孟靜靜 周文杰 蘆站根 侯曉杰 梁魁景

（衡水學(xué)院 河北 衡水 053000）

丹參又名赤參、紫丹參、紅根等，是唇形科鼠尾草屬的植物。以根入藥，主要產(chǎn)地位于四川、安徽、河北、山西、江蘇等多個地區(qū)。丹參根腐病已經(jīng)成為丹參的重要土傳病害?；瘜W(xué)防治是目前防治根腐病的主要方法，但化學(xué)防治會出現(xiàn)藥物殘留，且不利于環(huán)境保護(hù)，因此，生物防治就成為防治植物根腐病的最新辦法。根腐病菌的治理可以通過對其有拮抗作用并對植株無害的其他菌種來防治，因此可以通過采取輪作的方式降低根腐病的危害。趙慶芳[1]等研究表明，洋蔥、板藍(lán)根、小麥、苦豆子、蒼耳子、玉米、苦參、黃芩、黃連等9 種植物可以與黃芪進(jìn)行輪作，有利于防治黃芪根腐病。目前關(guān)于植物浸提液對各種植物根腐病菌的抑菌效果的研究已有不少報(bào)道。國外已有采用芽孢桿菌防治番茄根腐病、辣椒根腐病以及甜菜根腐病的成功實(shí)例[2～4]。國內(nèi)的研究人員也已經(jīng)進(jìn)行了許多相關(guān)的研究，趙慶芳[5]等還研究了15 種植物水提液對當(dāng)歸根腐病的抑制作用，結(jié)果得出10 種植物水提液對當(dāng)歸根腐病菌有抑制作用。張偉[6]等試驗(yàn)結(jié)果表明，蔥屬植物洋蔥、大蒜、韭菜及蔥的浸提液對三七根腐病病原菌均能產(chǎn)生顯著地抑制效果，其中大蒜浸提液的效果最好。葉文斌[7]等研究得知，黃芪和黨參2 種中草藥浸提液對當(dāng)歸根腐病病原菌菌絲生長的抑制作用非常明顯，同時抑菌作用與中草藥浸提液的濃度呈現(xiàn)正相關(guān)。蔣繼志[8]等采用4 種蔥屬植物(洋蔥、韭菜、蔥、大蒜)的水提液對引起草莓根腐病的2種主要病原菌進(jìn)行了抑菌效果研究，結(jié)果表明，韭菜和大蒜的水提液在濃度較高時對膠孢炭疽菌和立枯絲核菌均產(chǎn)生明顯抑制效果。李紅梅[9]等研究表明，多種中草藥提取液不僅對病菌菌落生長有抑制效果，而且對分生孢子的萌發(fā)也有明顯的抑菌效果，其中提取物中效果較好的為苦棟皮和北沙參，并且提取物濃度越低，抑菌作用越不明顯。綜上所述，對于不同植物的根腐病菌，可運(yùn)用相應(yīng)的其他植物浸提液來抑制其病原菌生長，也可以通過與其輪作，減少根腐病的發(fā)生。因此，研究植物浸提液對根腐病的抑制作用具有重要的意義。本試驗(yàn)以白洋蔥和紫洋蔥為試驗(yàn)材料，探究洋蔥浸提液對丹參根腐病原菌的抑制作用，為丹參的合理種植提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 供試材料。丹參病株取自河北省行唐縣農(nóng)田，在丹參病株的根部分離純化所需菌種。試驗(yàn)用白洋蔥和紫洋蔥購自衡水學(xué)院附近超市。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 不同質(zhì)量濃度洋蔥浸提液的制備。首先分別稱取新鮮的白洋蔥和紫洋蔥各100 g，用水清洗干凈后分別放入高速組織搗碎機(jī)內(nèi)搗碎，將攪碎的洋蔥用無菌水浸泡，放置于室溫下浸提48 h。用雙層濾紙過濾，而后用0.45 μm 的細(xì)菌過濾器過濾，加入無菌水定容到500 ml，最后將得到的質(zhì)量濃度為200 g/L 的洋蔥水提液作為母液，保存于冰箱(4 ℃)待用。采用雙倍稀釋法，將2 種洋蔥的水提液母液分別用無菌水稀釋成質(zhì)量濃度為200 g/L、100 g/L、50 g/L、25 g/L的洋蔥水提液，置于冰箱(4 ℃)中待用。

1.2.2 丹參根腐病病原菌的分離純化。從河北省行唐縣農(nóng)田采集患病的丹參植株，用水清洗掉根部的泥土，采用組織分離法從丹參的根部刮取適量組織，用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5%的次氯酸鈉浸泡3 min，而后用無菌水清洗2 ～3 次，再用無菌的濾紙將表面的水吸干后，將其接種于PDA 培養(yǎng)基上，25 ℃培養(yǎng)5 d。在無菌的條件下，挑取菌落邊緣的菌絲轉(zhuǎn)接到PDA 培養(yǎng)基上，放于25 ℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2 d，待菌絲長出來以后經(jīng)過多次純化，直到培養(yǎng)基上沒有雜菌出現(xiàn)，鑒定并保存菌種，置于冰箱保存。

1.2.3 不同濃度洋蔥提取液的抑菌作用試驗(yàn)。采用生長速率法測定菌絲生長的活性。在無菌條件下，于直徑為90 mm 的培養(yǎng)皿中加入融化的PDA 培養(yǎng)基15 ml，然后用移液槍分別吸取不同濃度的洋蔥水提液2 ml，快速加入培養(yǎng)皿中，用玻璃棒攪拌均勻，對照加入無菌水2 ml，待混勻的培養(yǎng)基凝固后，用4 mm 的無菌打孔器將已在PDA 培養(yǎng)基上活化培養(yǎng)3 d 的病菌餅接到培養(yǎng)基中央，每個濃度設(shè)置3 個重復(fù)，而后將培養(yǎng)基放于26 ℃培養(yǎng)箱中暗培養(yǎng)5 d。采用十字交叉法測量菌落的直徑，根據(jù)公式計(jì)算出不同濃度洋蔥浸提液對丹參根腐病病原菌的抑菌率。相關(guān)計(jì)算公式：

1.3 數(shù)據(jù)分析。試驗(yàn)數(shù)據(jù)用SPSS 統(tǒng)計(jì)軟件和Excel表格進(jìn)行分析，并用LSD 方法對顯著性進(jìn)行檢驗(yàn)。

2 結(jié)果與分析

2.1 丹參根腐病病原菌的鑒定。肉眼觀察，可見由丹參病株根部分離純化所得的根腐病病原菌菌落在PDA培養(yǎng)基上的菌落形態(tài)為圓形，培養(yǎng)初期菌絲明顯，菌落為絮狀，生長旺盛，菌落正面和反面均為白色，后期菌絲較長，菌落中間稍有凸起，菌落正面仍為白色，背面出現(xiàn)淡黃色(見圖1)。在光學(xué)顯微鏡下觀察，其為有隔菌絲(見圖2)。分生孢子梗分枝或不分枝，存在2 種形態(tài)不同的分生孢子，其中小型分生孢子的形狀為卵圓形，而大型分生孢子的形狀為鐮刀形。最終確定為鐮刀菌屬的腐皮鐮刀菌[10]。

圖1 丹參根腐病菌在PDA培養(yǎng)基上的生長狀態(tài)

圖2 丹參根腐病病原菌菌絲

2.2 洋蔥浸提液對丹參根腐病病原菌菌絲生長的抑制試驗(yàn)。由表1 可得，白洋蔥和紫洋蔥浸提液對丹參根腐病病原菌菌絲的生長均有不同程度的抑制作用，隨浸提液質(zhì)量濃度的增加抑制作用逐漸增加。同時同種濃度的浸提液條件下，紫洋蔥浸提液的抑制效果強(qiáng)于白洋蔥。當(dāng)浸提液濃度為200 g/L 時，紫洋蔥和白洋蔥浸提液對丹參根腐病病原菌菌絲的抑制效果最好，抑菌率分別可達(dá)到41.16%和34.53%。

表1 洋蔥浸提液對丹參根腐病病原菌菌絲生長的抑制效果

3 結(jié)論與討論

近年來，丹參根腐病的傳播蔓延速度呈上升趨勢，患有根腐病的丹參植株細(xì)根首先變成褐色，干枯腐爛，而后病原菌逐漸延伸到粗根，根部橫切維管束斷面出現(xiàn)明顯褐色，最后整個根部腐爛，從而植株的地上部萎蔫枯死，產(chǎn)量顯著降低，并且其外觀性狀也不符合藥用的要求。丹參產(chǎn)區(qū)每年都會發(fā)生不同程度的病害，從而給藥農(nóng)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。根腐病可發(fā)生在丹參的整個生長期，通常的發(fā)病盛期為每年的6 ～7 月。根腐病是長期以來阻礙丹參大規(guī)模規(guī)范化栽培生產(chǎn)的一大難題。在研究根腐病病原菌的報(bào)道中，根腐病病原菌多數(shù)為鐮刀菌，如：葉文斌[7]等分離當(dāng)歸根腐病病原菌，而后鑒定其為尖孢鐮刀菌，臧少先[11]等研究得知白術(shù)根腐病病原菌為尖孢鐮刀菌、半裸鐮刀菌以及立枯絲核菌，楊穎[12]等發(fā)現(xiàn)甜瓜根腐病病原菌為腐皮鐮刀菌，劉亞亞[13]等發(fā)現(xiàn)掌葉大黃根腐病主要致病菌分別為立枯絲核菌和單端粉紅孢霉尖孢鐮刀菌。本試驗(yàn)的研究對象是丹參根腐病病原菌，通過對丹參根腐病病原菌的分離純化和培養(yǎng)鑒定，最終確定引起丹參根腐病的病原菌為腐皮鐮刀菌，與袁孟娟[14]等的研究結(jié)果一致。腐皮鐮刀菌菌落背面初期為白色，后期變?yōu)榈S色，這可能是由于隨著菌落的不斷生長，有色素產(chǎn)生，代謝產(chǎn)物不斷積累所致。本試驗(yàn)結(jié)果表明，白洋蔥、紫洋蔥的浸提液對丹參根腐病病原菌都有抑制效果，并且隨著浸提液濃度的升高抑制效果增強(qiáng)，與前人研究結(jié)果一致[7，9]。

植物源殺菌劑有著高效、無污染的優(yōu)點(diǎn)，但是對于篩選到的植物提取液的具體有效成分以及對病原菌的作用機(jī)理尚需進(jìn)一步的研究，同時還需要進(jìn)行大田試驗(yàn)，驗(yàn)證提取物在植物上是否有防治效果。