辛玉琦，田蕾，王曉慧

宮頸癌是世界第三大威脅女性生命健康的癌癥，人乳頭瘤病毒（human papillomavirus，HPV）的感染已被確定為致癌因素之一[1]。隨著預防疫苗和篩查等早期診斷手段的普及，宮頸癌的發(fā)病率及死亡率有所降低，但據(jù)世界衛(wèi)生組織（World Health Organization，WHO）報道，宮頸癌仍然是對女性生命最嚴重的威脅之一[2]。晚期復發(fā)和轉(zhuǎn)移是影響宮頸癌預后的主要因素，且晚期宮頸癌療效差，預后不佳，晚期患者的中位生存期只有16.8 個月[3]。因此，早期發(fā)現(xiàn)、早期治療對于改善宮頸癌患者的預后起到至關(guān)重要的作用。這就需要進一步的分子研究，尋找新的生物靶點。近年來長鏈非編碼RNA（long noncoding RNA，lncRNA）因在包括癌癥在內(nèi)的人類疾病中的作用而受到越來越多的關(guān)注。多項研究表明，lncRNA 與宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展有著密切關(guān)系。lncRNA 在表觀遺傳改變、基因增強子和抑癌活性、微小RNA（microRNA，miRNA）分離等細胞過程中發(fā)揮重要作用，為宮頸癌的診斷和治療提供新的重要靶點[4]。本文就lncRNA 在宮頸癌發(fā)生、發(fā)展中作用的研究進展進行綜述。

1 lncRNA

1.1 lncRNA 概述lncRNA 屬于非編碼RNA（ncRNA）家族，由200 多個通常不編碼蛋白質(zhì)的核苷酸組成，lncRNA 參與多種生物過程，如染色體重構(gòu)、表觀遺傳調(diào)節(jié)、轉(zhuǎn)錄和轉(zhuǎn)錄后修飾、細胞增殖和分化等，其對機體生理功能的調(diào)節(jié)主要從表觀遺傳學、轉(zhuǎn)錄和轉(zhuǎn)錄后3 個方面來實現(xiàn)。研究表明，lncRNA 具有以下共同特征：①編碼lncRNA 的基因在染色質(zhì)狀態(tài)上與編碼蛋白的基因相似，如啟動子H3K4me3 和轉(zhuǎn)錄區(qū)域的H3K36me3；②lncRNA 的表達受多種常見的轉(zhuǎn)錄因子調(diào)控；③與編碼基因一樣，lncRNA 也由RNA 聚合酶Ⅱ轉(zhuǎn)錄，一般通過剪接小體進行剪接，具有多聚腺苷酸尾[5]。lncRNA 以多種形式發(fā)揮功能：①順式或反式轉(zhuǎn)錄的調(diào)節(jié)因子；②mRNA 處理、轉(zhuǎn)錄后控制和蛋白質(zhì)活性的調(diào)節(jié)因子；③核域組織。然而絕大多數(shù)lncRNA 的生物學功能發(fā)揮途徑仍不確定，而且其復雜性不僅僅取決于功能[6]。lncRNA 的分類方法有多種，根據(jù)其DNA 片段在基因組中的位置，至少可分為以下4 類：①基因間lncRNA，即lincRNAs，由兩個蛋白質(zhì)編碼基因之間的DNA 序列轉(zhuǎn)錄而來；②內(nèi)含子lncRNA，是由蛋白編碼基因內(nèi)含子產(chǎn)生的；③重疊lncRNA，為轉(zhuǎn)錄本與已知蛋白編碼基因重疊；④反義lncRNA，由蛋白編碼基因反向轉(zhuǎn)錄而來。大多數(shù)lncRNA 都可以調(diào)節(jié)基因表達，因此，它們可參與到癌癥生物學的多種過程中。lncRNA 介導的基因調(diào)控涉及多種機制，例如lncRNA 可以作為促進轉(zhuǎn)錄的信號、抑制轉(zhuǎn)錄的誘餌、表觀遺傳調(diào)控因子，或作為支架與各種蛋白相互作用形成核糖核酸蛋白復合物。根據(jù)基因表達水平，lncRNA 介導的基因表達大多發(fā)生在轉(zhuǎn)錄水平和（或）轉(zhuǎn)錄后水平。轉(zhuǎn)錄水平上，lncRNA 參與直接轉(zhuǎn)錄，其通過與轉(zhuǎn)錄復合體或轉(zhuǎn)錄啟動子等DNA 元件相互作用，參與調(diào)控基因的表達或抑制。轉(zhuǎn)錄后調(diào)控主要涉及mRNA 的穩(wěn)定性、剪接和修飾，還包括蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性和翻譯調(diào)控以及亞細胞定位。選擇性剪接為實現(xiàn)遺傳多樣性的關(guān)鍵機制，對癌癥的發(fā)生和發(fā)展起重要作用。翻譯調(diào)控為lncRNA 介導基因表達的另一種機制。lncRNA 還可作為支架，與多種信號通路中的信號分子作用，包括p53、核因子κB（NF-κB）、磷脂酰肌醇3 激酶/蛋白激酶B（PI3K/AKT）等，從而影響腫瘤發(fā)生的各個方面，起到致癌或抑癌作用[7]。

1.2 lncRNA 與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展隨著腫瘤基因?qū)W的迅速發(fā)展，發(fā)現(xiàn)越來越多的lncRNA 與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展相關(guān)。如HOX 反義基因間RNA（HOTAIR）在非小細胞肺癌（non-small-cell lung cancer，NSCLC）中高表達，促進NSCLC 的發(fā)生、轉(zhuǎn)移[8]。研究還發(fā)現(xiàn)，HOTAIR 在乳腺癌細胞中表達上調(diào)，其表達與乳腺癌的復發(fā)、轉(zhuǎn)移及患者的預后和生存率密切相關(guān)[9]。Srivastava 等[10]研究發(fā)現(xiàn)尿路上皮癌抗原1（UCA1）在膀胱癌中過表達，且UCA1 表達水平與腫瘤分級呈正相關(guān)。MALAT1 是目前研究最多的與腫瘤相關(guān)的lncRNA 之一，其可以通過Wnt/β-連環(huán)蛋白（β-catenin）、PI3K/AKT、細胞外調(diào)節(jié)蛋白激酶/絲裂原活化蛋白激酶（ERK/MAPK）通路促進腫瘤的上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化（epithelial-mesenchymal transition，EMT）和血管生成[11]。PCAT-1 在前列腺癌中被發(fā)現(xiàn)，可特異性調(diào)節(jié)前列腺癌細胞的增殖[12]。近年來，lncRNA 與宮頸癌的關(guān)系也受到越來越多的關(guān)注，研究發(fā)現(xiàn)，多種lncRNA在宮頸癌細胞中異常表達，并在腫瘤的發(fā)生、侵襲、轉(zhuǎn)移和耐藥性等方面起重要作用，說明lncRNA 與宮頸癌也是密切相關(guān)的。

2 與宮頸癌發(fā)生、發(fā)展相關(guān)的lncRNA

2.1 肺腺癌轉(zhuǎn)移相關(guān)轉(zhuǎn)錄子1（MALAT1）MALAT1位于染色體11q13，長度為8.5 kb，是高度進化保守的lncRNA。研究表明，MALAT1 通過調(diào)控ERK/MAPK、PI3K/AKT、Wnt/β-catenin 和血管內(nèi)皮細胞鈣黏蛋白（VE-cadherin）/β-catenin 等多種信號通路參與維持腫瘤細胞增殖、抵抗細胞凋亡、誘導血管生成、增加腫瘤細胞的侵襲和轉(zhuǎn)移能力、逃避免疫破壞以及增加化療耐藥性，可作為腫瘤診斷和預后的生物標志物及治療的靶點[13]。Jiang 等[14]研究發(fā)現(xiàn)MALAT1在所有宮頸癌細胞系中均有表達，而在正常宮頸樣本中均無表達，提示MALAT1 在宮頸癌中被激活，在宮頸癌的發(fā)生中起重要作用。進一步研究表明，MALAT1 通過上調(diào)細胞周期蛋白D1（cyclinD1）、cyclinE 和細胞周期蛋白依賴性激酶6（CDK6）來促進宮頸癌細胞的增殖與遷移。研究還發(fā)現(xiàn)HPV16 E6/E7 基因參與了宮頸癌細胞MALAT1 的上調(diào)，說明HPV 是導致宮頸癌細胞MALAT1 激活的重要因素之一。下調(diào)MALAT1 的表達可顯著抑制宮頸癌HeLa 和Caski 細胞的增殖，增加宮頸癌細胞的凋亡，抑制其侵襲能力，MALAT1 的下調(diào)通過負性調(diào)控miR-429 的表達進而抑制宮頸癌的進展[15]。有研究表明MALAT1 還可通過靶向調(diào)控miR-625-5p 和AKT2 的表達促進宮頸癌細胞增殖、遷移和侵襲[16]。Wang 等[17]提出MALAT1 可促進宮頸癌順鉑耐藥，其通過激活PI3K/AKT 通路顯著上調(diào)BRWD1 mRNA在宮頸癌HeLa 和C-33A 細胞中的表達，調(diào)控細胞凋亡，從而促進順鉑耐藥性的形成。敲除MALAT1后，順鉑對HeLa 和C-33A 細胞的增殖有抑制作用，且呈濃度依賴性。因此，MALAT1 是參與宮頸癌發(fā)生、發(fā)展的重要分子，可為宮頸癌的診斷、治療和改善預后提供新的思路。

2.2 HOTAIRHOTAIR 是近年研究較為廣泛的一種lncRNA，位于染色體12q13 上的HOXC11 和HOXC12 之間，在肺癌、乳腺癌、肝癌、胃癌等多種癌癥的發(fā)生、轉(zhuǎn)移、耐藥、復發(fā)和預后中發(fā)揮重要作用[18]。Liu 等[19]研究證實HOTAIR 在宮頸癌中過表達可促進宮頸癌細胞生長，提示HOTAIR 對宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展有促進作用。HOTAIR 通過競爭性結(jié)合miR-143-3p 調(diào)控B 淋巴細胞瘤2 基因（Bcl-2）的表達，進而促進宮頸癌細胞增殖并抑制細胞凋亡。研究還發(fā)現(xiàn)HOTAIR 與STAT3 協(xié)同調(diào)控宮頸癌細胞的遷移和侵襲[20]。HOTAIR 還可通過靶向調(diào)控miR-23b/MAPK1 軸促進宮頸癌細胞的增殖、遷移和侵襲，體內(nèi)研究表明，敲除HOTAIR 基因可通過上調(diào)miR-23b、下調(diào)MAPK1 表達，進而抑制腫瘤細胞的生長和侵襲[21]。Wnt/β-catenin 信號通路在宮頸癌發(fā)生和轉(zhuǎn)移中扮演著關(guān)鍵角色，HOTAIR 對宮頸癌HeLa 細胞的Wnt 信號通路具有正向調(diào)控作用，HOTAIR 下調(diào)可通過抑制Wnt 信號通路抑制宮頸癌細胞自噬、增殖和EMT[22]。大量研究提示HOTAIR 可調(diào)控宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展，因此，篩查HOTAIR 表達水平可以幫助臨床識別癌癥進展，并且了解調(diào)控HOTAIR 表達的確切分子機制，可以進一步擴大宮頸癌的治療途徑。

2.3 細胞周期激酶抑制因子4（INK4）基因座中反義非編碼RNA（ANRIL）ANRIL 是一個長度為3.8 kb 的lncRNA，因其位于疾病遺傳熱點的細胞周期依賴性激酶抑制基因2A/B（CDKN2A/B）位點而受到廣泛關(guān)注。越來越多的證據(jù)表明，ANRIL 參與多種腫瘤的發(fā)生與轉(zhuǎn)歸[23]，但ANRIL 在宮頸癌中的具體作用尚不清楚。研究發(fā)現(xiàn)，ANRIL 在宮頸癌組織和細胞系中的表達顯著上調(diào)，其高表達可促進FIGO 分期進展及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的發(fā)生，降低患者生存率[24]。此外，還發(fā)現(xiàn)下調(diào)ANRIL 的表達可顯著抑制宮頸癌細胞的增殖、遷移和侵襲。PI3K/AKT 是腫瘤過程中參與細胞增殖和EMT 的重要胞內(nèi)信號通路，抑制ANRIL 的表達可顯著降低p-PI3K 和p-AKT 的表達水平，提示PI3K/AKT 通路可能參與了ANRIL 誘導的宮頸癌進展過程，抑制ANRIL 可導致PI3K/AKT 通路失活。miR-186 通過與ANRIL 在含有互補結(jié)合位點的3′非編碼區(qū)（3′UTR）上匹配，逆轉(zhuǎn)ANRIL 在宮頸癌細胞中的功能，提示ANRIL 與miR-186 之間存在生理拮抗作用[25]。抑制ANRIL 的表達導致cyclin D1、CDK4、CDK6、神經(jīng)型鈣黏蛋白（N-cadherin）、波形蛋白（Vimentin）的表達減少，宮頸癌細胞增殖、遷移和侵襲能力減弱[26]。ANRIL 可以與多梳抑制性復合物2（PRC2）的SUZ12 亞基相互作用，并募集PRC2來抑制抑癌基因p15 的表達。此外，下調(diào)ANRIL 可以通過增加p15 的表達來抑制宮頸癌細胞增殖[27]。但ANRIL 未影響p16 或可變讀框（alternative reading frame，ARF）的表達，導致細胞周期在G2/M 期停滯，正向調(diào)控H1299、HeLa 等癌細胞的增殖[28]。因此，ANRIL 可能是一個潛在的分子靶點，可用于宮頸癌診斷和治療策略的開發(fā)。

2.4 EBIC（EZH2-binding lncRNA in cervical cancer）EBIC 又稱lncRNATI17313，長度約1 500個核苷酸，位于12q22 染色體區(qū)。Sun 等[29]在體外研究中發(fā)現(xiàn)，lncRNA-EBIC 對宮頸癌細胞的遷移和侵襲具有正向調(diào)節(jié)作用。腫瘤侵襲的一個重要標志是E-cadherin 的表達下調(diào)，有證據(jù)表明，E-cadherin 的表達在癌癥中受到抑制，其表達下調(diào)可促進癌細胞轉(zhuǎn)移。Zeste 基因增強子同源物2（enhancer of zeste homolog 2，EZH2）是PCR2 的核心組成部分，是H3K27me3 催化過程中的一種關(guān)鍵組織學修飾酶，研究表明EZH2 可以通過H3K27me3 介導E-cadherin的轉(zhuǎn)錄沉默[30]。Sun 等[29]研究發(fā)現(xiàn)lncRNA-EBIC 可能作為誘導EZH2 進入E-cadherin 啟動子區(qū)域的輔助因子，導致E-cadherin 表達降低，從而促進宮頸癌細胞侵襲，提示LncRNA-EBIC 可能通過與EZH2 的協(xié)同作用而成為癌基因。因此，lncRNA-EBIC 被認為是宮頸癌細胞遷移、侵襲和轉(zhuǎn)移的關(guān)鍵分子，可作為宮頸癌診斷與治療的新靶點。

2.5 CCHE1（cervical carcinoma high-expressed 1）CCHE1 是新近發(fā)現(xiàn)的一種lncRNA，位于人類第1 019 號染色體。目前，鮮有文獻報道CCHE1 對腫瘤進展的作用。Yang 等[31]研究表明，CCHE1 在宮頸癌組織中的表達較正常組織明顯上調(diào)，通過功能獲得和功能喪失實驗發(fā)現(xiàn)CCHE1 過表達可促進宮頸癌細胞的增殖，而CCHE1 的缺失可抑制宮頸癌細胞的增殖。CCHE1 對宮頸癌細胞增殖的影響依賴于PCNA 的上調(diào)，其可以與PCNA mRNA 結(jié)合進而上調(diào)PCNA 的表達，從而促進宮頸癌細胞的增殖。臨床病理特征方面，CCHE1 高表達與FIGO 晚期、腫瘤直徑較大、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、HPV 陽性密切相關(guān)[32]。CCHE1與宮頸癌患者的預后相關(guān)，Yang 等[31]發(fā)現(xiàn)CCHE1 低表達的患者比高表達患者有更好的總生存期（overall survival，OS）、無復發(fā)生存期（relapse free survival，RFS），多變量分析也證實了CCHE1 可以作為宮頸癌OS 和RFS 的獨立預測因子，說明CCHE1 可作為宮頸癌的獨立預后標志物。因此，CCHE1 是宮頸癌發(fā)展中的一個重要生物標志物，可為宮頸癌的診斷、治療及預后提供新的臨床策略。

2.6 小核仁RNA 宿主基因8（SNHG8）SNHG8是一種穩(wěn)定的細胞質(zhì)lncRNA，在既往研究中被認為是一種有效的多腫瘤促進因子，但其在宮頸癌中的生物學功能尚不清楚。Qu 等[33]研究表明，SNHG8 可加速HPV 陽性宮頸癌細胞的增殖和遷移，但其具體分子機制尚不確定，SNHG8 可能在HPV 陽性宮頸癌細胞的轉(zhuǎn)錄中發(fā)揮作用。在HPV 陽性宮頸癌細胞中RECK 表達受損，RECK 可抑制宮頸癌等腫瘤的惡性發(fā)展，且RECK 的甲基化在多種腫瘤中已被證實與預后不良有關(guān)，EZH2 可以結(jié)合SiHa 和HeLa細胞的RECK 啟動子區(qū)域，促進RECK 啟動子的甲基化。多項實驗證明SNHG8 通過募集EZH2，降低了RECK 轉(zhuǎn)錄，導致HPV 陽性宮頸癌細胞的惡性表型，促進HPV 陽性宮頸癌細胞的增殖和遷移。推測SNHG8 可為HPV 誘導的宮頸癌的預防和治療提供新的思路。

2.7 分化拮抗非蛋白編碼RNA（DANCR）DANCR位于人類染色體4q12，是一種新發(fā)現(xiàn)的致瘤lncRNA，可抑制表皮細胞的分化。DANCR 主要通過促進細胞增殖、侵襲、遷移和（或）抑制細胞凋亡在多種腫瘤中發(fā)揮致癌基因的功能，但DNACR 在宮頸癌中的功能和臨床意義尚不明確。Tian 等[34]采用實時熒光定量聚合酶鏈反應（qRT-PCR）檢測顯示DANCR 在宮頸癌組織和細胞系中表達上調(diào)，其表達上調(diào)與腫瘤體積增大、FIGO 分期進展及預后惡化呈正相關(guān)，是宮頸癌患者生存期較差的預后指標。此外，多項試驗表明，上調(diào)DANCR 可促進宮頸癌細胞增殖，下調(diào)DANCR 可抑制宮頸癌的生長，提示DANCR在宮頸癌中也起致癌基因的作用。功能實驗結(jié)果表明，DANCR 通過上調(diào)FRAT1 和FRAT2 的表達激活Wnt/β-catenin 信號通路，在宮頸癌中發(fā)揮促癌作用。因此，DANCR 可能是一個有前景的宮頸癌預測生物標志物和治療靶點。

2.8 HULC（highly up-regulated in liver cancer）HULC 位于6p24.3 號染色體上，長度約500 個核苷酸，包含兩個外顯子。功能表征表明，HULC 可以促進不同的致瘤表型，如細胞存活、體外增殖、侵襲，以及體內(nèi)腫瘤生長和血管生成。其致瘤機制包括下調(diào)EEF1E1 的表達、通過鞘氨醇激酶1 促進血管生成、通過ACSL1 促進脂質(zhì)代謝異常等多種途徑[35]。Wang等[36]研究發(fā)現(xiàn)，HULC 在宮頸癌中表達上調(diào)，且HULC 的高表達與FIGO 分期進展、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及宮頸浸潤深度有關(guān)。同時研究表明，高水平的HULC 與宮頸癌患者較差的OS 密切相關(guān)，HULC 是宮頸癌患者生存期較短的獨立預測因子。最近，Lu 等[37]對HULC 在宮頸癌發(fā)生、發(fā)展中的調(diào)控機制做了進一步研究，發(fā)現(xiàn)HULC 過表達顯著促進宮頸癌細胞增殖、遷移和侵襲。HULC 與miR-218 之間存在高度保守且特異的組合序列，TPD52 被認為是miR-218 的靶基因，qRT-PCR 和蛋白質(zhì)印跡實驗顯示，HULC的過表達通過抑制miR-218 來上調(diào)TPD52 的表達。說明HULC 是宮頸癌進展中的關(guān)鍵調(diào)控因子，通過miR-218/TPD52 軸促進宮頸癌細胞增殖、遷移和侵襲。HULC 可能成為一種新的宮頸癌預后指標和基因治療靶點。

2.9 PTENP1（phosphatase and tensin homolog pseudogene 1）PTENP1 是第10 號染色體缺失的磷酸酶及張力蛋白同源基因（PTEN）的偽基因表達的lncRNA 之一，PTEN 定位于染色體10q23.3，是一種抑癌基因，PTENP1 與PTEN 的3′UTR 具有廣泛的序列相似性，可與PTEN miRNA 結(jié)合，進而對miRNA 介導的PTEN 表達下調(diào)起到抑制作用，保護PTEN 的腫瘤抑制作用[38]。PTENP1 通過調(diào)控PTEN的表達在多種惡性腫瘤中發(fā)揮抑癌作用[39]，但其在宮頸癌發(fā)生、發(fā)展中的作用尚未被充分了解。Fan等[40]研究發(fā)現(xiàn)，PTENP1 過表達可抑制宮頸癌細胞增殖和EMT 的發(fā)生，促進細胞凋亡。進一步研究發(fā)現(xiàn)，miR-106b 在宮頸癌組織和細胞中表達增加，下調(diào)miR-106b 可抑制宮頸癌細胞增殖和EMT，促進細胞凋亡，miR-106b 的過表達逆轉(zhuǎn)了PTENP1 對宮頸癌細胞增殖、凋亡和EMT 的影響，而過表達的PTENP1抑制miR-106b 上調(diào)PTEN 表達，且miR-106b 表達與PTENP1 表達呈負相關(guān)，同時，PTEN mRNA 表達與PTENP1 表達呈正相關(guān)。證實了PTENP1 通過競爭性結(jié)合miR-106b，抑制其在宮頸癌細胞增殖、凋亡和EMT 中的作用，進而調(diào)控PTEN 的表達，促進PTEN 功能，從而發(fā)揮抑癌作用。PTENP1 可能成為宮頸癌的一個潛在治療靶點，是今后宮頸癌治療過程中值得關(guān)注的目標。

3 結(jié)語與展望

綜上所述，lncRNA 與宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。lncRNA 在宮頸癌中的異常表達具有重要的臨床意義，可作為宮頸癌診斷、治療、改善預后的潛在生物標志物和分子靶點。然而，lncRNA 在宮頸癌中的確切分子機制尚未明確，仍需要進一步的探索和驗證。相信隨著科學技術(shù)的發(fā)展和研究方法的不斷成熟與完善，我們對lncRNA 會有更深層次的了解，在宮頸癌早期診斷和靶向治療方面也會有新的突破。