趙 琪, 何長(zhǎng)海, 王 志, 王雪峰, 劉曉飛

（河南省南陽(yáng)市第一人民醫(yī)院泌尿外科，河南 南陽(yáng) 473010）

DNA 甲基化修飾與腫瘤的發(fā)生與進(jìn)展密切相關(guān)［1］。 烷 基 化 修 復(fù) 同 源 體3 （alkylation repair homolog 3，ALKBH3） 能以細(xì)胞特異性方式去甲基 化 并 修 復(fù)DNA 甲 基 化 損 傷［2-3］。DANGO 等［4］發(fā)現(xiàn)：ALKBH3 可通過激活信號(hào)輔整合素1 復(fù)合體亞 基3 （activating signal cointegrator 1 complex subunit 3，ASCC3）解開DNA 雙鏈來識(shí)別烷基化損傷單鏈DNA 并修復(fù)受損的DNA；而ALKBH3失活可抑制腫瘤細(xì)胞增殖。已有研究［5-8］表明：ALKBH3 在頭頸癌、乳腺癌、前列腺癌和尿路上皮癌等多種腫瘤組織中特異性高表達(dá)，且其上調(diào)表達(dá)能促進(jìn)腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)、遷移和侵襲，而ALKBH3在膀胱癌中的作用和機(jī)制尚不清楚。因此，本研究探討ALKBH3 在膀胱癌中的表達(dá)及其對(duì)膀胱癌細(xì)胞生長(zhǎng)、轉(zhuǎn)移和血管新生的影響，旨在為膀胱癌的治療提供新的靶點(diǎn)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物、細(xì)胞、主要試劑和儀器12 只6 周齡SPF 級(jí)雄性BALB/c 裸鼠購(gòu)自河南省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK（豫）2017-0001。人正常膀胱細(xì)胞系（SV-HRUC-1）和人膀胱癌細(xì)胞系（BIU87 和T24）購(gòu)自美國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心， 人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（human umbilical vein endothelial cells，HUVEC） 和內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)基購(gòu)自武漢普諾賽生命科技有限公司。胎牛血清和RPMI-1640 培養(yǎng)基購(gòu)自美國(guó)Gibco 公司，小鼠抗人血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子A （vascular endothelial growth factor-A，VEGF-A）、ALKBH3、CD31和GAPDH抗體購(gòu)自美國(guó)Santa Cruz Biotech 公司，RIPA 裂解液、ECL 發(fā)光液、CCK-8 試劑盒和HRP 綴合的抗小鼠IgG 二抗購(gòu)自武漢純度生物科技有限公司，攜帶sh-ALKBH3 和陰性對(duì)照（sh-Con）的慢病毒載體購(gòu)自上海漢恒生物科技有限公司。BX5 型倒置熒光顯微鏡（日本Olympus 公司），Elx800 型酶標(biāo)儀（美國(guó)Bio-Tek 公司）。

1.2 患者組織樣本收集收集2016 年10 月－2017 年10 月河南省南陽(yáng)市第一人民醫(yī)院泌尿外科行經(jīng)尿道切除術(shù)或根治性切除術(shù)的16 例膀胱上皮細(xì)胞癌患者（經(jīng)病理學(xué)確診）的癌組織和癌旁組織樣本，采用蛋白質(zhì)印跡法和免疫組織化學(xué)法檢測(cè)ALKBH3 表達(dá)水平。所有患者均為男性；年齡45～64 歲，平均年齡（52.5±4.3） 歲；T 分期：T1期6 例，T2期8 例，T3期2 例。所有患者均未接受放療、化療和生物治療。本研究經(jīng)過本院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，并獲得了所有患者的知情同意。

1.3 細(xì)胞培養(yǎng)SV-HRUC-1、BIU87 和T24 細(xì)胞常規(guī)培養(yǎng)在含有10%胎牛血清的RPMI-1640 中。HUVEC 常規(guī)培養(yǎng)在含有20%胎牛血清的內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)基中。

1.4 細(xì)胞分組和處理采用蛋白質(zhì)印跡法檢測(cè)SV-HRUC-1、BIU87 和T24 細(xì) 胞 中ALKBH3 表 達(dá)水平后，取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的BIU87 和T24 細(xì)胞分為sh-ALKBH3 組和sh-Con 組，并分別鋪到24 孔細(xì)胞培養(yǎng)板（1×105個(gè)/孔）中，待細(xì)胞貼壁后，加入2 mL 含有6 mg·L－1聚凝胺的無(wú)血清培養(yǎng)基，然后分別加入感染復(fù)數(shù)（multiplicity of infection，MOI）為30 的sh-ALKBH3 （sh-ALKBH3 組） 或sh-Con（sh-Con 組）病毒懸液，繼續(xù)培養(yǎng)48 h，采用蛋白質(zhì)印跡法檢測(cè)sh-ALKBH3 干擾效率后，收集細(xì)胞用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

1.5 CCK-8法檢測(cè)各組細(xì)胞活性取sh-ALKBH3 組和sh-Con 組BIU87 和T24 細(xì)胞，分別置于96 孔細(xì)胞培養(yǎng)板中（5×103個(gè)/孔），再分別培養(yǎng)24、48 和72 h 后，每 孔 加 入10 μL CCK-8 試 劑 并 孵 育3 h，隨后采用酶標(biāo)儀測(cè)量波長(zhǎng)450 nm 處的吸光度（A）值。實(shí)驗(yàn)重復(fù)4 次，再根據(jù)A 值的平均值繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線。細(xì)胞活性以A 值的平均值表示。

1.6 集落形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)各組細(xì)胞集落數(shù)取sh-ALKBH3 組和sh-Con 組BIU87 和T24 細(xì)胞，分別置于24孔細(xì)胞培養(yǎng)板中（200個(gè)/孔），分別培養(yǎng)7 d 后，采用吉姆薩染色法進(jìn)行染色，并對(duì)集落進(jìn)行計(jì)數(shù)。實(shí)驗(yàn)重復(fù)4次，細(xì)胞集落數(shù)以4次的平均值表示。

1.7 Transwell 小室實(shí)驗(yàn)檢測(cè)各組遷移細(xì)胞數(shù)和侵襲細(xì)胞數(shù)采用8 μm 孔徑的聚碳酸酯膜Transwell板和人工基質(zhì)膠涂覆膜Transwell 板（美國(guó)Corning Costar 公司）分別測(cè)定膀胱癌細(xì)胞的遷移和侵襲能力。取sh-ALKBH3 組 和sh-Con 組BIU87 和T24 細(xì)胞分別重懸于無(wú)血清RPMI-1640 培養(yǎng)基中，并制成細(xì)胞密度為4×105mL－1的細(xì)胞懸液。然后，將100 μL 細(xì)胞懸液接種在頂室中，同時(shí)，將700 μL含10%胎牛血清的RPMI-1640 培養(yǎng)基加入底室。在37 ℃下培養(yǎng)24 h 后，用棉簽徹底除去頂室膜上表面的細(xì)胞，用4%多聚甲醛固定頂室膜下表面的細(xì)胞，采用結(jié)晶紫溶液染色，然后采用BX5 奧林巴斯顯微鏡明視場(chǎng)捕獲細(xì)胞圖像，并隨機(jī)從5 個(gè)視野中計(jì)數(shù)遷移或侵襲的細(xì)胞數(shù)量。實(shí)驗(yàn)重復(fù)4次，遷移細(xì)胞數(shù)或侵襲細(xì)胞數(shù)以4次實(shí)驗(yàn)的平均值表示。

1.8 Transwell 小室實(shí)驗(yàn)檢測(cè)各組招募HUVEC 遷移 數(shù)取sh-ALKBH3 組 和sh-Con 組BIU87 和T24 細(xì)胞，置于24 孔細(xì)胞培養(yǎng)板中（3×105個(gè)/孔），采用含10%胎牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)基常規(guī)培養(yǎng)24 h 后，收集培養(yǎng)基。分別取100 μL 用無(wú)血清RPMI-1640 培 養(yǎng) 基 配 制 的HUVEC 懸 液（5×104mL—1） 接種在Transwell 板（孔徑8 μm） 頂室中，同時(shí)，將700 μL 上述收集的培養(yǎng)基加入底室，常規(guī)培養(yǎng)24 h。Transwell 小室實(shí)驗(yàn)的后續(xù)處理方法同“1.7”。

1.9 小管形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)各組誘導(dǎo)HUVEC 小管形成 率取sh-ALKBH3 組 和sh-Con 組BIU87 和T24 細(xì)胞，置于24 孔細(xì)胞培養(yǎng)板中（3×105個(gè)/孔），用含10%胎牛血清的RPMI-1640 培養(yǎng)基常規(guī)培養(yǎng)24 h 后，收集培養(yǎng)基。取HUVEC 接種到人工基質(zhì)膠涂覆的24 孔細(xì)胞培養(yǎng)板中（5×103個(gè)/孔），采用上述收集的培養(yǎng)基常規(guī)培養(yǎng)12 h后，采用4%的多聚甲醛固定細(xì)胞，然后用BX5 奧林巴斯顯微鏡明視場(chǎng)捕獲細(xì)胞圖像并對(duì)形成的管狀結(jié)構(gòu)計(jì)數(shù)。實(shí)驗(yàn)重復(fù)4 次。小管形成率=sh-ALKBH3 組小管數(shù)/sh-Con 組小管數(shù)×100%。

1.10 異種移植腫瘤模型裸鼠飼養(yǎng)在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物樓SPF 級(jí)動(dòng)物房（溫度22 ℃～25 ℃，濕度55%～65%，晝夜12 h 循環(huán)），小鼠可隨意獲取水和標(biāo)準(zhǔn)鼠食。 小鼠適應(yīng)飼養(yǎng)1 周后，隨機(jī)分成sh-ALKBH3 組和sh-Con 組，每組6 只，并分別在對(duì)應(yīng)組別小鼠右肋腹皮下接種7×106個(gè)已轉(zhuǎn)染sh-ALKBH3 或sh-Con 的BIU87 細(xì)胞。每隔9 d 用游標(biāo)卡尺測(cè)量腫瘤的長(zhǎng)度和寬度，計(jì)算腫瘤體積。腫瘤體積（V）=0.5×長(zhǎng)度×寬度2。在第36 天對(duì)小鼠實(shí)施安樂死并收集瘤體進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

1.11 蛋白質(zhì)印跡法檢測(cè)各組細(xì)胞和組織中ALKBH3 和VEGF-A 蛋白表達(dá)水平采用RIPA 裂解各組細(xì)胞、臨床樣本組織和異種移植腫瘤模型中瘤體組織并提取蛋白。蛋白經(jīng)BCA 法定量后，取等量的蛋白上樣進(jìn)行SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳。電泳結(jié)束后，將分離的蛋白電轉(zhuǎn)到PVDF 膜，然后采用5%脫脂乳封閉PVDF 膜上蛋白，室溫孵育一抗 （ALKBH3和VEGF-A， 1∶1 000 稀 釋；GAPDH，1∶5 000 稀釋） 2 h，然后用TBST 洗PVDF 膜3 次，每次5 min；室溫孵育1∶1 000 稀釋的HRP 綴合的抗小鼠IgG 二抗45 min，再次用TBST 洗PVDF 膜3 次，每次10 min。采用ECL 發(fā)光液使目的蛋白條帶顯像，實(shí)驗(yàn)重復(fù)4 次。采用Image J 軟件分析目的蛋白條帶灰度值，計(jì)算目的蛋白表達(dá)水平。目的蛋白表達(dá)水平=目的蛋白條帶灰度值/GAPDH 條帶灰度值×100%。

1.12 免疫組織化學(xué)檢測(cè)不同組織中ALKBH3 和CD31 蛋白表達(dá)將膀胱癌組織、癌旁組織和異種移植腫瘤模型中瘤體組織制成石蠟包埋組織，然后切成厚度5 μm 的切片。切片經(jīng)脫石蠟和梯度分級(jí)乙醇中再水合后，通過加熱組織切片以完成抗原修復(fù)。為阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，將切片在室溫下浸入含0.3%過氧化氫的無(wú)水甲醇溶液中10 min，并在新鮮PBS 緩沖液中洗滌3 次，每次5 min。用封閉液封閉后，膀胱癌組織和癌旁組織與1∶200 稀釋的ALKBH3 抗體在4 ℃溫育過夜，異種移植腫瘤模型中瘤體組織與1∶300 稀釋的CD31 抗體在4 ℃溫育過夜，并將切片在PBS 緩沖液中洗滌3 次，每次5 min。室溫孵育二抗45 min，采用PBS 緩沖液再次洗滌切片后，顯色液顯色，蘇木精復(fù)染，乙醇脫水，二甲苯澄清，采用BX5 奧林巴斯顯微鏡明視場(chǎng)拍照，采用Image J 軟件分析ALKBH3 和CD31蛋白條帶灰度值，以灰度值表示目的蛋白表達(dá)水平。

1.13 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用SPSS 17.0 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。采用Shapiro-Wilk 檢驗(yàn)法驗(yàn)證各組數(shù)據(jù)的正態(tài)分布情況。各組ALKBH3 和VEGF-A 蛋白表達(dá)水平、細(xì)胞活性、遷移細(xì)胞數(shù)、侵襲細(xì)胞數(shù)、招募HUVEC 遷移數(shù)、誘導(dǎo)HUVEC 小管形成率、瘤體體積以及瘤體內(nèi)CD31 灰度值均符合正態(tài)分布，以±s 表示，2 組樣本均數(shù)比較采用兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，多組間樣本均數(shù)比較采用單因素方差分析，細(xì)胞活性比較采用兩因素方差分析。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 在不同組織和細(xì)胞中ALKBH3 蛋白表達(dá)水平與癌旁組織（123.65%±14.23%） 比較，膀胱上皮細(xì)胞癌組織中ALKBH3 蛋白免疫組織化學(xué)染色灰度值（706.18%±86.42%）明顯升高（t=14.608，P＜0.01）。 與 癌 旁 組 織（102.32%±11.04%）比較，膀胱上皮細(xì)胞癌組織中ALKBH3蛋白表達(dá)水平（412.36%±45.27%） 明顯升高（t=10.315，P＜0.01）。SV-HRUC-1、BIU87 和T24細(xì)胞中ALKBH3蛋白表達(dá)水平分別為（104.48±5.86）% 、（432.56±56.83）%和（526.87±47.36）%，與SV-HRUC-1 細(xì)胞比較，BIU87 和T24 細(xì)胞中ALKBH3 蛋白表達(dá)水平明顯升高（P＜0.01）。見圖1～3。

圖1 不同組織中ALKBH3 蛋白免疫組織化學(xué)染色結(jié)果（×400）Fig. 1 Results of immunohistochemical staining of ALKBH3 protein in different tissues（×400）

圖2 不同組織中ALKBH3 蛋白表達(dá)電泳圖Fig. 2 Electrophoregram of ALKBH3 protein in different tissues

2.2 2 組BIU87 和T24 細(xì) 胞 的sh-ALKBH3干擾效率sh-ALKBH3 干擾效率檢測(cè)結(jié)果顯示： 與sh-Con 組比較，sh-ALKBH3 組BIU87 和T24 細(xì)胞中ALKBH3 蛋白表達(dá)水平均明顯降低（P＜0.01）。見圖4 和5。

圖3 不同細(xì)胞中ALKBH3 蛋白表達(dá)電泳圖Fig. 3 Electrophoregram of ALKBH3 protein in different cells

圖4 2 組BIU87 和T24 細(xì)胞中ALKBH3 蛋白表達(dá)電泳圖Fig. 4 Electrophoregram of ALKBH3 protein in BIU87 and T24 cells in two groups

圖5 2 組BIU87 和T24 細(xì)胞中ALKBH3 蛋白表達(dá)水平Fig. 5 Expression levels of ALKBH3 protein in BIU87 and T24 cells in two groups

2.3 2 組BIU87 和T24 細(xì)胞活性與sh-Con 組比較，sh-ALKBH3 組BIU87 和T24 細(xì)胞活性均明顯降低（P＜0.01）。見圖6。

2.4 2 組BIU87 和T24 細(xì)胞集落數(shù)與sh-Con 組比較，sh-ALKBH3 組BIU87 和T24 細(xì)胞集落數(shù)均明顯降低（P＜0.01）。見圖7 和8。

圖6 2 組BIU87 和T24 細(xì)胞活性Fig.6 Viabilities of BIU87 and T24 cells in two groups

圖7 2 組BIU87 和T24 細(xì)胞的集落形成（吉姆薩）Fig. 7 Colony formation of BIU87 and T24 cells in two groups(Giemsa)

圖8 2 組BIU87 和T24 細(xì)胞的集落數(shù)Fig. 8 Colony number of BIU87 and T24 cells in two groups

2.5 2 組BIU87 和T24 細(xì)胞遷移數(shù)和侵襲數(shù)與sh-Con 組比較，sh-ALKBH3組BIU87和T24細(xì)胞的遷移數(shù)和侵襲數(shù)均明顯減少（P＜0.01）。見圖9和10。

2.6 2 組BIU87 和T24細(xì)胞招募HUVEC遷移數(shù)與sh-Con 組 比 較，sh-ALKBH3 組BIU87 和T24細(xì)胞培養(yǎng)基中HUVEC 遷移數(shù)均明顯降低（P＜0.01）。見圖11 和12。

2.7 2 組BIU87和T24細(xì)胞誘導(dǎo)的HUVEC小管形成率與sh-Con 組比較，sh-ALKBH3 組BIU87和T24 細(xì)胞培養(yǎng)基中HUVEC 小管形成率均明顯降低（P＜0.01）。見圖13 和14。

2.8 2 組BIU87 和T24 細(xì)胞中VEGF-A 蛋白表達(dá)水平與sh-Con 組比較，sh-ALKBH3 組BIU87 和T24 細(xì)胞中VEGF-A 蛋白表達(dá)水平均明顯降低（P＜0.01）。見圖15 和16。

2.9 2 組荷瘤裸鼠模型中瘤體體積、血管生成和VEGF-A 蛋白表達(dá)水平與sh-Con 組比較，sh-ALKBH3 組BIU87 細(xì)胞形成的瘤體體積明顯縮?。≒＜0.01），并且瘤體生長(zhǎng)速度明顯減緩。采用內(nèi)皮標(biāo)記物CD31 抗體的免疫組織化學(xué)染色法評(píng)估腫瘤異種移植物的血管生成， 結(jié)果顯示：sh-ALKBH3 組細(xì)胞建立的異種移植瘤中CD31 蛋白的免疫組織化學(xué)染色灰度值明顯低于sh-Con 組（P＜0.01）；sh-ALKBH3 組瘤體組織中VEGF-A蛋白表達(dá)水平明顯低于 sh-Con 組 （P＜0.01）。見 圖17～21。

3 討 論

膀胱癌是常見的泌尿系腫瘤，且其發(fā)病率呈增高趨勢(shì)［9］。雖然大多數(shù)（75%～85%）膀胱癌可經(jīng)尿道膀胱腫瘤切除術(shù)治療，但其5 年復(fù)發(fā)率高達(dá)75%，且5 年生存率不足60%［10-11］，造成這一現(xiàn)象的主要原因?yàn)榘螂装┑霓D(zhuǎn)移以及繼發(fā)性腫瘤的形成［12］。目前，雖然對(duì)膀胱癌生長(zhǎng)與轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制進(jìn)行了大量研究，但影響膀胱癌生長(zhǎng)與轉(zhuǎn)移的關(guān)鍵基因仍不完全清楚。而尋找影響膀胱癌生長(zhǎng)與轉(zhuǎn)移的關(guān)鍵基因靶點(diǎn)能為今后膀胱癌診斷和治療策略的制定提供重要的參考依據(jù)。目前，已有文獻(xiàn)［5-8］報(bào)道ALKBH3 在多種腫瘤組織中特異性高表達(dá)，且其上調(diào)表達(dá)能促進(jìn)腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)、遷移與侵襲，但ALKBH3 在膀胱癌中的作用和機(jī)制尚不清楚。本研究結(jié)果顯示：敲低ALKBH3 能在體外抑制膀胱癌細(xì)胞生長(zhǎng)、遷移與侵襲，在體內(nèi)抑制異種移植瘤生長(zhǎng)，提示下調(diào)ALKBH3 表達(dá)可能是治療膀胱癌的潛在策略。

圖9 2 組BIU87 和T24 細(xì)胞遷移和侵襲情況（結(jié)晶紫，×200）Fig.9 Migration and invasion of BIU87 and T24 cells in two groups（Crystal violet，×200）

圖10 2 組BIU87 和T24 細(xì)胞遷移數(shù)和侵襲數(shù)Fig. 10 Number of migration and invasion BIU87 and T24 cells in two groups

圖13 2 組BIU87 和T24 細(xì)胞誘導(dǎo)HUVEC 的小管形成情況（×200）Fig.13 Tube formation of HUVEC induced by BIU87 and T24 cells in two groups（×200）

為探索敲低ALKBH3 抑制膀胱癌細(xì)胞生長(zhǎng)與轉(zhuǎn)移的機(jī)制，本研究進(jìn)一步研究了敲低ALKBH3對(duì)腫瘤血管生成的影響。腫瘤的生長(zhǎng)依賴于生成的血管輸送氧氣和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)［13-14］，另外，腫瘤血管生成還是腫瘤遠(yuǎn)端轉(zhuǎn)移的必要條件［15-16］，因此，腫瘤血管生成對(duì)腫瘤的生長(zhǎng)與轉(zhuǎn)移起著至關(guān)重要的作用。本研究結(jié)果顯示：敲低ALKBH3 在體外抑制膀胱癌細(xì)胞招募HUVEC 并使其誘導(dǎo)HUVEC 形成管腔狀結(jié)構(gòu)的能力降低，且在體內(nèi)能降低新生血管密度，說明敲低ALKBH3 能抑制腫瘤血管生成。血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（vascular endothelial growth factor，VEGF） 是腫瘤微血管生成過程中關(guān)鍵的促進(jìn)因子，其有助于惡性腫瘤的高度血管化并促進(jìn)腫 瘤 進(jìn) 展［17-18］。其 中VEGF-A 是VEGF 家 族 中 重要的成員之一，腫瘤細(xì)胞分泌的VEGF-A 可通過結(jié)合臨近血管內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)的VEGF 受體2（VEGFR2） 來 啟 動(dòng) 腫 瘤 血 管 生 成［19］。研 究［20-21］顯示：抑制VEGF-A 可降低多種腫瘤的血管形成、生長(zhǎng)、遷移和侵襲。本研究結(jié)果顯示：敲低ALKBH3 抑制腫瘤微血管生成的機(jī)制之一是其下調(diào)VEGF-A 表達(dá)。ALKBH3 是否直接或間接控制VEGF 轉(zhuǎn)錄，這仍需要進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)加以闡明。

圖14 2 組BIU87 和T24 細(xì)胞誘導(dǎo)HUVEC 的小管形成率Fig.14 Tubule formation rates of HUVEC induced by BIU87 and T24 cells in two groups

圖15 2 組BIU87 和T24 細(xì)胞中VEGF-A 蛋白表達(dá)電泳圖Fig.15 Electrophoregram of VEGF-A protein in BIU87 and T24 cells in two groups

圖16 2組BIU87和T24細(xì)胞中VEGF-A蛋白表達(dá)水平Fig. 16 Expression levels of VEGF-A protein in BIU87 and T24 cells in two groups

圖17 第36 天時(shí)2 組瘤體的大體形態(tài)Fig.17 Macroscopic images of tumor in two groups on 36th day

圖18 2 組BIU87 細(xì)胞形成瘤體體積Fig.18 Volumes of tumor induced by BIU87 cells in two groups

圖19 2 組瘤體組織中CD31 蛋白免疫組織化學(xué)染色結(jié)果Fig. 19 Results of immunohistochemical staining of CD31 protein in tumor tissue in two groups

圖20 2 組瘤體組織中VEGF-A 蛋白表達(dá)電泳圖Fig.20 Electrophoregram of VEGF-A protein in tumor tissue in two groups

圖21 2 組瘤體組織中CD31 蛋白表達(dá)灰度值（A）和VEGF-A 蛋白表達(dá)水平（B）Fig.21 Gray values of CD31 protein expression(A)and expression levels of VEGF-A protein in tumor tissue in two groups

綜上所述，敲低ALKBH3 能抑制膀胱癌生長(zhǎng)、轉(zhuǎn)移和腫瘤血管生成。雖然ALKBH3 作用的確切機(jī)制仍需進(jìn)一步闡明，但本研究結(jié)果提示敲低ALKBH3 可能是膀胱癌的潛在治療策略。