王 暖, 楊麗娟, 代娟娟, 王愛麗, 武 艷, 劉成霞

（1. 濱州醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院消化內(nèi)科，山東 濱州 256600；2.濱州醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院腫瘤研究實(shí)驗(yàn)室，山東 濱州 256600）

胃癌是消化道常見的惡性腫瘤之一，盡管在診斷和治療方面取得重大進(jìn)展，但腫瘤的浸潤和轉(zhuǎn)移仍是其療效較差的主要原因［1-2］。因此，尋找胃癌轉(zhuǎn)移的生物診斷標(biāo)志物，研發(fā)針對特異分子的靶向治療藥物對胃癌的防治具有重要意義。膜相關(guān)環(huán)狀蛋 白 家 族 （membrane associated RING-CH，MARCH） 是一類含有環(huán)指結(jié)構(gòu)域的E3 泛素化連接 酶，MARCH1 是 其 成 員 之 一［3-4］。早 期 研 究［5］發(fā)現(xiàn)：MARCH1 通過將主要組織相容性復(fù)合體Ⅱ（major histocompatibility complex Ⅱ，MHC-Ⅱ） 和其他蛋白分子引導(dǎo)至溶酶體區(qū)室泛素化降解來下調(diào)其表達(dá)水平，進(jìn)而參與抗原提呈過程。近年來研究［6-8］表明：除在免疫系統(tǒng)中的重要作用外，MARCH1 還參與腫瘤的發(fā)生發(fā)展，MARCH1 在卵巢癌和肝癌中作為癌基因促進(jìn)腫瘤的惡性生物學(xué)行為，但在膀胱癌中MARCH1 作為miR-653 的下游靶點(diǎn)發(fā)揮抑癌作用，可見在不同腫瘤中MARCH1的作用不盡相同。但MARCH1 在胃癌中的作用尚未見研究報(bào)道。本研究檢測胃癌癌組織和癌旁組織及人胃黏膜正常上皮細(xì)胞GES-1 和人胃癌細(xì)胞（BGC-823、 BGC-803、 AGS和SGC-7901） 中MARCH1 表達(dá)水平，然后通過siRNA 干擾技術(shù)構(gòu)建敲低MARCH1的SGC-7901細(xì)胞系，采用CCK-8實(shí)驗(yàn)、劃痕實(shí)驗(yàn)、Transwell 小室實(shí)驗(yàn)評價MARCH1 對細(xì)胞增殖、遷移和侵襲的影響，Western blotting 法探討其可能的作用機(jī)制，旨在為研究MARCH1 在胃癌發(fā)展中的作用奠定基礎(chǔ)，為胃癌診療靶點(diǎn)的研發(fā)提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 細(xì)胞、組織、主要試劑和儀器GES-1、BGC-823 和BGC-803 細(xì)胞購自中國科學(xué)院細(xì)胞庫，AGS和SGC-7901 細(xì)胞系為濱州醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院腫瘤研究實(shí)驗(yàn)室原有細(xì)胞系。收集濱州醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院胃癌手術(shù)切除治療的20 例胃癌組織和癌旁組織，患者術(shù)前均簽署知情同意書。本研究得到濱州醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院倫理委員會的批準(zhǔn)。PRMI-1640 培養(yǎng)基、1%青霉素-鏈霉素混合液（雙抗）、10%胎牛血清和胰酶均購自美國Hyclone 公司，siRNA 由上海吉瑪生物公司合成，Lipofectamine 2000 購于美國Invitrogen 公司，CCK-8 試劑盒購于上海碧云天公司，Matrigel 基質(zhì)膠和Transwell 小室購自美國BD公司，SYBR Premix Ex Taq 試劑盒和反轉(zhuǎn)錄酶試劑盒均購自大連寶生物工程有限公司，引物由生工生物工程（上海） 股份有限公司合成，蛋白裂解液、BCA 蛋白定量試劑盒和ECL 試劑盒購于上海碧云天公司，β-actin、MARCH1、蛋白激酶B（protein kinase B， AKT）、磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶（phosporylated-phosphatidylinositol 3-kinase B，p-PI3K）和磷酸化蛋白激酶B（phosphorylated protein kinase B， p-AKT）抗體購自美國Immunoway 公司。

1.2 細(xì)胞培養(yǎng)人胃黏膜正常上皮細(xì)胞GES-1 和人胃癌細(xì)胞BGC-823、BGC-803、AGS 及SGC-7901 均采用含10%胎牛血清和1%青霉素-鏈霉素混合液的PRMI-1640 培養(yǎng)基培養(yǎng)，在37 ℃，5%CO2培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。使用含有EDTA 的0.25%胰酶溶液消化傳代。

1.3 MARCH1 敲減細(xì)胞系的構(gòu)建和分組通過siRNA 技術(shù)敲減MARCH1：取對數(shù)生長期的細(xì)胞，每孔3×105個細(xì)胞鋪在6 孔細(xì)胞培養(yǎng)板中，或者每孔5×103個細(xì)胞鋪在96 孔細(xì)胞培養(yǎng)板中，24 h 之后細(xì)胞完全貼壁，細(xì)胞密度約為70%，將細(xì)胞分為siMARCH1-1 組、siMARCH1-2 組和對照組，按照 Lipofectamine 2000 說 明 書，分別轉(zhuǎn)染siMARCH1-1、siMARCH1-2 和對照siNC（分別作為siMARCH1-1 組、siMARCH1-2組和siNC 組，37 ℃無血清培養(yǎng)基孵育6～8 h，棄掉原培養(yǎng)基，采用含10%血清的培養(yǎng)基替換繼續(xù)培養(yǎng)48 h，進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。敲減 MARCH1 的 siRNA序列：siMARCH1-1 上 游 引 物 5'-CAGGAGGUCUUGUCUUCAUTT-3'， 下游引物 5'-AUGAAGACAAGACCUCCUGTT-3'； siMARCH1-2 上游引物5'-GGUAGUGCCUGUACCACAATT-3'，下游引物5'-UUGUGGUACAGGCACUACCTT-3'。 siNC上游引物5'-UUCUCCGAACGUGUCACGUTT-3'， 下游引物 5'-ACGUGACACGUUCGGAGAATT-3'。

1.4 CCK-8 法檢測各組細(xì)胞增殖活性本實(shí)驗(yàn)分組如“1.3”，每組設(shè)置5 個復(fù)孔。將細(xì)胞以每孔5×103個接種于96 孔細(xì)胞培養(yǎng)板，培養(yǎng)過夜后進(jìn)行轉(zhuǎn)染，分別于轉(zhuǎn)染24、48 和72 h 終止培養(yǎng)，加入CCK-8 溶液，避光，37 ℃繼續(xù)孵育2 h，采用酶標(biāo)儀測定各孔在450 nm 波長處的吸光度（A）值，共測定72 h，本實(shí)驗(yàn)重復(fù)3 次，以A 值代表各組細(xì)胞增殖活性。采用GraphPad Prism 7.0 繪制不同組細(xì)胞隨時間變化的增殖曲線。

1.5 細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)檢測各組細(xì)胞遷移能力本實(shí)驗(yàn)分組如“1.3”，細(xì)胞轉(zhuǎn)染48 h 后，采用200 μL槍頭進(jìn)行劃痕，PBS 緩沖液沖洗，加入無血清培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)，在培養(yǎng)0、24 和48 h 進(jìn)行劃痕實(shí)驗(yàn)觀察并拍照，使用Image J 軟件測量劃痕距離，計(jì)算細(xì)胞劃痕愈合率。細(xì)胞劃痕愈合率＝（0 h 劃痕寬度—24 h 或48 h 劃痕寬度）/0 h 劃痕寬度×100%。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3 次，采用GraphPad Prism 7.0 繪制各組細(xì)胞劃痕愈合率統(tǒng)計(jì)圖。

1.6 Transwell 小室實(shí)驗(yàn)檢測各組細(xì)胞侵襲能力

本實(shí)驗(yàn)分組如“1.3”，實(shí)驗(yàn)前采用Matrigel 基質(zhì)膠覆蓋含8.0 μm 多孔聚碳酸酯膜的6.5 mm Transwell 小室，37 ℃下溫育2 h 備用。細(xì)胞轉(zhuǎn)染后24 h，收集細(xì)胞重懸于無血清培養(yǎng)基中，細(xì)胞計(jì)數(shù)后將各組細(xì)胞以3×103個/200 μL 的密度接種于小室中，小室放入24 孔細(xì)胞培養(yǎng)板，小室外加入500 μL 20%胎牛血清的培養(yǎng)基。37 ℃培養(yǎng)48 h，用棉簽擦拭未穿過的細(xì)胞，然后將小室在4%多聚甲醛中固定，0.5%結(jié)晶紫染色，自來水漂洗，鏡下觀察并計(jì)數(shù)。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3 次，采用GraphPad Prism 7.0 繪制各組細(xì)胞侵襲細(xì)胞數(shù)目統(tǒng)計(jì)圖。

1.7 實(shí)時熒光定量PCR（RT-qPCR）檢測不同組織和各組細(xì)胞中MARCH1 mRNA 表達(dá)水平收集胃癌組織和癌旁組織以及各組轉(zhuǎn)染48 h 的細(xì)胞，根據(jù)說明書TRIzol 法提取RNA，檢測RNA 濃度。按照試劑盒說明書，2μLRNA配成20μL體系反轉(zhuǎn)錄成 cDNA。 采 用 AceQ Universal SYBR qPCR Master Mix 進(jìn)行PCR 法檢測，以GAPDH 作為內(nèi)參，3 次重復(fù)實(shí)驗(yàn)，采用2－△△Ct法計(jì)算MARCH1 mRNA 相對表達(dá)水平，采用GraphPad Prism 7.0 繪制統(tǒng)計(jì)圖。引物序列：MARCH1 上游引物5'-CACGTTCCACGTCATCGCCGT-3'，下游引物5'-ATGGCCATTCCAGCACACCTTGC-3'；GAPDH 上游引物5'-CTCCTCCTGTTCGACAGTCAGC-3'，下游引物 5'-CCCAATACGACCAAATCCGTT-3'。

1.8 Western blotting 法檢測不同組織和各組細(xì)胞中MARCH1 及PI3K/AKT 通路相關(guān)蛋白表達(dá)水平收集胃癌組織和癌旁組織，各組細(xì)胞轉(zhuǎn)染48 h后，收集細(xì)胞沉淀，蛋白裂解液裂解細(xì)胞，BCA法測定蛋白濃度，將蛋白在SDS-PAGE 上樣，緩沖液中99 ℃煮沸5 min，取15 μg 蛋白上樣進(jìn)行SDS-PAGE 電泳分離，PVDF 膜轉(zhuǎn)膜，5%脫脂牛奶封閉2 h，孵育抗體4 ℃過夜，然后在37 ℃孵育二抗30 min，最后使用ECL 發(fā)光液顯色。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3 次，使用Image J 軟件，以β-actin 為內(nèi)參，以目的蛋白灰度值與內(nèi)參蛋白灰度值比值作為目的蛋白表達(dá)水平。采用GraphPad Prism 7.0 繪制統(tǒng)計(jì)圖。

1.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用SPSS 26.0 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。胃癌組織和癌旁組織及各組細(xì)胞中MARCH1 mRNA 和蛋白表達(dá)水平，細(xì)胞增殖率、遷移率和侵襲率及細(xì)胞中PI3K/AKT 通路相關(guān)蛋白表達(dá)水平均呈正態(tài)分布，以±s 表示。胃癌組織和癌旁組織MARCH1 mRNA 和蛋白表達(dá)水平均數(shù)比較采用配對樣本t檢驗(yàn)，兩組間均數(shù)比較采用兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，多組間樣本均數(shù)比較采用單因素方差分析，不同組細(xì)胞不同時間點(diǎn)的比較采用雙因素方差分析。以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 胃癌組織和癌旁組織中MARCH1 mRNA 及蛋白表達(dá)水平采用RT-qPCR 檢測20 例胃癌組織和癌旁組織中MARCH1 mRNA 表達(dá)水平，結(jié)果顯示：12 例胃癌組織中MARCH1 高表達(dá)（1.55±0.98，P＜0.05）（圖1A）。Western blotting 法進(jìn)一步檢測蛋白表達(dá)水平，結(jié)果顯示：與癌旁組織（0.88±0.23） 比較，在胃癌組織中MARCH1 蛋白表達(dá)水平（2.01±1.13）明顯升高（P＜0.05）。見圖1B。

2.2 人胃癌細(xì)胞中MARCH1 mRNA 表達(dá)水平

圖1 RT-qPCR 法和Western blotting 法檢測胃癌和癌旁組織中MARCH1 mRNA 表達(dá)水平（A）和MARCH1蛋白表達(dá)量（B）Fig.1 Expression levels of MARCH1 mRNA (A) and expression amounts of MARCH1 protein (B) in gastric cancer tissue and adjacent normal gastric tissue detected by RT-qPCR and Western blotting methods

與GES-1 細(xì)胞比較，AGS、BGC-803、BGC-823 和SGC-7901 細(xì)胞中MARCH1 mRNA 表達(dá)水平明顯升高（P＜0.05 或P＜0.01），尤其SGC-7901 細(xì)胞中MARCH1 mRNA表達(dá)水平最高。見圖2。因此SGC-7901 細(xì)胞符合本實(shí)驗(yàn)研究需要，本實(shí)驗(yàn)中采用SGC-7901 細(xì)胞進(jìn)行后續(xù)研究。

圖2 RT-qPCR 法檢測不同細(xì)胞中MARCH1 mRNA表達(dá)水平Fig.2 Expression levels of MARCH1 mRNA in different cells detected by RT-qPCR method

2.3 MARCH1 敲減效率驗(yàn)證在SGC-7901 細(xì)胞中分別采用siMARCH1-1、 siMARCH1-2 敲減MARCH1，并與陰性對照序列（siNC）對比，通過RT-qPCR 法檢測細(xì)胞中MARCH1 mRNA 的表達(dá)水平，結(jié)果顯示：與siNC組比較，siMARCH1-1 組和siMARCH1-2 組細(xì)胞中MARCH1 mRNA 表達(dá)水平（0.68±0.06 和0.48±0.03）明顯降低（P＜0.01）（圖3A）。Western blotting 法檢測結(jié)果顯示：與siNC組比較，MARCH1-1 組 和MARCH1-2 組細(xì)胞中MARCH1 蛋白表達(dá)量明顯降低（圖3B）。

圖3 RT-qPCR 法和Western blotting 法檢測各組SGC-7901 細(xì)胞中MARCH1 mRNA 表達(dá)水平（A）和MARCH1 蛋白表達(dá)電泳圖（B）Fig. 3 Expression levels of MARCH1 mRNA (A) and electrophoregram of expressions of MARCH1 protein(B)in SGC-7901 cells in various groups detected by RT-qPCR and Western blotting methods

2.4 各組SGC-7901 細(xì)胞增殖活性轉(zhuǎn)染24 h 時，siNC 組、siMARCH1-1 組和siMARCH1-2 組SGC-7901 細(xì)胞增殖活性分別為0.53±0.02、0.51±0.01 和0.52±0.02；轉(zhuǎn)染48 h 時，3 組SGC-7901細(xì)胞增殖活性分別為0.91±0.05、0.81±0.03 和0.87±0.02；轉(zhuǎn)染72 h 時3 組SGC-7901細(xì)胞增殖活性分別為1.24±0.05、1.32±0.19和1.33±0.16。轉(zhuǎn)染不同時間，與siNC 組比較，siMARCH1-1 組和siMARCH1-2 組SGC-7901 細(xì)胞增殖活性無明顯變化，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見圖4。

圖4 CCK-8 實(shí)驗(yàn)檢測各組SGC-7901 細(xì)胞增殖活性Fig. 4 Proliferation activities of SGC-7901 cells in various groups detected by CCK-8 assay

2.5 各組SGC-7901 細(xì)胞劃痕愈合率轉(zhuǎn)染24 h后，siNC 組SGC 細(xì)胞劃痕愈合率為（49.67±1.24）%、siMARCH1-1 組劃痕愈合率為（32.33±2.05）%，siMARCH1-2 組劃痕愈合率為（34.00±4.32）%；轉(zhuǎn)染48 h 后，siNC 組劃痕愈合率為（77.00±2.45）%、siMARCH1-1 組劃痕愈合率為（48.67±1.25）%、siMARCH1-2 組劃痕愈合率為（51.00±4.32）%；不同時間點(diǎn)，與siNC 組比較，siMARCH1-1 組 和siMARCH1-2 組SGC細(xì)胞劃痕愈合率明顯降低（P＜0.01）。見圖5。

2.6 各組SGC-7901 細(xì)胞侵襲數(shù)與siNC 組［（33.80±4.40） 個/HP］ 比較，siMARCH1-1組［（10.20±1.33） 個/HP］和siMARCH1-2 組［（11.00±5.51）個/HP］ SGC-7901 細(xì)胞侵襲數(shù)明顯減少（P＜0.01）。見圖6。

2.7 各組SGC-7901 細(xì)胞中PI3K/AKT 通路相關(guān)蛋白表達(dá)水平與siNC 組比較，siMARCH1-1 組和siMARCH1-2 組SGC-7901 細(xì)胞中AKT 表達(dá)水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），p-PI3K 和p-AKT 蛋白表達(dá)水平均降低（P＜0.01）。見圖7。

3 討 論

胃癌是繼肺癌和肝癌后癌癥死亡率第3 位的腫瘤，標(biāo)準(zhǔn)化死亡率為23.14/10 萬［9］，不僅影響患者健康狀態(tài)而且嚴(yán)重影響生活質(zhì)量，目前胃癌的轉(zhuǎn)移機(jī)制尚不明確，因此探索胃癌遷移侵襲的分子機(jī)制，尋找潛在的生物標(biāo)志物，開發(fā)針對特定分子的靶向治療藥物具有重要意義。

圖5 劃痕實(shí)驗(yàn)檢測各組SGC-7901 細(xì)胞劃痕愈合率Fig.5 Scratch healing rates of SGC-7901 cells in various groups detected by scratch assay

圖6 Transwell 小室實(shí)驗(yàn)檢測各組SGC-7901 細(xì)胞侵襲情況（結(jié)晶紫，×200）Fig.6 Invasion of SGC-7901 cells in various groups detected by Transwell chamber assay(Crystal violet,×200)

圖7 Western blotting 法檢測各組SGC-7901 細(xì)胞中PI3K/AKT 通路相關(guān)蛋白表達(dá)電泳圖（A）和直條圖（B）Fig. 7 Electrophoregram (A) and histogram (B) of expressions of PI3K/AKT pathway-related proteins in SGC-7901 cells in various groups detected by Western blotting method

MARCH 家族成員分布廣泛，參與多種生理功能，比如內(nèi)質(zhì)網(wǎng)降解［10］、蛋白質(zhì)能量控制與膜轉(zhuǎn)運(yùn)［11］、精子發(fā)生［12］和免疫調(diào)節(jié)［13］等，MARCH1是家族成員之一。早期研究［5］顯示：MARCH1 主要通過泛素化MHC-Ⅱ和CD86 影響抗原提呈過程，其在免疫系統(tǒng)中發(fā)揮重要作用。近年來有少量關(guān)于MARCH1 參與腫瘤發(fā)生發(fā)展的研究報(bào)道［6-8，14］，而抗腫瘤藥物吡柔比星可在蛋白水平抑制肝癌細(xì)胞MARCH1 的表達(dá)［7］。黑麥酮酸F （secalonic acid-F，SAF）是一種從天然新型菌株里分離出來的化合物，可以通過下調(diào)MARCH1 蛋白表達(dá)水平來抑制肝癌細(xì)胞的增殖遷移和侵襲，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的凋亡［14］，可見MARCH1 抑制劑可能作為抗腫瘤藥物進(jìn)行研發(fā)。MARCH1 在卵巢癌和肝癌中的表達(dá)已有研究［6-7］報(bào)道，但其在胃癌中的作用未見相關(guān)研究報(bào)道。本研究結(jié)果顯示：與癌旁組織比較，胃癌組織中MARCH1 mRNA 和蛋白表達(dá)水平較高，與人胃黏膜正常上皮細(xì)胞GES-1 比較，人胃癌BGC-823、 BGC-803、 AGS和SGC-7901細(xì)胞中MARCH1 mRNA 表達(dá)水平升高，提示MARCH1在胃癌的發(fā)生發(fā)展中可能是一個癌基因。本文作者進(jìn)一步通過siRNA 干擾技術(shù)構(gòu)建MARCH1 敲低的胃癌細(xì)胞系，劃痕實(shí)驗(yàn)和Transwell 小室實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示敲低MARCH1 能夠降低細(xì)胞的遷移和侵襲能力。MENG 等［6］發(fā) 現(xiàn)MARCH1在卵巢癌組織和細(xì)胞中高表達(dá)，下調(diào)MARCH1 表達(dá)可抑制卵巢癌細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲，其與NF-κB 通路互相調(diào)控形成正反饋回路，可通過β-catenin 上調(diào)經(jīng)典Wnt 通路，XIE 等［7］發(fā)現(xiàn)MARCH1 在肝癌組織和細(xì)胞中高表達(dá)，降低MARCH1 的表達(dá)水平可通過PI3K/AKT/β-catenin 通路抑制肝癌惡性生物學(xué)行為［6］，本研究結(jié)果與以上報(bào)道一致。本文作者進(jìn)一步探討MARCH1的可能作用機(jī)制，Western blotting 法檢測結(jié)果表明：敲低MARCH1后，細(xì)胞中p-PI3K和p-AKT 表達(dá)水平降低，提示MARCH1 通過PI3K/AKT 通路發(fā)揮作用。PI3K/AKT 通路的異常激活與腫瘤的多種生物學(xué)行為密切相關(guān)，AKT 磷酸化可通過多種途徑參與細(xì)胞代謝、轉(zhuǎn)錄、蛋白合成、增殖和存活等生物學(xué)功能［15］，AKT 磷酸化后，細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶（cyclin-dependent kinases，CDK）抑制劑p27 和p21，阻止其定位于細(xì)胞核可減弱對細(xì)胞周期的抑制作用進(jìn)而促進(jìn)增殖［16-17］，還可以通過抑制Bcl-2 家族成員蛋白表達(dá)或抑制轉(zhuǎn)錄因子FOXO和p53促使細(xì)胞存活［18］。在細(xì)胞遷移和侵襲方面，AKT 有2 種相對獨(dú)立的機(jī)制：一種機(jī)制是AKT 介導(dǎo)活化T 細(xì)胞核因子（nuclear factor of activated T cells，NFAT） 降解抑制體外細(xì)胞遷移和侵襲［19］；另一種機(jī)制是AKT 通過調(diào)節(jié)上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化（epithelial-mesenchymal transition，EMT）進(jìn)程進(jìn)而促進(jìn)腫瘤的轉(zhuǎn)移［20］。AKT 激活后可促進(jìn)EMT 轉(zhuǎn)錄因子（snail、twist 和slug） 的表達(dá)，降低E-cadherin 蛋白表達(dá)水平，促進(jìn)細(xì)胞遷移［21-22］。本研究結(jié)果顯示：敲低MARCH1 降低了PI3K/AKT 信號通路活性，抑制了SGC-7901 細(xì)胞遷移和侵襲，但對細(xì)胞增殖未見明顯影響，本文作者猜測可能是MARCH1 激活了PI3K/AKT 信號通路下游遷移侵襲相關(guān)的靶分子，但對SGC-7901 細(xì)胞增殖相關(guān)靶分子無明顯影響，其具體分子機(jī)制還需要進(jìn)一步深入探討。

綜上所述，本研究利用臨床腫瘤樣本和人胃癌細(xì)胞系，檢測到MARCH1 在胃癌中高表達(dá)，并通過 siRNA干擾技術(shù)下調(diào) SGC-7901細(xì)胞中MARCH1的表達(dá)水平，發(fā)現(xiàn)敲低MARCH1 抑制了SGC-7901 細(xì)胞的遷移和侵襲，其機(jī)制可能與抑制PI3K/AKT 通路相關(guān)蛋白表達(dá)有關(guān)。