方利娟

（百色學(xué)院 廣西百色 533000）

仙鶴草（AgrimoniapilosaL.），又名鶴草芽、龍牙草、施州龍牙草等[1]。薔薇科，多年生木本植物，主要產(chǎn)地在江蘇、浙江、湖北等，仙鶴草是一種較常見的中藥材，藥性平和，味道略苦澀；具有歸心、肝經(jīng)、止瀉止痢、解毒截瘧之功，對(duì)治療脫力勞傷有大作用，同時(shí)仙鶴草亦可抑制直腸癌、膀胱癌、宮頸癌細(xì)胞活性，同時(shí)具有明顯的止血鎮(zhèn)靜作用[2]。隨著仙鶴草研究的不斷深入，仙鶴草的藥用、食用、觀賞及飼用價(jià)值不斷被開發(fā)[3,4]，采摘量逐年遞增，通過植物組織培養(yǎng)技術(shù)得到遺傳性狀良好的育種苗，經(jīng)過大棚種植，可以獲取到大量的仙鶴草，為藥物加工和生產(chǎn)提供充足原料[5]。

1 材料與方法

1.1 材料

產(chǎn)于四川宜賓的野生仙鶴草幼嫩莖段。

1.2 方法

1.2.1 不定芽誘導(dǎo)試驗(yàn)

采取野生仙鶴草的幼嫩莖段為外植體，先用75%酒精消毒20 s，再用0.1%氯化汞消毒5 min，接種到含有不同6-BA（1.0 mg/L，2.0 mg/L，3.0 mg/L）和NAA（0 mg/L，0.5 mg/L，1.0 mg/L）的MS 誘導(dǎo)培養(yǎng)基上培養(yǎng)，20 d 后統(tǒng)計(jì)腋芽的萌發(fā)率。

1.2.2 不定芽增殖試驗(yàn)

當(dāng)誘導(dǎo)得到的不定芽長(zhǎng)至2.0～3.0 cm 時(shí)，用無菌手術(shù)的或無菌剪刀將其切成含頂芽或一個(gè)側(cè)芽的1.0 cm 左右的莖段，接種到含有不同6-BA（1.0 mg/L，2.0 mg/L，3.0 mg/L）和NAA（1.0 mg/L，2.0 mg/L，3.0 mg/L）的增殖培養(yǎng)基上培養(yǎng)，培養(yǎng)過程中觀察并記錄腋芽的生長(zhǎng)情況，20 d后統(tǒng)計(jì)腋芽的增殖倍數(shù)及苗的狀態(tài)。

1.3 培養(yǎng)條件

以MS+3%蔗糖+0.7%瓊脂為基本培養(yǎng)基，激素處理為不同濃度的6-BA 與 NAA 組合。培養(yǎng)室溫度白天24 ±2 ℃，夜晚20 ±2 ℃，光照時(shí)長(zhǎng)12 h/d，光照強(qiáng)度2 000 ±50 lx，濕度70%。

2 結(jié)果與分析

2.1 不定芽誘導(dǎo)結(jié)果

由表1、表2不定芽誘導(dǎo)結(jié)果來看，植物激素6-BA 對(duì)于仙鶴草腋芽誘導(dǎo)影響極顯著，NAA 對(duì)于仙鶴草腋芽誘導(dǎo)影響顯著，所以兩種激素對(duì)于腋芽誘導(dǎo)的影響力為 6-BA＞NAA，而6-BA 與NAA 的交互作用對(duì)于腋芽誘導(dǎo)無顯著差異影響。當(dāng)兩種激素作用于外植體時(shí)，誘導(dǎo)率隨著激素濃度的升高，先升高后降低，而當(dāng)6-BA 濃度為2.0 mg/L、NAA 濃度為0.5 mg/L 時(shí)，誘導(dǎo)率最高，分別為65.28%和54.17%。而且當(dāng)激素組合為 2.0 mg/L 6-BA +0.5 mg/L NAA，誘導(dǎo)率為75%，是最高的，且苗的生長(zhǎng)情況最好，外植體誘導(dǎo)芽個(gè)數(shù)均值最多（4～5 個(gè)），同時(shí)苗的長(zhǎng)度和狀態(tài)也是最好的（苗呈綠色，長(zhǎng)3～4 cm）。所以培養(yǎng)基MS+2.0 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA 的處理組合為仙鶴草帶腋芽的莖段誘導(dǎo)的最適培養(yǎng)基。

表1 6-BA 與NAA 組合對(duì)仙鶴草不定芽誘導(dǎo)的影響

表2 6-BA 與NAA 組合對(duì)仙鶴草不定芽誘導(dǎo)影響的方差分析

2.2 不定芽增殖結(jié)果

由表3、表4不定芽的增殖結(jié)果來看，使用不同濃度6-BA 對(duì)腋芽增殖影響存在差異，6-BA 濃度為1.0 mg/L 時(shí)處理效果不明顯，而6-BA 濃度為3.0 mg/L 時(shí)則會(huì)抑制腋芽增殖，6-BA 為2.0 mg/L 時(shí)腋芽增殖倍數(shù)遠(yuǎn)高于其余兩組，增殖倍數(shù)為1.57 倍；不同濃度的NAA對(duì)腋芽增殖影響存在顯著差異，當(dāng)NAA 濃度為2.0 mg/L 時(shí)，增殖倍數(shù)最高，為1.57 倍，而NAA 濃度為1.0 mg/L 和3.0 mg/L 時(shí)分別為1.22和1.01 倍，說明NAA 濃度過低影響腋芽增殖，過高的NAA 濃度則對(duì)腋芽增殖不利，比較適宜的NAA 濃度應(yīng)為2.0 mg/L。同時(shí)通過對(duì)表的數(shù)據(jù)分析，可知培養(yǎng)基MS＋2.0 mg/L 6-BA＋2.0 mg/L NAA 與其他處理組組間差異顯著，增殖倍數(shù)均值為2.2 倍，遠(yuǎn)高于其他組。進(jìn)一步觀察小苗的長(zhǎng)勢(shì)，該組合增殖苗比較強(qiáng)壯，顏色深綠色，分支較多，葉片呈7～8 片。

表3 6-BA 與NAA 組合對(duì)仙鶴草不定芽增殖的影響

表4 6-BA 與NAA 組合對(duì)仙鶴草不定芽增殖影響的方差分析

3 小結(jié)與討論

通過試驗(yàn)現(xiàn)象和數(shù)據(jù)處理結(jié)果發(fā)現(xiàn)，以仙鶴草帶腋芽的莖段為外植體，最合適的消毒方法是75%酒精浸泡莖段30 s，0.1%氯化汞溶液浸泡消毒3 min（期間震蕩幾次）；腋芽誘導(dǎo)最適培養(yǎng)基配方是MS＋2.0 mg/L 6-BA＋0.5 mg/L NAA，誘導(dǎo)率75%；腋芽增殖最適培養(yǎng)基配方是MS＋2.0 mg/L 6-BA＋2.0 mg/L NAA，增殖倍數(shù)2.2 倍。

植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑在腋芽誘導(dǎo)過程中作用十分重要，因?yàn)橹参锷L(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的雙面性，對(duì)于其濃度的把控十分重要，而本實(shí)驗(yàn)參考了羅常榮的三葉青莖段帶腋芽誘導(dǎo)過程中激素的配比濃度，使用的植物外植體的部位一致，所研究的植物材料同屬于多年生草本植物，有部分相似性，具有一定的參考價(jià)值。NAA 和6-BA 對(duì)于腋芽的誘導(dǎo)都具有良好的效果。特別是6-BA*NAA 的交互作用在適宜的濃度下要比NAA、6-BA 單獨(dú)使用時(shí)效果要好。當(dāng)6-BA 濃度不發(fā)生變化時(shí)，NAA 濃度往上增加時(shí)，誘導(dǎo)率減少。在不定芽的增殖方面，NAA、6-BA、NAA*6-BA的交互作用對(duì)增殖都有明顯影響，其中影響依次為NAA＞6-BA＞NAA*6-BA。