，，，，，，3，

（1.河北農(nóng)業(yè)大學(xué) a.植物保護(hù)學(xué)院；b.林學(xué)院，河北 保定 071001；2.河北省保定市森林病蟲害防治檢疫站，河北 保定 071000；3.河北省核桃工程技術(shù)研究中心，河北 邢臺 054300）

紅樹莓Rubus idaeusL.為薔薇科Rosaceae 懸鉤子屬植物。其果實(shí)具有人體所需的多種營養(yǎng)元素，享有“黃金水果”的美譽(yù)，可用以制作果凍、果汁等產(chǎn)品，這些產(chǎn)品深受人們的喜愛[1-2]。然而，樹莓在全球范圍內(nèi)的大面積種植，雖然拉動了國際樹莓市場和區(qū)域經(jīng)濟(jì)的發(fā)展，但也出現(xiàn)了許多問題[3]，如缺乏優(yōu)良栽培品種、盲目引種、害蟲危害嚴(yán)重等。其中，樹莓果蠅嚴(yán)重影響樹莓果的產(chǎn)量和品質(zhì)，且不同地區(qū)間害蟲優(yōu)勢種類可能不同[4-5]，其危害問題已成為制約樹莓產(chǎn)業(yè)發(fā)展的瓶頸，亟待解決。

果蠅屬于雙翅目Diptera 果蠅科Drosopilidae果蠅屬Drosophila，種類繁多，寄主廣泛，繁殖力強(qiáng)，主要危害成熟果實(shí)，成蟲產(chǎn)卵于果皮下，幼蟲孵化后在果實(shí)內(nèi)蛀食為害，影響果實(shí)品質(zhì)，造成嚴(yán)重經(jīng)濟(jì)損失[6]。據(jù)有關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道，不同作物上果蠅的種類可能存在差異：危害楊梅的果蠅主要為斑翅果蠅Drosophila suzukii[7]；在櫻桃果實(shí)內(nèi)發(fā)現(xiàn)的果蠅有4 種，其分別為斑翅果蠅D.suzukii、黑腹果蠅D.melanogaster、海德氏果蠅D.hydei和伊米果蠅D.immigrans[8]。雖然果蠅也是樹莓果的重要害蟲，但有關(guān)紅樹莓果蠅種類的研究尚缺乏系統(tǒng)的報(bào)道。紅樹莓屬于連續(xù)結(jié)果型水果，其果實(shí)成熟期長達(dá)4 個月，利用化學(xué)防治方法防治果蠅雖然有效，但化學(xué)防治可能引起的果品安全問題限制了其在樹莓果蠅防控中的使用，所以研究開發(fā)與樹莓生產(chǎn)相容性好的害蟲防治方法尤其迫切。目前，生物防治和物理防治技術(shù)具有相對安全、高效等優(yōu)點(diǎn)[9]，其中糖醋液誘集是以往生產(chǎn)中常用的誘集方法[10]。有關(guān)研究結(jié)果表明，櫻桃園中使用糖醋液誘集果蠅的效果明顯[6]；馮波等[11]發(fā)現(xiàn)，新鮮水果對果蠅有很強(qiáng)的誘集能力；伍蘇然等[12]發(fā)現(xiàn)，果蠅對新鮮香蕉和糖醋液均有很強(qiáng)的趨性，但新鮮水果易腐爛且成本較高，因此采用果香香精代替新鮮果肉以之誘集果蠅，結(jié)果也有很好的應(yīng)用潛力[13]。另有研究結(jié)果表明，含酵母的誘集液對果蠅的誘集效果十分明顯[14]。有關(guān)不同食誘劑配方對果蠅的誘集效果尚缺乏系統(tǒng)的比較研究，同時其在樹莓田的應(yīng)用效果尚不清楚，因此，亟待開發(fā)能適用于樹莓田果蠅防治的經(jīng)濟(jì)且高效的食誘劑。

明確害蟲周年發(fā)生規(guī)律是科學(xué)防控害蟲的前提和關(guān)鍵[15]。二點(diǎn)委夜蛾Athetis lepigone和綠盲蝽Apolygus lucorum都是近年危害嚴(yán)重的重要害蟲，張智等[16]、曹盼盼等[17]分別對二點(diǎn)委夜蛾、綠盲蝽的發(fā)生規(guī)律進(jìn)行了研究。相關(guān)研究結(jié)果表明，同種害蟲的發(fā)生規(guī)律因其食物種類、地域、種植環(huán)境等因素的不同而存在差異：如四川南充葡萄園中的果蠅，9月中旬至10月中旬為其發(fā)生高峰期[18]；山東煙臺葡萄園中的果蠅，9月下旬至10月上旬為其發(fā)生高峰期[19]；云南省石屏縣楊梅園中的果蠅，5月中旬至5月底為其發(fā)生高峰期[20]。果蠅種群在樹莓田里的發(fā)生規(guī)律也有其特殊性，因此，對其科學(xué)防治方案的制定具有重要意義。

為了科學(xué)而又高效地防治紅樹莓果蠅，本研究在其種類鑒定的基礎(chǔ)上，對其經(jīng)濟(jì)且高效的食誘劑進(jìn)行了篩選，以開發(fā)出新型食誘劑；并對紅樹莓果蠅田間種群動態(tài)進(jìn)行了監(jiān)測，還將之與紅樹莓的生育期進(jìn)行擬合，掌握其在紅樹莓田間的發(fā)生規(guī)律，明確紅樹莓果蠅為害的危險生育期，以期為紅樹莓果蠅的綜合防治提供基礎(chǔ)材料，也為確保紅樹莓的安全生產(chǎn)提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材 料

供試?yán)ハx：供試的果蠅和紅樹莓果均采自河北省保定市易縣樹莓主產(chǎn)區(qū)，紅樹莓的品種為‘海爾特茲’。采用誘捕法，使用桶形誘捕器（北京中捷四方生物科技股份有限公司）采集供試的果蠅。養(yǎng)蟲箱的溫度為（25.0±0.5）℃，其濕度為（70.0%±0.5%），光周期（指晝夜周期中光照期和黑暗期交替變化的長短）為：光照期∶黑暗期=16∶8。

試劑：紅糖，北京恒勝天祥工貿(mào)有限公司；酵母，安琪酵母股份有限公司；香蕉香精、菠蘿香精，廣東省陽江市陽東食品香料有限公司；食醋（總酸≥3.5 g/mL），天津市天立獨(dú)流老醋股份有限公司；果蠅屬引誘劑1、果蠅屬引誘劑2，深圳百樂寶生物農(nóng)業(yè)科技有限公司。

儀器與設(shè)備：雙目解剖鏡為日本奧林巴斯公司的OLYMPUS-SZ61 型體視顯微鏡，雙目體視鏡為基恩士有限公司的Nikon SMZ800N。

1.2 方 法

1.2.1 紅樹莓果蠅種類的鑒定

形態(tài)學(xué)鑒定：參考任路明等[21]采用的方法，根據(jù)形態(tài)特征對果蠅成蟲進(jìn)行初步的種類鑒定。將收集到的果蠅帶回實(shí)驗(yàn)室飼養(yǎng)，并于室內(nèi)解剖鏡下進(jìn)行觀察，分別對果蠅雄成蟲的前翅、前足跗節(jié)，雌成蟲的腹部、產(chǎn)卵器外部形態(tài)進(jìn)行比較，確定果蠅的種類。將樣品保存于75%的酒精中并置于實(shí)驗(yàn)室里在-20 ℃的溫度條件下保存以備用。

分子鑒定：參考禇棟等[22]采用的方法，根據(jù)4 種果蠅的mtCOI基因條形碼，對形態(tài)鑒定后的標(biāo)本的種類進(jìn)行鑒定，分別提取待鑒定的斑翅果蠅D.suzukii、黑腹果蠅D.melanogaster、海德氏果蠅D.hydei和伊米果蠅D.immigrans的DNA，經(jīng)紫外分光光度計(jì)測定DNA 濃度合格后再以其為PCR 模板，分別以LCO1490（5′-GGTC AACAAATCATAAAGATATTGG-3′） 和HCO2198（5′-TAAACTTCAGGGTG ACCAAAAAATCA-3′）為引物進(jìn)行序列擴(kuò)增[23]，引物合成委托深圳華大基因科技服務(wù)有限公司進(jìn)行。PCR反應(yīng)條件：96 ℃，預(yù)變性5 min；35 個循環(huán)（包括96 ℃，變性20 s；52 ℃，退火20 s；72 ℃，延伸30 s；最后72 ℃，延伸5 min）。取PCR 產(chǎn)物2 μL，將PCR 擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)過0.8%的瓊脂糖凝膠電泳檢測，然后將電泳檢測驗(yàn)證正確的PCR 產(chǎn)物交給深圳華大基因科技服務(wù)有限公司進(jìn)行測序。再將獲得的序列在NCBI網(wǎng)站進(jìn)行Blast 比對分析，并結(jié)合形態(tài)特征最終確定果蠅的種類，最后利用MEGA 5.0 軟件構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹。

1.2.2 不同食誘劑對紅樹莓果蠅田間誘捕效果的比較

試驗(yàn)于2018年6月至2019年8月在河北省保定市易縣富崗鄉(xiāng)雙合莊村紅樹莓田中（39°17′34″N、115°6′17″E）進(jìn)行。共設(shè)9 種食誘劑處理，各處理所用食誘劑的配方見表1，以清水和糖醋液為對照[24]，每處理各重復(fù)3 次。采用誘捕器誘捕果蠅，設(shè)其懸掛高度為1 m、間隔15 m，每個誘捕器中各放置350 mL 的食誘劑，隨機(jī)均勻分布于田間。每隔7 d 調(diào)查1 次，連續(xù)調(diào)查5 次，并定期補(bǔ)充新的食誘劑，統(tǒng)計(jì)各處理誘捕器中誘捕到的果蠅數(shù)量，計(jì)算平均值、標(biāo)準(zhǔn)誤，進(jìn)行差異顯著性分析（P＜0.05），根據(jù)統(tǒng)計(jì)結(jié)果篩選出對果蠅適宜的食誘劑種類。

表1 不同食誘劑的配方Table 1 Different food attractants formulations

1.2.3 紅樹莓果蠅種群動態(tài)的監(jiān)測

選取1.2.2 中誘集效果最佳的食誘劑進(jìn)行果蠅田間種群動態(tài)監(jiān)測。誘捕器的使用方法及果蠅調(diào)查方法與1.2.2 段中所述的相同，統(tǒng)計(jì)每個時間點(diǎn)誘捕器中7 d 內(nèi)每種果蠅總數(shù)量，得出4 種果蠅種群動態(tài)變化情況。同時將其與紅樹莓田間生育期進(jìn)行擬合，研究紅樹莓果蠅防控的關(guān)鍵生育期。

1.3 數(shù)據(jù)分析

利用Excel 2003 和SPSS 19.0 軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)和分析，采用Duncan 氏新復(fù)極差法進(jìn)行差異顯著性檢驗(yàn)。

2 結(jié)果與分析

2.1 紅樹莓果蠅種類的鑒定結(jié)果

對采自河北省保定市易縣富崗鄉(xiāng)雙合莊村紅樹莓田中果蠅雄成蟲的前翅、前足跗節(jié)與雌成蟲腹部、產(chǎn)卵器外部部位形態(tài)進(jìn)行了觀察和比較，結(jié)果分別如圖1～4 所示。觀察發(fā)現(xiàn)，采樣地區(qū)紅樹莓田中有4 種果蠅，其分別為斑翅果蠅D.suzukii、黑腹果蠅D.melanogaster、海德氏果蠅D.hydei和伊米果蠅D.immigrans。

圖1 4 種果蠅雄蟲前翅的鑒別特征Fig.1 Identification features of the male forewing in four Drosophila species

圖2 4 種果蠅雄蟲前足跗節(jié)的鑒別特征Fig.2 Identification features of the male forefeet digitus in four Drosophila species

圖3 4 種果蠅雌蟲腹部的鑒別特征Fig.3 Identification features of the female abdomen in four Drosophila species

圖4 4 種果蠅雌蟲產(chǎn)卵器的鑒別特征Fig.4 Identification features of the female ovipositor in four Drosophila species

以提取的果蠅mtCOI基因?yàn)槟０?，利用引物進(jìn)行PCR 擴(kuò)增，結(jié)果獲得了4 條清晰的條帶，其長度均約700 bp；將純化后的PCR 產(chǎn)物進(jìn)行測序，并利用NCBI 數(shù)據(jù)庫對測序結(jié)果進(jìn)行比對分析。結(jié)果表明，所測4 種果蠅的序列與NCBI 數(shù)據(jù)庫中已公開的斑翅果蠅（KX268721.1）、黑腹果蠅（KY559387.1）、海德氏果蠅（KJ671603.1）及伊米果蠅（LN867076.1）的mtCOI基因序列高度一致，其相似性均達(dá)99%以上。然后提交GenBank，分別將其命名為斑翅果蠅（MT883792）、黑腹果蠅（MT883996）、海德氏果蠅（MT873049）、伊米果蠅（MT883960）。這一結(jié)果與形態(tài)學(xué)鑒定結(jié)果一致。最后利用軟件MEGA 5.0 構(gòu)建了系統(tǒng)發(fā)育樹（圖5）。

圖5 基于mtCOI 基因序列構(gòu)建的紅樹莓田果蠅的系統(tǒng)發(fā)育樹Fig.5 Construction of phylogenetic tree of Drosophila red raspberry based on mtCOI gene sequence

2.2 紅樹莓果蠅優(yōu)勢種的鑒定結(jié)果

2019年5月8日—11月13日于河北省保定市易縣富崗鄉(xiāng)雙合莊村紅樹莓田中共誘集到果蠅成蟲12 115 頭，對其種類及數(shù)量進(jìn)行了比較，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，所誘集到的果蠅種類分別為斑翅果蠅D.suzukii、黑腹果蠅D.melanogaster、海德氏果蠅D.Hydei和伊米果蠅D.immigrans。其中，斑翅果蠅的數(shù)量最多，有10 865 頭，占所有果蠅數(shù)的89.68%，為樹莓田中果蠅的優(yōu)勢種群；其次是黑腹果蠅，有692 頭，占所有果蠅數(shù)的5.71%；再次依次是伊米果蠅（282 頭）與海德氏果蠅（276 頭），分別占所有果蠅數(shù)的2.33%和2.88%。

2.3 不同食誘劑對紅樹莓果蠅的田間誘捕效果

9 種不同食誘劑對紅樹莓果蠅的田間誘捕效果如圖6所示。由圖6可知，9 種食誘劑的誘蟲量均高于清水對照，說明9 種食誘劑對果蠅的誘集均有效果。其中，處理4、7、8 和9 的誘蟲量均明顯高于處理1 的誘蟲量，而且這幾個處理與其它處理間的差異均顯著（P＜0.05），而處理4、7 的誘蟲量又顯著高于處理8 與9 的誘蟲量（P＜0.05），處理7（自制糖醋菠蘿香精食誘劑）的誘蟲量高于處理4（自制糖醋香蕉香精食誘劑）的誘蟲量。因此，選擇處理7 所用的自制糖醋菠蘿香精食誘劑作為果蠅動態(tài)監(jiān)測的食誘劑。

圖6 9 種不同食誘劑對紅樹莓果蠅田間誘捕效果的比較Fig.6 Comparison of trapping effects of 9 kinds of food attractants on Drosophila in the field

2.4 紅樹莓田中4 種果蠅種群的發(fā)生動態(tài)

利用誘捕器對樹莓田里4 種果蠅種群進(jìn)行了監(jiān)測，結(jié)果如圖7所示。監(jiān)測中發(fā)現(xiàn)，在誘集到的4 種果蠅中，斑翅果蠅的數(shù)量最多，說明斑翅果蠅是其中的優(yōu)勢種群。在2019年5月8日—11月13日的監(jiān)測中發(fā)現(xiàn)，一直有斑翅果蠅的發(fā)生。根據(jù)害蟲的發(fā)生規(guī)律，蟲口密度達(dá)到種群的16%～84%的時期為其發(fā)生盛期。對紅樹莓田中斑翅果蠅種群發(fā)生動態(tài)的監(jiān)測結(jié)果如圖8所示。由圖8可知，斑翅果蠅種群的發(fā)生盛期為8月7日—10月9日；其發(fā)生高峰日期分別為6月19日、8月14日和10月2日，監(jiān)測到的蟲口數(shù)量分別為515、1 608 和2 450 頭（圖7）。研究地的樹莓從7月2日起開始進(jìn)入開花期，7月28日進(jìn)入果實(shí)成熟期，說明樹莓結(jié)果期正值果蠅發(fā)生盛期，此時如果不及時防治，就會造成該蟲的大發(fā)生，其危害嚴(yán)重，因此，在紅樹莓開花始期就應(yīng)對果蠅進(jìn)行防控，必要時應(yīng)使用化學(xué)藥劑進(jìn)行防治。

圖7 紅樹莓田4 種果蠅種群發(fā)生動態(tài)Fig.7 Dynamics of four Drosophila populations in red raspberry field

圖8 紅樹莓田斑翅果蠅種群累計(jì)發(fā)生動態(tài)Fig.8 Cumulative population dynamics of D.suzukii in red raspberry field

3 結(jié)論與討論

果蠅種類繁多，但為害樹莓等漿果類水果的果蠅種類有限。如陳哲等[5]發(fā)現(xiàn)，貴陽樹莓田中果蠅的主要種類為黑腹果蠅。而本研究結(jié)果表明，河北省保定市樹莓田中果蠅的主要種類為斑翅果蠅，這一結(jié)果與陳哲等[5]的研究結(jié)果不一致，究其原因，可能與樹莓品種、海拔、溫度、地域等條件有關(guān)。

人們對食品安全意識的日益增強(qiáng)，給鮮食水果害蟲的防控技術(shù)提出了更高要求。樹莓作為一種鮮食水果，受果蠅危害嚴(yán)重，因此，篩選出針對果蠅的高效、實(shí)用、經(jīng)濟(jì)的食誘劑對其防控的意義重大。已有研究結(jié)果表明，糖醋液、香蕉果肉對果蠅均有較好的誘集能力，但從經(jīng)濟(jì)效益方面考慮，使用新鮮香蕉作為誘捕劑，成本較高，且田間推廣與可操作性差[6]，因而利用果香香精代替新鮮果肉具有極大的應(yīng)用優(yōu)勢和潛力[14]。基于上述情況，本試驗(yàn)利用2 種香精研制了適用于誘集紅樹莓果蠅的經(jīng)濟(jì)而又高效的食誘劑配方。但是，要開發(fā)出田間適用的食誘劑，不僅要考慮誘蟲效果，還要綜合考慮其是否容易揮發(fā)、使用技術(shù)是否便于操作等因素，因此，下一步的研究將對其應(yīng)用性能進(jìn)行深入探討。

研究種群動態(tài)可為害蟲的綜合防控提供理論依據(jù)。本研究從5月8日開始監(jiān)測斑翅果蠅，監(jiān)測持續(xù)至11月13日，其發(fā)生盛期為8月7日—10月9日，此期正值紅樹莓結(jié)果期與收獲期，因此在這個時間段內(nèi)應(yīng)注意果蠅的爆發(fā)危害，采取相應(yīng)措施進(jìn)行預(yù)防，以保證樹莓的果品質(zhì)量。

由于時間原因，本研究僅監(jiān)測了4 種果蠅成蟲在一年之內(nèi)的發(fā)生動態(tài)及規(guī)律，其結(jié)果存在一定的局限性，今后應(yīng)進(jìn)行更長時間的種群監(jiān)測，同時還應(yīng)在多個試驗(yàn)地點(diǎn)進(jìn)行監(jiān)測，以獲得更加全面、準(zhǔn)確的數(shù)據(jù)，以期為樹莓田中果蠅的高效防控提供科學(xué)的依據(jù)。