齊喜紅，高 萌，賀 凱，張?zhí)J燕，王 慶

（寧夏藥品檢驗研究院，銀川 750001）

舒肝止痛丸全方由當歸、白芍、木香和黃芩等十八味藥組成，具有疏肝理氣、和胃止痛的功效，用于治療肝胃不和、肝氣郁結等癥狀。原標準收載于《衛(wèi)生部藥品標準》中藥成方制劑第九冊[1]，標準中只對部分藥材進行了顯微鑒定。有文獻[2-3]采用HPLC法對處方中芍藥苷或黃芩苷一種成分進行了含量測定。為了避免單指標的含量測定控制其質量的片面性，經(jīng)查閱相關文獻[4-7]，本文建立了HPLC法同時測定芍藥苷和黃芩苷的含量，以期為有效控制舒肝止痛丸的質量提供參考依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Agilent 1100高效液相色譜儀，梅特勒-托利多XS205電子天平均購自中國藥品生物制品檢定研究院。

1.2 試藥

芍藥苷對照品（批號：110736-201136）、黃芩苷對照品（批號：110715-201117）均購自中國藥品生物制品檢定研究院。甲醇、乙腈、磷酸均為色譜純，水為高純水，乙醇為分析純。6批舒肝止痛丸樣品均為太極集團重慶中藥二廠有限公司 生 產(chǎn)（批號：1011025、1112026、120407、100716、1108020、110614）。

2 方法與結果

2.1 對照品溶液的制備

分別取芍藥苷、黃芩苷對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1 mL分別含60μg的混合對照品溶液。

2.2 供試品溶液的制備

取本品適量，除去包衣，研細，取約0.5 g，精密稱定。精密加入稀乙醇溶液50 mL，密塞，稱定重量，超聲處理30 min（功率250 W，頻率40 HZ），放冷，再稱定重量。用稀乙醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，備用。

2.3 陰性溶液的制備

按舒肝止痛丸處方比例，制備缺白芍、赤芍、黃芩的陰性樣品，按2.2項下方法，制得陰性對照溶液。

2.4 色譜條件

以Phenomenex Gemini C18（250 mm×4.6 mm，5μm）為色譜柱；流動相為乙腈（A）-0.1%磷酸溶液（B），梯度洗脫程序見表1。流速為1.0 mL·min-1；波長230 nm（芍藥苷）、280 nm（黃芩苷）；進樣量為10μL。

表1 梯度洗脫程序

2.5 專屬性試驗

按2.4項下的色譜條件，測定對照品溶液、陰性對照溶液、供試品溶液。結果表明，供試品色譜中，檢出與對照品色譜峰保留時間一致的色譜峰，而陰性對照在相應保留時間無干擾，表明建立方法專屬性良好，見圖1、圖2、圖3。

2.6 線性關系的試驗

精密稱取芍藥苷對照品13.59 mg，黃芩苷對照品13.36 mg，分別置于25 mL量瓶，加甲醇至刻度，搖勻，作為對照品儲備液。精密吸取芍藥苷對照品儲備溶液0.2、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5 mL置于10 mL量瓶中；再精密吸取黃芩苷對照品儲備溶液0.2、0.4、1.0、2.0、3.0、4.0 mL置于10 mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，制成混合對照品溶液。按上述色譜條件進行測定。以對照品質量濃度C（μg）為橫坐標，峰面積A為縱坐標，進行線性回歸分析，得到芍藥苷、黃芩苷的回歸方程和相關系數(shù)分別為：A=1243.7C-0.7247，r=0.9999；A=3498.5C-7.9573，r=1。結果表明，芍藥苷和黃芩苷分別在0.1087～1.0868μg·mL-1、0.107～2.138 μg·mL-1內(nèi)具良好的線性關系。

圖1 對照品色譜圖

圖2 供試品色譜圖

2.7 精密度試驗

精密吸取芍藥苷和黃芩苷混合對照品溶液，按2.4項下色譜條件測定分析，連續(xù)進樣6次。芍藥苷和黃芩苷對照品峰面積的RSD分別為0.44%和0.50%，表明儀器的精密度良好。

圖3 陰性對照色譜圖

2.8 穩(wěn)定性試驗

取供試品溶液，分別于配制后0、2、4、6、8、12、24 h，進樣測定，結果芍藥苷和黃芩苷峰面積的RSD分別為1.5%、0.88%，表明這兩種成分在24 h內(nèi)具有良好的穩(wěn)定性。

2.9 重復性試驗

取樣品（批號：1011025），按2.2項下的方法制備供試品溶液6份，按2.4項下色譜條件測定，測得芍藥苷和黃芩苷的平均含量分別為3.5和4.6 mg·g-1，RSD分別為2.4%和2.8%。結果表明該方法重復性良好。

2.10 加樣回收試驗

取已知含量的樣品（批號：1011025）約0.25 g，精密稱取6份，分別精密加入芍藥苷對照品溶液（1.027 mg·mL-1）0.8 mL，黃芩苷對照品溶液（1.153 mg·mL-1）1 mL，按2.2項下方法制成供試品溶液，按2.4項下色譜條件測定，計算回收率。結果顯示，芍藥苷和黃芩苷的平均回收率分別為97.7%和99.2%，RSD值分別為1.38%和1.79%，見表2。

表2 舒肝止痛丸中芍藥苷和黃芩苷的回收率試驗結果

2.11 樣品的測定

取6批舒肝止痛丸樣品，按2.2項下方法制備供試品溶液，按2.4項下方法測定，計算樣品含量，見表3。

3 討論

通過二極管陣列檢測器進行全波長掃描（190～400 nm），結果芍藥苷在230 nm處有最大吸收；黃芩苷在280 nm、315 nm處有最大吸收。本次試驗結合藥典選擇了230 nm作為芍藥苷的檢測波長，280 nm作為黃芩苷的檢測波長。

本實驗考察了乙腈-水、甲醇-水體系，結果發(fā)現(xiàn)乙腈的洗脫能力優(yōu)于甲醇，基線平且靈敏度高，因此選乙腈作為流動相的有機相。同時為了改善峰形，提高待測組分的分離效果，比較了不同濃度的磷酸溶液，發(fā)現(xiàn)分離效果無明顯差別，因此選用0.1%磷酸水溶液為流動相的水相。

表3 樣品測定結果（mg·g-1）

根據(jù)各成分的結構和性質，本實驗對比了加熱回流提取法和超聲提取法，發(fā)現(xiàn)2種方法提取率相近，考慮超聲簡便快捷，故實驗選擇超聲提取法。對提取溶劑（甲醇、乙醇、70%乙醇、稀乙醇）進行考察，結果表明稀乙醇提取效率較高。

綜上，本實驗建立了HPLC法同時測定舒肝止痛丸中芍藥苷和黃芩苷含量的方法，該方法具有操作簡便、分離良好、專屬性強等特點，可有效控制舒肝止痛丸的質量。