王珊，劉亞倩，侯敏娜，王青，劉艷紅，陳衍斌，彭修娟，許海燕*（.陜西國際商貿(mào)學(xué)院，陜西 咸陽 7046；.陜西步長制藥有限公司，西安 70075）

腦卒中后PSCI（post-stroke cognitive impairment，PSCI）泛指在卒中后6 個月內(nèi)出現(xiàn)認(rèn)知障礙表現(xiàn)的一系列綜合征，其會影響患者的記憶力、執(zhí)行力，增加致殘率、病死率、卒中再發(fā)率，嚴(yán)重影響患者的日常生活，降低患者生活質(zhì)量，嚴(yán)重者可發(fā)展為阿爾茨海默癥（AD），給患者家庭和社會帶來巨大的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)[1]。中醫(yī)將PSCI 歸于呆病范疇，認(rèn)為其病位在腦，關(guān)乎肝、腎、心、脾，腎虧為本，五臟相關(guān)；以精虧為本，以痰瘀為標(biāo)；以腎精虧虛、氣血虧虛、痰濁阻竅、瘀血阻絡(luò)為臨床常見證型[2]。中醫(yī)治療以補(bǔ)腎填精、活血化瘀、開竅化痰為主[1]。龍生蛭膠囊是由黃芪、水蛭、川芎、當(dāng)歸、紅花、地龍、刺五加等12 味中藥組成的中成藥制劑，具有補(bǔ)氣活血、逐瘀通絡(luò)的功效，臨床主要應(yīng)用于動脈粥樣硬化性腦梗死的恢復(fù)期，中醫(yī)辨證為氣虛血瘀型中風(fēng)經(jīng)絡(luò)者的治療[3]。龍生蛭膠囊自上市后在治療腦卒中及防止、減輕PSCI 方面療效確切，安全性高，臨床反應(yīng)良好，尤其是對氣虛血瘀型血管性癡呆患者認(rèn)知功能改善方面效果極佳[4-6]。但是目前有關(guān)龍生蛭膠囊治療PSCI 的作用機(jī)制研究甚少。根據(jù)中醫(yī)理論可將龍生蛭膠囊方中各藥分為活血化瘀藥（水蛭、川芎、紅花、桃仁），補(bǔ)虛藥（黃芪、當(dāng)歸、刺五加），清熱藥（赤芍），其他藥（木香、石菖蒲、地龍、桑寄生）。結(jié)合PSCI 發(fā)病機(jī)制其以虛證為本的中醫(yī)病機(jī)，本文推測龍生蛭膠囊具有防治PSCI 的作用機(jī)制可能與方中補(bǔ)虛藥組有緊密的相關(guān)性。因此本研究嘗試通過拆方的形式，以方劑中補(bǔ)虛藥組—— “黃芪-當(dāng)歸-刺五加”為研究對象，通過動物實(shí)驗(yàn)結(jié)合網(wǎng)絡(luò)預(yù)測的形式來揭示龍生蛭膠囊治療PSCI 的作用機(jī)制，為龍生蛭膠囊的進(jìn)一步開發(fā)利用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 “黃芪-當(dāng)歸-刺五加”藥組治療PSCI 的實(shí)驗(yàn)研究

1.1.1 材料 “黃芪-當(dāng)歸-刺五加”藥組（黃芪、當(dāng)歸、刺五加3 味藥的劑量同方劑中的劑量，由陜西步長制藥提供，經(jīng)陜西國際商貿(mào)學(xué)院雷國蓮教授鑒定）。尼莫地平片（天津市中央藥業(yè)有限公司，批號： 170618）；丙二醛（MDA，批號：20160901）、超氧化物歧化酶（SOD，批號：20160919）試劑盒（南京建成生物工程研究所）；Morris 水迷宮視頻跟蹤系統(tǒng)（成都泰盟）。

1.1.2 動物分組、造模期藥物干預(yù) 60 只健康雄性SPF 級SD 大鼠[西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動物中心，動物許可證號 SYXK-R（陜）2012-003]，體質(zhì)量（220±23）g，動物實(shí)驗(yàn)經(jīng)陜西國際商貿(mào)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動物倫理委員會批準(zhǔn)。大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后按照體質(zhì)量隨機(jī)分組，分為模型組，假手術(shù)組，尼莫地平組，龍生蛭膠囊高、中、低劑量組。采用血管內(nèi)拴線阻斷法永久性阻斷左側(cè)大鼠大腦中動脈，制成大鼠腦缺血性中風(fēng)模型[7-8]。假手術(shù)組大鼠進(jìn)行相同操作，但不夾閉血管，不插入栓線。手術(shù)后出現(xiàn)對側(cè)的前爪無法充分伸展活動、出現(xiàn)向外側(cè)轉(zhuǎn)圏、無法正常行走或行走時(shí)向?qū)?cè)傾倒的大鼠認(rèn)為造模成功，并進(jìn)行下一步的實(shí)驗(yàn)研究。

模型組灌胃給予10 mL·kg－1的生理鹽水；尼莫地平組灌胃給予1.2 g·L－1的尼莫地平混懸液；“黃芪-當(dāng)歸-刺五加”藥組給藥量根據(jù)臨床常用劑量，按照人和動物間體表面積折算的等效劑量比值進(jìn)行換算，分別得到“黃芪-當(dāng)歸-刺五加”藥組低劑量 0.24 g·kg－1、中劑量0.48 g·kg－1、高劑量 0.96 g·kg－1。每日灌胃1 次，共灌胃12 d，從給藥第 10日起按照學(xué)習(xí)記憶訓(xùn)練的方法進(jìn)行訓(xùn)練，連續(xù)訓(xùn)練3 d；于給藥第 12日進(jìn)行水迷宮檢測實(shí)驗(yàn)。

1.1.3 Morris 水迷宮實(shí)驗(yàn) 實(shí)驗(yàn)分為定位航行實(shí)驗(yàn)和空間探索實(shí)驗(yàn)兩部分，實(shí)驗(yàn)前先進(jìn)行訓(xùn)練3 d。大鼠每日訓(xùn)練一次，分別從4 個不同入水點(diǎn)面壁入水。定位航行實(shí)驗(yàn)：每只大鼠從任意一個入水點(diǎn)入水，記錄大鼠120 s 內(nèi)找到平臺所需的時(shí)間（即潛伏期），若120 s 內(nèi)沒有找到平臺，逃避潛伏期計(jì)為120 s?？臻g搜索實(shí)驗(yàn)：定位航行實(shí)驗(yàn) 3 h 后撤出平臺，由任意一個入水點(diǎn)將大鼠面向池壁放入水中。記錄大鼠120 s 內(nèi)穿過原平臺位置的次數(shù)和在原平臺象限游泳時(shí)間占總時(shí)間（120 s）的百分比。

1.1.4 血清SOD 活性和MDA 含量檢測 實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，麻醉大鼠，腹主動脈取血，離心取血清，按照試劑盒方法測定SOD 活性和MDA 含量。

1.2 基于TCMIP V2.0 分析“黃芪-當(dāng)歸-刺五加”藥組治療PSCI 的作用機(jī)制

1.2.1 化學(xué)成分來源 在TCMIP V2.0 平臺（www.tcmip.cn）的中藥材數(shù)據(jù)中搜索“黃芪”“當(dāng)歸”和“刺五加”，收集3 種中藥材的化學(xué)成分及所對應(yīng)的靶標(biāo)，建立龍生蛭膠囊中“黃芪-當(dāng)歸-刺五加”藥組的化學(xué)成分?jǐn)?shù)據(jù)庫。

1.2.2 候選靶標(biāo)來源 在TCMIP V2.0 平臺的疾病分子相關(guān)數(shù)據(jù)庫中，以“post-stroke cognitive impairment”作為疾病關(guān)鍵詞進(jìn)行搜索，收集PSCI 的所有靶標(biāo)，作為候選疾病靶標(biāo)。在中藥靶標(biāo)預(yù)測功能模塊中通過化學(xué)成分二維結(jié)構(gòu)（.mol或.sdf）相似性與美國食品藥品管理局（FDA）上市藥物進(jìn)行比對，以Tanimoto 系數(shù)定義的相似度計(jì)量方法進(jìn)行相似性打分，選擇相似性分?jǐn)?shù)≥0.8的藥物所對應(yīng)的靶標(biāo)為“黃芪-當(dāng)歸-刺五加”藥組潛在候選靶標(biāo)。

1.2.3 網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建和關(guān)鍵網(wǎng)絡(luò)靶標(biāo)基因功能挖掘分析 通過TCMIP V2.0 平臺中的中醫(yī)藥關(guān)聯(lián)網(wǎng)絡(luò)挖掘工具，基于目標(biāo)疾病基因（PSCI）和中藥（黃芪-當(dāng)歸-刺五加）候選靶標(biāo)之間的相互作用信息，可構(gòu)建“疾病基因-藥物靶標(biāo)分子網(wǎng)絡(luò)”。該平臺通過計(jì)算網(wǎng)絡(luò)節(jié)點(diǎn)的連接度（Degree）、介度（Betweenness）和緊密度（Closeness），篩選網(wǎng)絡(luò)中的核心節(jié)點(diǎn)基因，并實(shí)現(xiàn)核心節(jié)點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)的可視化。根據(jù)中藥材-中藥成分-核心靶標(biāo)-通路-疾病之間的關(guān)聯(lián)性，任意選擇不同類型的節(jié)點(diǎn)，構(gòu)建多維關(guān)聯(lián)網(wǎng)絡(luò)圖并對其進(jìn)行分析挖掘得到“黃芪-當(dāng)歸-刺五加”干預(yù)PSCI 的可能有效成分、靶標(biāo)及通路。

2 結(jié)果

2.1 “黃芪-當(dāng)歸-刺五加”藥組治療PSCI 的實(shí)驗(yàn)研究

2.1.1 對腦卒中大鼠行為學(xué)的影響 在定位航行實(shí)驗(yàn)中，與假手術(shù)組相比，模型組大鼠的逃避潛伏期顯著延長、尋臺次數(shù)均明顯減少；與模型組相比，尼莫地平組、“黃芪-當(dāng)歸-刺五加”藥組各劑量組的逃避潛伏期顯著縮短，尼莫地平組和“黃芪-當(dāng)歸-刺五加”藥組中劑量組尋臺次數(shù)均明顯增加。在空間探索實(shí)驗(yàn)中，與假手術(shù)組比較，模型組穿越原平臺次數(shù)、原平臺象限游泳時(shí)間占總游泳時(shí)間百分比均顯著減少；與模型組比較，尼莫地平組和“黃芪-當(dāng)歸-刺五加”藥組中劑量組穿越原平臺次數(shù)均明顯增加，尼莫地平組和“黃芪-當(dāng)歸-刺五加”藥組各劑量原平臺象限游泳時(shí)間占總游泳時(shí)間百分比均明顯增加，結(jié)果見表1。

表1 “黃芪-當(dāng)歸-刺五加”藥組對大鼠水迷宮實(shí)驗(yàn)的影響(±s，n ＝10)Tab 1 Effect of Astragalus-Angelica sinensis-Schisandra chinensis drug group on Morris water maze test in rats (±s，n ＝10)

表1 “黃芪-當(dāng)歸-刺五加”藥組對大鼠水迷宮實(shí)驗(yàn)的影響(±s，n ＝10)Tab 1 Effect of Astragalus-Angelica sinensis-Schisandra chinensis drug group on Morris water maze test in rats (±s，n ＝10)

注：與假手術(shù)組比較，**P ＜0.01；與模型組比較，△P ＜0.05，△△P ＜0.01。Note：Compared with the sham group，**P ＜0.01；compared with the model group，△P ＜0.05，△△P ＜0.01.

組別 逃避潛伏期/s 尋臺次數(shù)/次 穿越原平臺次數(shù)/次 原平臺象限游泳時(shí)間占總游泳時(shí)間百分比/%假手術(shù)組 38.5±5.82 4±1.16 7±2.05 32.33±9.09模型組 52.7±5.33** 1.7±0.95** 2.4±1.17** 19.08±5.02**尼莫地平組 39.6±5.62△△ 2.5±0.97△ 6.0±1.76△△ 28.08±5.20△△“黃芪-當(dāng)歸-刺五加”高劑量組 46.9±5.34△ 1.8±0.79 3.7±1.64 25.25±7.54△“黃芪-當(dāng)歸-刺五加”中劑量組 44.6±5.85△△ 2.4±0.97△ 4.0±1.25△△ 27.83±9.79△“黃芪-當(dāng)歸-刺五加”低劑量組 45.7±6.58△ 1.6±0.70 3.0±1.33 27.33±8.90△

2.1.2 對腦卒中大鼠血清生化學(xué)的影響 與假手術(shù)組相比，模型組SOD 活性顯著降低、MDA 含量顯著升高；與模型組比較，尼莫地平組、“黃芪-當(dāng)歸-刺五加”各劑量組能明顯提高SOD 活性和降低MDA 含量，結(jié)果見表2。

表2 “黃芪-當(dāng)歸-刺五加”藥組對大鼠血清中SOD、MDA 水平的影響(±s，n ＝10)Tab 2 Effect of Astragalus-Angelica sinensis-Schisandra chinensis drug group on SOD and MDA of rats serum(±s，n ＝10)

表2 “黃芪-當(dāng)歸-刺五加”藥組對大鼠血清中SOD、MDA 水平的影響(±s，n ＝10)Tab 2 Effect of Astragalus-Angelica sinensis-Schisandra chinensis drug group on SOD and MDA of rats serum(±s，n ＝10)

注：與假手術(shù)組比較，*P ＜0.05；與模型組比較，△P ＜0.05。Note：Compared with the sham group，*P ＜0.05；compared with the model group，△P ＜0.05.

組別 SOD/U·mL－1MDA/μmol·L－1假手術(shù)組 86.93±28.65 4.34±0.59模型組 60.34±25.71* 5.01±0.52*尼莫地平組 87.73±25.77△ 4.53±0.48△“黃芪-當(dāng)歸-刺五加”高劑量組 83.72±22.98△ 4.58±0.30△“黃芪-當(dāng)歸-刺五加”中劑量組 81.42±17.05△ 4.42±0.64△“黃芪-當(dāng)歸-刺五加”低劑量組 81.79±13.00△ 4.50±0.49△

2.2 龍生蛭膠囊中“黃芪-當(dāng)歸-刺五加”藥組治療PSCI 作用機(jī)制的整合藥理學(xué)分析

2.2.1 “黃芪-當(dāng)歸-刺五加”藥組治療PSCI 的“藥物靶標(biāo)-疾病靶標(biāo)”核心網(wǎng)絡(luò)分析 共得到166 個與認(rèn)知障礙以及藥物相關(guān)核心網(wǎng)絡(luò)靶標(biāo)，其中藥物相關(guān)靶標(biāo)48 個，與疾病相關(guān)靶標(biāo)118 個。同時(shí)利用 PPI 模塊構(gòu)建核心網(wǎng)絡(luò)靶標(biāo)圖（見圖1），平臺設(shè)定同時(shí)滿足大于節(jié)點(diǎn)“連接度”“介度”“緊密度”的中位數(shù)為卡值，得到關(guān)鍵核心靶標(biāo)75個，藥物與疾病的共有靶標(biāo)11 個（AKT1、TP53、SDHA、SDHC、SDHB、SDHD、CHRM3、ATP1A3、SCN8A、GNAS、UQCRC2）。

2.2.2 “黃芪-當(dāng)歸-刺五加”藥組治療PSCI 的“中藥-靶標(biāo)-通路-疾病”網(wǎng)絡(luò)可視化圖分析運(yùn)用整合藥理學(xué)平臺獲得了“黃芪-當(dāng)歸-刺五加”藥組干預(yù)PSCI 的關(guān)鍵核心靶標(biāo)，推測“黃芪-當(dāng)歸-刺五加”藥組可能是通過作用于藥物與疾病共有靶標(biāo)來發(fā)揮對PSCI 的干預(yù)作用進(jìn)而發(fā)揮藥效，并利用核心靶標(biāo)及其與中藥成分和疾病之間的關(guān)系繪制 “中藥-成分-關(guān)鍵藥靶-通路”網(wǎng)絡(luò)可視化圖（見圖2），干預(yù)PSCI 的關(guān)鍵靶標(biāo)75 個，主要與27 個化學(xué)成分有關(guān)，其中刺五加21 個，分別為刺五加苷A、B、C1、D1、D2、I、K、L、蒼耳苷、丁香酸、齊墩果酸、樺木酸、熊果酸等；當(dāng)歸4 個，分別為棕櫚酸、肉豆蔻酸、二十四酸、豆甾醇-β-D-葡糖苷；黃芪3 個，分別為黃芪甲苷Ⅲ、華良姜素、棕櫚酸。

核心靶標(biāo)基因功能涉及蛋白質(zhì)去泛素化、G2/M 過渡有絲分裂細(xì)胞周期、自噬調(diào)節(jié)、線粒體電子傳輸、質(zhì)子跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)、睫狀基體-質(zhì)膜對接、電子傳輸鏈、凋亡過程、核苷酸切除修復(fù)等。作用靶點(diǎn)主要參與核受體轉(zhuǎn)錄途徑、SLC2A4（GLUT4）向質(zhì)膜的轉(zhuǎn)運(yùn)、TP53 調(diào)控DNA 修復(fù)基因的轉(zhuǎn)錄、基底體與質(zhì)膜的錨定、細(xì)胞核向有絲分裂中心體的募集、磷酸化對TP53 活性的調(diào)節(jié)、IKKs 復(fù)合物激活NF-κB 等。

3 討論

近年來隨著現(xiàn)代社會人口老齡化，腦卒中患者數(shù)量日益增多，PSCI 逐漸成為當(dāng)前國內(nèi)外卒中領(lǐng)域研究與干預(yù)的熱點(diǎn)。中醫(yī)中藥在防治PSCI 方面發(fā)揮多靶點(diǎn)、多層面、標(biāo)本兼顧的作用，多項(xiàng)研究表明中醫(yī)中藥具有改善卒中后神經(jīng)功能缺損和PSCI 的作用[9-11]。在對中醫(yī)治療PSCI 用藥規(guī)律分析中發(fā)現(xiàn)，補(bǔ)虛藥使用頻數(shù)最多，其中黃芪和當(dāng)歸排在前十位，黃芪為補(bǔ)虛藥中的補(bǔ)氣藥，其補(bǔ)氣治本，可補(bǔ)氣行血，補(bǔ)氣以通痹；當(dāng)歸為補(bǔ)虛藥中的補(bǔ)血藥，其可補(bǔ)血活血，且其活血而不傷血；刺五加為補(bǔ)虛藥中的補(bǔ)氣藥，能補(bǔ)益心脾之氣，益肺補(bǔ)腎[12]。結(jié)合PSCI 的發(fā)病機(jī)制這也說明該藥組治療PSCI 的可靠性及龍生蛭膠囊組方的合理性。

3.1 “黃芪-當(dāng)歸-刺五加”藥組治療PSCI 的實(shí)驗(yàn)研究

Morris 水迷宮實(shí)驗(yàn)是用于評估嚙齒動物空間學(xué)習(xí)和記憶能力最常用的方法之一。大量研究已證實(shí)學(xué)習(xí)記憶和海馬關(guān)系密切，紋狀體邊緣區(qū)與前額葉皮質(zhì)也參與學(xué)習(xí)記憶過程。在評價(jià)海馬依賴性的空間學(xué)習(xí)和記憶功能時(shí)，Morris 水迷宮實(shí)驗(yàn)結(jié)果可靠[13-14]。因此本研究采用Morris 水迷宮實(shí)驗(yàn)來評價(jià)該藥組對腦卒中大鼠行為學(xué)的影響具有合理性。

研究發(fā)現(xiàn)，氧化應(yīng)激是缺血性腦卒中的重要病理生理變化之一[15]。MDA 是多不飽和脂肪酸氧化的副產(chǎn)物，被用作氧化應(yīng)激的標(biāo)志，當(dāng)其超過機(jī)體內(nèi)最主要的抗氧化物酶 SOD 的清除能力，會使自由基異常堆積，造成神經(jīng)元細(xì)胞凋亡或壞死[16]。因此本實(shí)驗(yàn)對模型組和給藥組大鼠血清中的SOD 和MDA 進(jìn)行測定，從而評價(jià)“黃芪-當(dāng)歸-刺五加”藥組對大鼠血清生化學(xué)的影響。

研究結(jié)果顯示，“黃芪-當(dāng)歸-刺五加”藥組對PSCI 大鼠的空間記憶能力和學(xué)習(xí)能力具有良好的改善作用；同時(shí)藥組還能顯著降低模型腦卒中大鼠血清中MDA 的含量，提高SOD 的活性。孫曉麗等[8]研究發(fā)現(xiàn)，龍生蛭膠囊能夠改善大鼠的神經(jīng)功能缺陷，提高大鼠的肌力和自主運(yùn)動能力，其對腦組織的保護(hù)作用可能與抗氧化，抑制NF-κB 以及Caspase-3 的表達(dá)有關(guān)。本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果與其基本一致，提示龍生蛭膠囊發(fā)揮改善PSCI 作用可能與“黃芪-當(dāng)歸-刺五加”藥組抗PSCI 作用有關(guān)。

3.2 “黃芪-當(dāng)歸-刺五加”藥組治療PSCI 的作用機(jī)制研究

在對“藥物靶標(biāo)-疾病靶標(biāo)”分析中得到AKT1 等多個核心靶標(biāo)。有研究發(fā)現(xiàn)，AKT1 能介導(dǎo)癌癥和心血管疾病，促進(jìn)血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）分泌并介導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞一氧化氮合酶（eNOS）磷酸化過程，AKT1 可能在許多心血管病理過程中均發(fā)揮重要作用[17]。李劍虹等[18]探討腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子（BDNF）信號傳導(dǎo)通路中AKT1 基因多態(tài)性與抑郁障礙及認(rèn)知功能的關(guān)系中發(fā)現(xiàn)，AKT1基因SNPrs3001371 多態(tài)性與重性抑郁障礙的認(rèn)知功能損傷存在關(guān)聯(lián)性，研究發(fā)現(xiàn)，PI3K/Akt 通路失衡會產(chǎn)生嚴(yán)重的學(xué)習(xí)記憶障礙，Akt1 缺乏小鼠表現(xiàn)為空間記憶受影響[19]。閻卉芳[20]研究發(fā)現(xiàn)黃芪當(dāng)歸配伍對血管內(nèi)皮受損后內(nèi)膜增生具有抑制作用，其作用與抑制血管內(nèi)皮受損后血管平滑肌細(xì)胞（VSMCs）的表型轉(zhuǎn)化和增殖有關(guān)，其作用機(jī)制可能是通過抑制PI3K/Akt 信號通路活化，從而抑制VSMCs 增殖。

圖1 核心靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)Fig 1 Network for key targets

圖2 “中藥-成分-關(guān)鍵靶標(biāo)-通路”多維關(guān)聯(lián)網(wǎng)絡(luò)Fig 2 Multi-dimensional network of Chinese materia medica-component-key target-pathway

在活性成分方面的研究顯示，藥組治療PSCI可能與黃芪甲苷、刺五加皂苷、有機(jī)酸等有關(guān)。有研究發(fā)現(xiàn)黃芪甲苷對腦損傷引發(fā)的神經(jīng)損傷也有一定的保護(hù)作用[21]。晏燕[22]研究發(fā)現(xiàn)，黃芪甲苷能夠改善Aβ25-35誘導(dǎo)AD 模型大鼠的學(xué)習(xí)和記憶能力，能夠顯著減輕Aβ誘導(dǎo)的神經(jīng)元損傷，黃芪甲苷能夠顯著增加抗氧化酶GSH-Px 和SOD 的活性，降低海馬組織MDA 的含量，且能改善AD大鼠學(xué)習(xí)記憶功能和海馬區(qū)神經(jīng)元損傷，其作用機(jī)制可能與其抗氧化應(yīng)激有關(guān)。黃芪注射液具有改善慢性腦缺血患者認(rèn)知功能，機(jī)制可能與其改善腦血流和血液流變學(xué)等作用有關(guān)[23]。當(dāng)歸提取物可劑量依賴性地減弱Aβ1-42誘導(dǎo)的神經(jīng)毒性和tau 蛋白磷酸化，同時(shí)，其能增加Akt 的絲氨酸磷酸化水平，并下調(diào)GSK-3β活性，說明當(dāng)歸提取物保護(hù)神經(jīng)細(xì)胞的作用與PI3K/Akt/GSK-3β信號通路有關(guān)[24]。研究發(fā)現(xiàn)，刺五加皂苷能活化海馬神經(jīng)元膽堿乙?；福–hAc），增強(qiáng)海馬膽堿能神經(jīng)功能；調(diào)節(jié)NOS 活性，偶聯(lián)神經(jīng)活動與腦血流量，促進(jìn)遞質(zhì)釋放；激活Na＋-K＋-ATP 酶，促進(jìn)與學(xué)習(xí)記憶有關(guān)的神經(jīng)遞質(zhì)釋放，調(diào)節(jié)神經(jīng)元的興奮性，改善大腦活動的質(zhì)量；增強(qiáng)SOD 活性，加速氧自由基的清除，減輕海馬神經(jīng)元損傷，保護(hù)海馬神經(jīng)元，維系膽堿能神經(jīng)的可塑性；抑制血清單胺氧化酶（MAO）活性，減少兒茶酚胺的代謝，改善腦功能活動[25]，因此其能提高學(xué)習(xí)記憶能力及改善腦組織生化學(xué)的改變，較好地改善PSCI 的臨床癥狀[26-28]。

在對核心靶標(biāo)基因功能分析中，發(fā)現(xiàn)其與自噬調(diào)節(jié)、線粒體電子傳輸?shù)榷鄠€基因功能有關(guān)。研究發(fā)現(xiàn)線粒體功能障礙是PSCI 的早期特征，其受損可導(dǎo)致大腦功能受損，并會導(dǎo)致AD 患者中的神經(jīng)元變性[29]。線粒體自噬可以清除損傷的線粒體，線粒體自噬的發(fā)生依賴線粒體自噬受體的調(diào)控[30]。其分子通路涉及核受體轉(zhuǎn)錄途徑、磷酸化對TP53 活性的調(diào)節(jié)等。核受體是一類配體誘導(dǎo)的轉(zhuǎn)錄因子超家族，核受體可參與調(diào)節(jié)包括脂質(zhì)生物活性在內(nèi)的各種細(xì)胞內(nèi)生物學(xué)過程[31]。研究發(fā)現(xiàn)，核受體編碼基因變異導(dǎo)致膽固醇產(chǎn)生過量及輸出障礙，致病性Aβ肽過量產(chǎn)生，會產(chǎn)生PSCI，且最終導(dǎo)致AD[32]。研究發(fā)現(xiàn)，海馬tau 蛋白的異常磷酸化可能在神經(jīng)細(xì)胞調(diào)亡和認(rèn)知功能損傷中起到了重要的作用[33]。已經(jīng)有大量基礎(chǔ)研究和部分臨床研究發(fā)現(xiàn)tau 蛋白顯著的磷酸化會同時(shí)伴有認(rèn)知功能的損傷[34]?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)發(fā)現(xiàn)這些靶標(biāo)功能和分子通路多與神經(jīng)系統(tǒng)、循環(huán)系統(tǒng)、內(nèi)分泌系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)有關(guān)。現(xiàn)代醫(yī)學(xué)發(fā)現(xiàn)神經(jīng)-內(nèi)分泌-免疫網(wǎng)絡(luò)系統(tǒng)調(diào)節(jié)功能的表達(dá)異常，導(dǎo)致神經(jīng)系統(tǒng)、內(nèi)分泌系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)功能表達(dá)異常，從而導(dǎo)致腦部疾病的發(fā)生[35]。

綜上所述，本研究采用實(shí)驗(yàn)研究與整合藥理學(xué)相結(jié)合的技術(shù)和方法，綜合評價(jià)“黃芪-當(dāng)歸-刺五加”藥組對PSCI 的影響及作用機(jī)制。本研究發(fā)現(xiàn) “黃芪-當(dāng)歸-刺五加”藥組能較好地改善PSCI 大鼠的行為和學(xué)習(xí)記憶力，同時(shí)也通過TCMIP V2.0 網(wǎng)絡(luò)大數(shù)據(jù)對藥組治療PSCI 的作用機(jī)制進(jìn)行了預(yù)測，發(fā)現(xiàn)“黃芪-當(dāng)歸-刺五加”藥組治療PSCI 可能通過多分子、多靶點(diǎn)、多通路相協(xié)同作用，但還需要進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證。