谷紅 裴云逸

玉溪農(nóng)業(yè)職業(yè)技術(shù)學(xué)院 云南玉溪 653100

黃酮類化合物是中藥材中最常見活性物質(zhì)。研究證明：黃酮類化合物具有抗氧化、抗菌等多種生理活性及藥理作用，對人類腫瘤，心血管等疾病的治療和預(yù)防有重要意義[1]。

本文選用蘆丁為標(biāo)準(zhǔn)對照品，用紫外-可見分光光度法對甘草、葛根、黃芩、金銀花四種中藥材中總黃酮含量進(jìn)行測定。

1 儀器與材料

（1）儀器島津紫外可見分光光度計(jì)、電子天平、超聲波清洗器、粉碎機(jī)、60目篩子。

（2）材料中藥材甘草、葛根、黃芩、金銀花購自云南玉溪紅塔區(qū)，蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品（中檢所）、亞硝酸鈉（AR）、硝酸鋁（AR）、氫氧化鈉（AR）、無水乙醇（AR）、水為純凈水。

2 實(shí)驗(yàn)部分

2.1 試劑

蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液：精密稱定蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品10mg，置50ml容量瓶中，用體積分?jǐn)?shù)65%的乙醇稀釋至刻度，即得濃度為0.2mg/ml的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液[2]。

5%亞硝酸鈉溶液：稱取亞硝酸鈉2.5g，置50ml容量瓶中，加水溶解并定容至刻度，搖勻，即得。

4%氫氧化鈉溶液：稱取氫氧化鈉4g，置100ml容量瓶中，加水溶解并定容至刻度，搖勻，即得[3]。

10%硝酸鋁溶液：稱取硝酸鋁5g，置50ml容量瓶中，加水溶解并定容至刻度，搖勻，即得。

2.2 樣品處理

甘草、葛根、黃芩、金銀花中藥材粉碎，過60目篩干燥備用。各稱取1g，置50ml容量瓶，加入65%乙醇適量溶解，40℃超聲波提取45min，用65%乙醇定容至刻度，搖勻，過濾，備用。

2.3 試驗(yàn)方法

準(zhǔn)確移取上述蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液0，0.50，1.00，1.50，2.00，2.50ml，分別置10ml具塞刻度試管中，加入5%亞硝酸鈉溶液0.30ml，放置6min，加入10%硝酸鋁溶液0.30ml，放置6min，再加入4%氫氧化鈉溶液4.00ml，用65%乙醇稀釋至刻度，搖勻，放置15min，以空白溶液為參比，在508nm處測定吸光度，以測出的吸光度繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，并根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算四種中藥材中總黃酮的含量[4]。

3 結(jié)果與討論

3.1 測定波長的選擇

準(zhǔn)確移取上述蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液5.00ml，置10ml具塞刻度試管中，按上述試驗(yàn)方法操作顯色，測波定長400-600nm范圍內(nèi)進(jìn)行掃描，蘆丁最大吸收峰在508nm處，因此，試驗(yàn)選擇測定波長為508nm。

3.2 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

按上述試驗(yàn)方法對蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液系列進(jìn)行測定，以蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度（x）與吸光度值（y），繪制總黃酮含量的標(biāo)準(zhǔn)曲線，得線性回歸方程：y=13.72593x-0.00034，相關(guān)系數(shù)R=0.99930。

3.3 方法學(xué)研究

3.3.1 精密度試驗(yàn)

將樣品提取液重復(fù)測定6次，測定結(jié)果如下表1，計(jì)算其相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.49%，表明方法的精密度良好。

表1 精密度試驗(yàn)結(jié)果（n=6）%

3.3.2 穩(wěn)定性試驗(yàn)

精密吸取甘草供試品溶液適量，按上述試驗(yàn)方法操作顯色，測定吸光度值，8小時后再進(jìn)行測定，結(jié)果表明，該顯色反應(yīng)穩(wěn)定性良好[5]。

3.3.3 加樣回收率試驗(yàn)

精密吸取甘草供試品溶液0.5ml，共4份，采用加樣回收法，第1組為本底樣品，第2，3，4組分別加入0.2mg/ml的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液0.25ml，0.50ml，1.00ml，按上述試驗(yàn)方法操作，測定回收率，計(jì)算出平均回收率如下表2。

表2 加樣回收率測定結(jié)果

3.3.4 四種中藥材總黃酮的測定

精密移取上述黃芩、甘草樣品各1.00ml，金銀花樣品0.1ml，葛根樣品4ml，分別置10ml具塞刻度試管中，按上述試驗(yàn)方法操作，在508nm處測定吸光度，每個樣品重復(fù)測定2次，得到中藥材提取物中總黃酮的含量，所得結(jié)果見表3。

表3 樣品中總黃酮含量

4 結(jié)語

通過對云南常見中藥材中總黃酮的加標(biāo)回收率、精密度和穩(wěn)定性試驗(yàn)，說明NaNO2-Al（NO3）3-NaOH分光光度法準(zhǔn)確度高，簡單快速，條件容易控制，可應(yīng)用于多種中藥材提取物中總黃酮的測定。乙醇可以較廣泛地溶解各種黃酮，常用乙醇提取法提取總黃酮。