǎn)的主要限制因素之一，它們能夠引起羊只骨骼生長(zhǎng)遲緩、體重減輕和產(chǎn)奶量減少[21]。胃腸道線蟲感染在全球羊養(yǎng)殖中也具有重要的經(jīng)濟(jì)意義，而山羊與線蟲相互作用的特殊性可能影響胃腸道線蟲的防治策略。山羊獲得和表達(dá)針對(duì)胃腸道線蟲免疫反應(yīng)的效率都比綿羊低，因此山羊比綿羊?qū)€蟲更易感[22]。本次調(diào)查結(jié)果顯示，山羊的線蟲感染率為33.81%(119/352)，綿羊的為15.83%(19/120)，差異極顯著，這與之前的研究結(jié)果是相一致的。因此，對(duì)山羊和綿羊的線蟲防控要區(qū)別對(duì)待，山羊的線蟲治理需要更加詳細(xì)，規(guī)范的用藥程序，用藥前后需進(jìn)行荷蟲量監(jiān)測(cè)，以便做好藥效評(píng)價(jià)，為下次驅(qū)蟲工作提供參考。

3.3 不同品種羊腸道寄生蟲感染情況

3.3.1 不同品種羊腸道寄生蟲感染差異

本次調(diào)查結(jié)果中，絨山羊和夏洛萊綿羊的球蟲感染率高達(dá)80%以上，但卻沒有檢測(cè)到線蟲。金堂山羊和努比亞山羊球蟲感染率100%的同時(shí)，線蟲感染率卻很低。這可能提示了不同品種羊?qū)Σ煌纳x有著不同程度的抗性。絳蟲只在白山羊、黑山羊、波爾山羊、奶山羊、湖羊5種羊中被檢測(cè)到，這可能與本次調(diào)查的羊場(chǎng)大部分都為舍飼飼養(yǎng)有關(guān)。李夢(mèng)婕等-[12]報(bào)道顯示，舍飼羊群與放牧羊群相比不易感染絳蟲，和本次調(diào)查結(jié)果一致。13個(gè)品種中只有白山羊56.41%(22/39)和湖羊52%(39/75)寄生蟲總感染率較低，上述樣品來自于江蘇省徐州市同一家養(yǎng)殖場(chǎng)，這可能與該場(chǎng)飼養(yǎng)管理和寄生蟲防控水平較高有關(guān)。

目前關(guān)于宿主對(duì)寄生蟲抗性差異的信息很少，了解這些將有助于設(shè)計(jì)更合理的控制程序。Haile等[2]的研究表明，當(dāng)?shù)匮虻木€蟲抗性可能是由于該地區(qū)農(nóng)業(yè)生態(tài)的變化，導(dǎo)致線蟲蟲卵的發(fā)育、存活和自由生活階段的適宜性發(fā)生了變化，同時(shí)也可能是不同品種的宿主在第一次接觸病原時(shí)，能夠產(chǎn)生有效的保護(hù)性免疫反應(yīng)導(dǎo)致的。羊的品種與寄生蟲抗性之間的關(guān)系尚需要更多的試驗(yàn)來證實(shí)。

3.3.2 不同品種山羊感染的艾美耳球蟲蟲種差異

綜合本研究和其他研究結(jié)果，不同地域山羊的優(yōu)勢(shì)艾美耳球蟲種共有11種，常見的種類有阿氏、艾麗、克氏艾美耳球蟲，但其中無一為所有山羊都感染的種類，說明不同地域和山羊品種間感染艾美耳球蟲種類差異可能與其地勢(shì)、氣候和降雨量等差異有關(guān)，除此之外，也可能受飼料搭配和用藥情況等多種因素影響[6，9，23-24]。蔣維東等[25]的報(bào)道顯示，綿羊感染的球蟲種類存在地理分布差異，但同一飼養(yǎng)條件和環(huán)境中，不同品種綿羊球蟲感染種類分布差異不大。目前需要做進(jìn)一步分子流行病學(xué)調(diào)查和動(dòng)物感染試驗(yàn)，來揭示羊與不同種類球蟲之間是否存在宿主-球蟲的特異性和抗性關(guān)系。

3.4 不同性別羊腸道寄生蟲感染情況

本次調(diào)查顯示，母羊羊腸道寄生蟲總感染率為88.52%(239/270)，公羊?yàn)?3.64%(35/55)，差異極顯著。母羊球蟲感染率為77.78%(210/270)，公羊?yàn)?0.91%(17/55)，差異極顯著。景紀(jì)春等[10]報(bào)道，湖羊母羊和公羊的寄生蟲總感染率分別為97.44%和97.52%，二者無顯著差異。Mohamaden等[26]報(bào)道，埃及蘇伊士地區(qū)球蟲感染率雌性羊?yàn)?5.22%(105/161)，雄性羊?yàn)?7.5%(57/120)，差異極顯著。這與本次結(jié)果相一致，顯示了公羊?qū)η蛳x具有更強(qiáng)的抵抗力。公母羊線蟲的感染率沒有顯著差異，但雄性感染率略低于雌性，這與Haile等[2]的報(bào)道一致。但也有研究認(rèn)為，母羊比公羊?qū)€蟲更有更強(qiáng)的抵抗力[27]。線蟲感染與羊的性別是否存在相關(guān)性還需進(jìn)一步研究確認(rèn)。絳蟲感染率在雌雄間差異顯著，但目前相關(guān)報(bào)道較少。阿米巴感染率在雌雄間無顯著差異。

4 總結(jié)

總之，本次研究發(fā)現(xiàn)我國(guó)羊腸道寄生蟲感染率高，混合感染情況普遍，這與國(guó)外羊腸道寄生蟲感染情況相一致。腸道寄生蟲的流行給羊養(yǎng)殖業(yè)帶來重大的潛在經(jīng)濟(jì)損失，是養(yǎng)殖場(chǎng)需要關(guān)注和亟待解決的問題。本調(diào)查結(jié)果為羊場(chǎng)腸道寄生蟲的精準(zhǔn)防控提供了基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。