柯昌浩 王正龍 石 蓓 （遵義醫(yī)科大學(xué)心血管內(nèi)科，遵義563000）

樹突狀細(xì)胞（dendritic cell，DC）作為較特殊的抗原呈遞細(xì)胞，能有效激活初始T 細(xì)胞產(chǎn)生免疫應(yīng)答［1］。作為免疫炎癥反應(yīng)的前哨兵，DC 誘導(dǎo)免疫反應(yīng)的激活或耐受對(duì)維持免疫穩(wěn)態(tài)至關(guān)重要，而DC在免疫反應(yīng)中所扮演的角色取決于DC 的不同亞群［2-4］。一般來(lái)說(shuō)，成熟的DC 激活免疫應(yīng)答，而耐受性樹突狀細(xì)胞（tolerogenic dendritic cell，tDC）主要通過(guò)維持免疫抑制和免疫耐受下調(diào)免疫反應(yīng)［3-4］。近年來(lái)，大量文獻(xiàn)已報(bào)道DC 與多種炎癥、自身免疫性疾病、惡性腫瘤等密切相關(guān)［2，5-6］。盡管控制 DC 發(fā)育和功能的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)已經(jīng)得到了深入的研究，但表觀遺傳機(jī)制，特別是非編碼基因在這一過(guò)程中所起的作用，仍需得到充分的理解。

長(zhǎng)鏈非編碼 RNA（long non-coding RNA，lnc-RNA）是一類長(zhǎng)度超過(guò)200 個(gè)核苷酸的內(nèi)源性細(xì)胞RNA 分子，主要由 RNA 聚合酶Ⅱ（RNA polymeraseⅡ，RNAPⅡ）轉(zhuǎn)錄，其缺少一個(gè)顯著長(zhǎng)度的開放閱讀框（open reading frame，ORF），這意味著它們絕大多數(shù)不能編碼蛋白質(zhì)［7-8］。最近研究顯示，lncRNA經(jīng)過(guò)剪接、聚腺苷酸化等轉(zhuǎn)錄編輯后最終形成穩(wěn)定的結(jié)構(gòu)，參與到病理生理過(guò)程中［8］。由于lncRNA 在轉(zhuǎn)錄因子（transcription factor，TF）的募集、充當(dāng)Mi?croRNA（miRNA）海綿、轉(zhuǎn)錄沉默、表觀遺傳重編程、mRNA 的翻譯調(diào)節(jié)等方面的多重功能，其參與了包括細(xì)胞生長(zhǎng)到凋亡在內(nèi)的多種生物學(xué)途徑［9-10］。lncRNA 可通過(guò)調(diào)節(jié)先天性免疫及適應(yīng)性免疫來(lái)參與各種免疫途徑，其表達(dá)水平的失調(diào)可導(dǎo)致免疫平衡的紊亂［11-12］。

盡管lncRNA 通常表現(xiàn)出較差的進(jìn)化保守性，但lncRNA 在不同生物學(xué)過(guò)程中的差異性表達(dá)提示了它們?cè)诩?xì)胞過(guò)程中的潛在功能作用［13］。關(guān)于其在免疫細(xì)胞中的作用，這一研究仍處于起步階段。在此總結(jié)了相關(guān)lncRNA 在DC 不同階段中的相應(yīng)聯(lián)系，為將來(lái)的基礎(chǔ)和臨床研究提供新的思路。

1 lncRNA 參與調(diào)控DC 的分化發(fā)育

在炎癥反應(yīng)初期，單核細(xì)胞被招募到炎癥部位并分化為不同的DC 亞群，從而調(diào)控免疫炎癥反應(yīng)的進(jìn)行。作為一種新型調(diào)控分子，lncRNA 在單核細(xì)胞分化為DC 這一過(guò)程中的功能作用值得去探索。2014 年，WANG 等［14］通過(guò)二代測(cè)序高通量篩選方法檢測(cè)出人外周血來(lái)DC 分化發(fā)育過(guò)程中的特異性lncRNA：lnc-DC。將lnc-DC 干擾后，DC 抗原呈遞能力減弱，促炎因子分泌量減少，活化初始T細(xì)胞的功能降低，極大影響了DC 的成熟過(guò)程及其免疫功能。進(jìn)一步的機(jī)制研究顯示，細(xì)胞質(zhì)中的lnc-DC 與STAT3（signal transducer and activator of transcription 3，STAT3）的 C 端結(jié)合，促進(jìn) STAT3 羧基端 Y705 位的磷酸化，刺激STAT3 信號(hào)通路，從而調(diào)控DC 的分化。臨床研究證實(shí)，lnc-DC 在子癇、冠心病、乙型肝炎等疾病的病理生理過(guò)程中具有調(diào)節(jié)作用，其機(jī)制與 STAT3 信號(hào)通路具有相關(guān)性［15-17］。ZHANG 等［17］發(fā)現(xiàn)lnc-DC和p-STAT3的表達(dá)水平在子癇前期患者的脫膜組織中升高且呈正相關(guān)，而lnc-DC 表達(dá)量的提高導(dǎo)致了DC的過(guò)度成熟，正向調(diào)控了CD4+T細(xì)胞向Th1細(xì)胞的分化，使得免疫平衡發(fā)生改變，加強(qiáng)了子癇前期患者體內(nèi)的炎癥反應(yīng)。ZHUANG 等［16］將可分泌乙型肝炎病毒（hepatitis b virus，HBV）的人肝細(xì)胞系 HepG2.2.15 與 DC 共培養(yǎng)后發(fā)現(xiàn)，HBV 可提高lnc-DC 的表達(dá)水平，從而激活TLR9/STAT3 信號(hào)通路，正向調(diào)控免疫炎癥反應(yīng)。同樣的，ALIKHA等［15］證明了lnc-DC 在冠狀動(dòng)脈疾病患者外周血單個(gè)核細(xì)胞中的表達(dá)量增加，其表達(dá)水平的上升也與STAT3呈正相關(guān)。上述基礎(chǔ)及臨床研究證實(shí)了一種DC 源特異性 lnc RNA-DC 在 DC 的分化發(fā)育、免疫炎癥反應(yīng)平衡的改變中具有重要調(diào)控作用，描繪了lnc-DC在DC相關(guān)疾病中的診斷及治療前景。

LncRNA HOTAIRM1（HOX antisense intergenic RNA myeloid 1，HOTAIRM1）位于人類 HOXA1 和HOXA2 基因之間，在調(diào)節(jié)HOXA 簇3 端鄰近基因的表達(dá)方面具有功能作用［18-19］。HOTAIRM1 在髓系細(xì)胞中特異性表達(dá)，其在循環(huán)中性粒細(xì)胞中的高表達(dá)水平可通過(guò)刺激脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）來(lái)降低，這表明這種lncRNA 在髓系細(xì)胞的分化發(fā)育中可能具有功能作用［19］。XIN 等［20］通過(guò)表觀遺傳學(xué)分析發(fā)現(xiàn)，經(jīng)LPS 誘導(dǎo)后的成熟DC 中，HOTAIRM1區(qū)域的甲基化模式發(fā)生了動(dòng)態(tài)變化，轉(zhuǎn)錄激活標(biāo)記H3K4me3 與轉(zhuǎn)錄抑制標(biāo)記H3K27me3 水平發(fā)生改變，導(dǎo)致HOTAIRM1 表達(dá)量下降。在機(jī)制上，HO?TAIRM1 作為DC 分化的負(fù)調(diào)控因子，可以與miR-3960 和DC 分化抑制基因HOXA1 形成一個(gè)ceRNA網(wǎng)絡(luò)。HOTAIRM1 與miR-3960 的結(jié)合將促進(jìn)HOXA1 的表達(dá)水平，維持單核細(xì)胞的表型，抑制其向DC的分化。

2 lncRNA 參與調(diào)控DC 的耐受表型

tDC 主要通過(guò)低中表達(dá)共刺激分子、分泌抑炎因子、誘導(dǎo)調(diào)節(jié)性T 細(xì)胞（regulatory T cells，Treg）生成來(lái)發(fā)揮負(fù)向免疫調(diào)控功能，其在器官移植、自身免疫性疾病、腫瘤等疾病中具有重要意義。詳細(xì)了解tDC 在發(fā)揮免疫耐受作用時(shí)的基因組學(xué)變化，有利于更好地為臨床提供tDC 治療服務(wù)。lncRNA MALAT1（metastasis-associated lung adenocarcinoma transcript1，MALAT1）在人類許多細(xì)胞類型中表達(dá)極為豐富，這種lncRNA 在哺乳動(dòng)物的高度保守性提示了其功能重要性［21］。MALAT1通過(guò)抑制巨噬細(xì)胞原核因子κB（nuclear factor kappa-B，NF-κB）活性來(lái)下調(diào)炎癥反應(yīng)，證實(shí)了lncRNA MALAT1在先天免疫反應(yīng)中具有負(fù)調(diào)控作用［22］。CD80作為DC特異性共刺激分子，可加強(qiáng)抗原呈遞功能，促進(jìn)免疫炎癥反應(yīng)。MALAT1 可以與 NF-κB 形成核 RNA-蛋白復(fù)合物，阻止NF-κB 與抗原呈遞細(xì)胞中CD80 啟動(dòng)子之間的結(jié)合，降低CD80 活化初始型T 細(xì)胞的效率，以此負(fù)調(diào)控免疫炎癥反應(yīng)［23］。2018 年，WU 等［24］將過(guò)表達(dá)lncRNA MALAT1 的DC 過(guò)繼轉(zhuǎn)移到心臟移植小鼠及實(shí)驗(yàn)性自身免疫性心肌炎小鼠體內(nèi)，在這兩種實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型中，研究人員發(fā)現(xiàn)小鼠脾臟中Treg 數(shù)量增加，誘導(dǎo)了免疫耐受，降低了心臟移植后的急性排斥反應(yīng)或延緩了自身免疫性心肌炎的進(jìn)展。作為一種新型免疫耐受調(diào)節(jié)因子，MALAT1在細(xì)胞質(zhì)中通過(guò)充當(dāng)miR-155海綿促進(jìn)負(fù)免疫調(diào)控受體DC-SIGN（dendritic cell-specific intercellular ad?hesion molecule-3 grabbing nonintegrin，DC-SIGN）和抑炎因子IL-10 的產(chǎn)生，誘導(dǎo)tDC 的生成，提高Treg的表達(dá)水平，負(fù)調(diào)控免疫炎癥反應(yīng)。

長(zhǎng)鏈非編碼RNA NEAT1（nuclear paraspeckle assembly transcript 1，NEAT1）位于人類 11 號(hào)染色體上，富集于細(xì)胞核，與MALAT1位點(diǎn)相距不到70 kb，但兩者之間沒(méi)有同源性［25］。這種高保守性、廣泛表達(dá)的lncRNA 在哺乳動(dòng)物的細(xì)胞核內(nèi)具有重要的功能作用，已有相關(guān)文章報(bào)道NEAT1 在艾滋、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、惡性腫瘤等疾病中具有相應(yīng)調(diào)控作用［26-28］。2019 年，ZHANG 等［29］發(fā)現(xiàn)經(jīng) LPS 處理的DC 中 NEAT1 明顯上調(diào)。NEAT1 可充當(dāng) miRNA-3076 的海綿，從而促進(jìn)NLRP3 炎癥小體的表達(dá)，加強(qiáng)炎癥反應(yīng)。將NEAT1 干擾后可抑制共刺激分子CD80、CD86 和 MHCII 的表達(dá)水平，誘導(dǎo) DC 免疫耐受，增加Treg 的數(shù)量。NEAT1 的表達(dá)水平可被轉(zhuǎn)錄因子E2F1 調(diào)控，而miRNA let7i 可靶向與E2F1 mRNA 結(jié)合，通過(guò)控制E2F1 的表達(dá)水平來(lái)調(diào)控NEAT1。體內(nèi)研究同樣證明了NEAT1 的免疫調(diào)節(jié)作用，在小鼠實(shí)驗(yàn)性自身免疫性心肌炎和心臟移植模型中，DC 中NEAT1的下調(diào)可以誘導(dǎo)免疫耐受［29］。

MALAT1 與NEAT1 在調(diào)控DC 耐受表型中的相反作用有力地支持了多個(gè)lncRNA 協(xié)同工作以獲得免疫細(xì)胞中的特定功能狀態(tài)的觀點(diǎn)。

3 lncRNA參與調(diào)控DC的遷移能力

作為體內(nèi)功能最強(qiáng)的抗原呈遞細(xì)胞，DC 向病灶區(qū)域的遷移能力將會(huì)影響各種免疫炎癥疾病的轉(zhuǎn)歸［30-31］。CC 趨化因子受體7（CC-chemokine recep?tor 7，CCR7）可調(diào)節(jié)DC 向引流淋巴結(jié)遷移，以此誘導(dǎo)適應(yīng)性免疫［32］。盡管 CCR7 依賴性 DC 的遷移在炎癥早期對(duì)消除病原體是必要的，但及時(shí)終止過(guò)度的炎癥反應(yīng)對(duì)機(jī)體的損害也是重中之重［30-31］。2019年，LIU 等［32］通過(guò)高通量測(cè)序獲得經(jīng)CCR7刺激后的DC 源lncRNA 表達(dá)譜，篩選出一種內(nèi)含子lncRNA，命名為lnc-Dpf3。Lnc-Dpf3 可通過(guò)抑制免疫反應(yīng)重要調(diào)控因子HIF-1α 的活性，減弱CCR7 介導(dǎo)的DC遷移。有趣的是，在炎癥后期，CCR7 可去除lnc-Dpf3 的m6A 修飾，防止其降解，負(fù)反饋增加的lnc-Dpf3 通過(guò)抑制HIF-1α 依賴性糖酵解來(lái)阻礙DC 遷移，形成一個(gè)調(diào)控網(wǎng)絡(luò)［32］。當(dāng)然，lnc-Dpf3 在 DC 遷移中的調(diào)控作用仍處于起步階段，其在免疫炎癥反應(yīng)各個(gè)時(shí)間點(diǎn)的作用機(jī)制并不清晰，仍需更深入的探索。

4 lncRNA在DC及其相關(guān)疾病中的表達(dá)譜

隨著高通量測(cè)序技術(shù)的興起及生物信息學(xué)分析的發(fā)展，越來(lái)越多研究發(fā)現(xiàn)并鑒定了多種DC 源lncRNA。2009 年，GUTTMAN 等［8］首次報(bào)告了 lnc-RNA 在DC 中的潛在作用。研究人員用Toll 樣受體4（toll-like receptor 4，TLR4）激動(dòng)劑刺激CD11c+小鼠骨髓源性DC，發(fā)現(xiàn)有20 種lincRNA 明顯上調(diào)。其中，表達(dá)水平變化最大的lincRNA-COX2 富集于炎癥介質(zhì)COX2 蛋白編碼基因處［8］。這種高度保守的lncRNA 可被NF-κB介導(dǎo)，通過(guò)靶向巨噬細(xì)胞或小膠質(zhì)細(xì)胞調(diào)控先天性免疫反應(yīng)［33-34］。在臨床研究中，CHEN 等［35］使用基因芯片技術(shù)對(duì)經(jīng)胰腺癌源外泌體治療的DC與正常DC進(jìn)行表達(dá)譜分析，發(fā)現(xiàn)3 227個(gè)差異性表達(dá)的lncRNA，經(jīng)生信分析篩選及定量聚合酶鏈反應(yīng)（quantitative polymerase chain reaction，qPCR）鑒定，發(fā)現(xiàn) lncRNA-ENST00000560647 可與5 個(gè)胰腺癌相關(guān)miRNA 結(jié)合，但其在胰腺癌中的作用及其機(jī)制并未闡述。另外，WANG 等［36］分析了系統(tǒng)性紅斑狼瘡（systemic lupus erythematosus，SLE）患者外周血來(lái)源DC 的lncRNA 表達(dá)譜，與正常對(duì)照組對(duì)比后，發(fā)現(xiàn)有163 個(gè)lncRNA 差異性表達(dá)。其中，差異性表達(dá)的lncRNA ESIX 及l(fā)ncRNA NEAT1 與SLEDAI 評(píng)分呈正相關(guān)，提示其在SLE 中的潛在作用。綜上，DC源lncRNA經(jīng)體內(nèi)外環(huán)境刺激后，其表達(dá)量的改變與DC 相關(guān)性疾病具有聯(lián)系。隨著進(jìn)一步的發(fā)掘與探索，DC 源lncRNA 或可成為免疫性疾病中重要的診斷生物標(biāo)記物或潛在的治療靶點(diǎn)。

5 結(jié)語(yǔ)

隨著高通量測(cè)序技術(shù)的發(fā)展，越來(lái)越多的lnc-RNA 被證實(shí)參與DC 的生物學(xué)過(guò)程中，從而調(diào)控免疫炎癥反應(yīng)的平衡。但總體而言，lncRNA 與DC 的研究仍處于起步階段。目前，lncRNA 在DC 中的具體作用機(jī)制尚不明確，且臨床試驗(yàn)偏少。lncRNA能否成為DC 相關(guān)性自身免疫性疾病、移植排斥反應(yīng)、惡性腫瘤中的診斷標(biāo)記物及藥物靶點(diǎn)，仍需要不斷的思考與探索。當(dāng)然，隨著新興技術(shù)的發(fā)展，本課題組相信，當(dāng)lncRNA 的神秘面紗被層層解開時(shí)，DC 相關(guān)免疫性疾病的診斷及治療將開啟新篇章。