周淼 孫永城 王怡 盛立霞

急性髓細(xì)胞白血?。╝cute myelogenous leukemia，AML）是一組具有生物學(xué)多樣性特征的惡性血液腫瘤，臨床表現(xiàn)和轉(zhuǎn)歸異質(zhì)性大，依據(jù)細(xì)胞遺傳學(xué)及分子生物學(xué)改變進(jìn)行的患者危險分層對臨床處置有重要指導(dǎo)作用。其中復(fù)雜、高危染色體核型和不良的分子遺傳學(xué)改變?nèi)鏔ms樣絡(luò)氨酸激酶3（Fms-like tyrosine kinase，F(xiàn)LT3）是目前公認(rèn)的不良因素[1-2]，對白血病預(yù)后有獨(dú)立指導(dǎo)作用。CD25是IL-2的受體α鏈（IL-2Rα），表達(dá)于正常人靜止的T淋巴細(xì)胞表面，誘導(dǎo)T細(xì)胞的增殖和分化[3]。淋巴細(xì)胞激活后，受體脫落形成血清可溶性IL-2R（sCD25）。有學(xué)者指出，sCD25水平在急性白血病患者的療效評估和預(yù)后判斷上具有臨床意義，白血病類型涵蓋AML和急性淋巴細(xì)胞白血?。╝cute lymphoblastic leukemia，ALL），sCD25可能參與急性白血病的發(fā)生、發(fā)展[4]。血清中如此，細(xì)胞膜上表達(dá)的CD25臨床意義如何呢？研究發(fā)現(xiàn)，CD25在白血病干細(xì)胞（1eukemia stem cells，LSC）細(xì)胞膜上的表達(dá)率顯著高于造血干細(xì)胞（hematopoietic stem cells，HSC）[5]；CD25+LSC 種植于小鼠骨髓內(nèi)，從而逃避化療藥物，CD25或可作為抗化療藥物作用LSC的靶點(diǎn)；在費(fèi)城染色體陽性的急性B淋巴細(xì)胞白血?。≒hiladelphia chromosome+B-ALL，Ph+B-ALL）患兒中，CD25的表達(dá)提示不良預(yù)后[6]?；诖耍狙芯烤虲D25表達(dá)與AML患者預(yù)后的關(guān)系作進(jìn)一步分析。

1 對象和方法

1.1 對象 選擇2015年6月至2017年6月在寧波市第一醫(yī)院初診的AML患者167例?；颊咴谥委熐熬屑?xì)胞形態(tài)學(xué)、免疫學(xué)、細(xì)胞遺傳學(xué)和分子生物學(xué)檢查。其中髓細(xì)胞CD25+患者26例，CD25-患者141例。CD25+患者男16例，女10例；年齡29～62歲，中位年齡33歲；FAB分型M0型1例，M1型1例，M2型5例，M4型10例，M5型8例，M6型1例，M7型0例；FMS樣的酪氨酸激酶3-近膜區(qū)的內(nèi)部串聯(lián)重復(fù)（Fms-like tyrosine kinase 3-internal tandem duplications，F(xiàn)LT3-ITD）基因突變9例，復(fù)雜核型6例，高危核型4例。CD25-患者男74例，女67例；年齡16～57歲，中位年齡39歲；FAB分型M0型0例，M1型2例,M2型18例，M4型60例，M5型57例，M6型2例，M7型2例；FLT3-ITD基因突變25例，復(fù)雜核型23例，高危核型15例。兩者基線資料比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（均P＞0.05）?；颊哒T導(dǎo)方案采用標(biāo)準(zhǔn)蒽環(huán)類+阿糖胞苷（3+7）方案，MA方案（米托蒽琨10 mg/d d1～3，阿糖胞苷 150～200 mg/d d1～7），IA 方案（去甲氧柔紅霉素10 mg/d d1～3，阿糖胞苷150～200 mg/d d1～7）。本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)。

1.2 方法 采用流式細(xì)胞術(shù)檢測患者髓細(xì)胞免疫表型。采集患者骨髓2 ml加入EDTA抗凝管中，充分混勻，取EDTA抗凝骨髓液500 μl，加入數(shù)只流式細(xì)胞儀專用的檢測管中，免疫表型標(biāo)記單克隆抗體CD25為美國BD公司產(chǎn)品。將各色熒光單克隆抗體置于流式管中，標(biāo)記抗體后，將各流式檢測管充分振蕩混勻，室溫避光放置30 min，使抗體與細(xì)胞發(fā)生充分的反應(yīng)。加入150 μl溶血素充分混勻，避光靜置孵育，待溶液透亮無絮狀沉淀，加PBS離心棄上清液。用300 μl的PBS緩沖液重懸細(xì)胞，加入100 μl 3%中性甲醛固定液后上流式細(xì)胞儀（美國BD公司）檢測。單克隆抗體表達(dá)大于同型對照的20%為陽性。

1.3 觀察指標(biāo) 患者隨訪8～20個月，中位隨訪時間14個月。觀察并比較CD25+患者與CD25-患者初發(fā)時外周血WBC、PLT及骨髓原始細(xì)胞比例；首次誘導(dǎo)完全緩解、1年無病生存、1年總體生存情況。分析CD25+患者FLT3-ITD基因突變、復(fù)雜/高危核型與預(yù)后的關(guān)系。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件。計量資料以表示，組間比較采用兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)；計數(shù)資料以頻數(shù)和構(gòu)成比表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)；采用Kaplan-Meier法繪制生存曲線，生存曲線的比較采用logrank檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 CD25+患者與CD25-患者初發(fā)時外周血WBC、PLT及骨髓原始細(xì)胞比例比較 CD25+患者與CD25-患者初發(fā)時外周血WBC、PLT比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（均P＞0.05）；CD25+患者骨髓原始細(xì)胞比例高于CD25-患者，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），見表1。

表1 CD25+患者與CD25-患者初發(fā)時外周血WBC、PLT及骨髓原始細(xì)胞比例比較

2.2 CD25+患者與CD25-患者首次誘導(dǎo)完全緩解率、1年無病生存率、1年總體生存率比較 CD25+患者首次誘導(dǎo)完全緩解率、1年無病生存率、1年總生存率均低于CD25-患者，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（均P＜0.05），見表2；CD25+患者與CD25-患者無病生存曲線、總體生存曲線比較見圖1-2。

表2 CD25+患者與CD25-患者首次誘導(dǎo)完全緩解率、1年無病生存率、1年總體生存率比較（%）

圖1 CD25+患者與CD25-患者無病生存曲線比較

圖2 CD25+患者與CD25-患者總體生存曲線比較

2.3 CD25+患者FLT3-ITD基因突變與預(yù)后的關(guān)系分析CD25+患者中，F(xiàn)LT3-ITD基因突變的患者與無FLT3-ITD基因突變的患者0.5年無病生存率和1年總體生存率比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（均P＞0.05），見表3。

表3 CD25+患者中FLT3-ITD基因突變患者與無FLT3-ITD基因突變患者0.5年無病生存率、1年總體生存率比較（%）

2.4 CD25+患者復(fù)雜/高危核型與預(yù)后的關(guān)系分析CD25+患者中，復(fù)雜/高危核型的患者與正常/良好核型的患者無FLT3-ITD基因突變的患者0.5年無病生存率和1年總體生存率比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（均P＞0.05），見表4。

表4 CD25+患者中復(fù)雜/高危核型患者與正常/良好核型患者0.5年無病生存率、1年總體生存率比較（%）

3 討論

AML是一組源于造血干細(xì)胞的惡性克隆性疾病，是血液系統(tǒng)最常見的惡性疾病，在臨床和遺傳學(xué)上都有高度異質(zhì)性。約55%的AML患者檢測出染色體異常[7]，公認(rèn)的預(yù)后良好的核型包括t（15；17）、inv（16）、t（16；16）和t（8；21），少部分為預(yù)后不良核型，包括-5、-7、del（5q）、abn（3q）或復(fù)雜核型；仍有部分不能檢出異常者被歸為中危組，利用分子生物學(xué)方法檢測某些基因突變和/或基因表達(dá)異常，有利于對AML患者作出進(jìn)一步危險分層，其中因?yàn)镕LT3-ITD基因突變頻率較高，已被國外臨床實(shí)踐指南列為治療決策的重要參考指標(biāo)[8]。

CD25是高度親和IL-2的受體α鏈，它不能通過受體直接對髓系白血病細(xì)胞發(fā)揮生理作用，但通過與IL-2Rα有相似空間結(jié)構(gòu)的IL-15Ra可替代IL-2激活Jans激酶/信號轉(zhuǎn)導(dǎo)與轉(zhuǎn)錄激活子（the Janus kinase/signal transducer and activator of tran-ions，JAK/STAT）和磷酸酰肌醇-3-激酶途徑，從而對細(xì)胞發(fā)揮增殖調(diào)節(jié)作用[9]。有報道提出IL-2Rα基因的mRNA水平在CD25+合并BCR-ABL融合蛋白陽性（Bcr-abl fusion protein，BCR／ABL+）的B-ALL患者中顯著提高，在Ph染色體陽性的基礎(chǔ)上，CD25+患者預(yù)后生存較CD25-患者差[10]。在AML方面，CD25亦是如此[11-12]。

本研究通過對167例AML患者進(jìn)行CD25抗體免疫熒光標(biāo)記，結(jié)合其他相關(guān)指標(biāo)回顧性分析CD25與AML的相關(guān)性，在疾病初發(fā)時的外周血象上，CD25+并不伴隨顯著升高的WBC和減低的PLT，而骨髓高原始幼稚細(xì)胞比例與CD25可能有關(guān)；CD25+AML患者治療效果及生存情況明顯劣于CD25-者，包括生存率和無病生存時間；因考慮到AML預(yù)后因素為多因性，那么CD25影響預(yù)后的效應(yīng)是否是因?yàn)樯婕暗奖热鏔LT3-ITD及不良核型的表達(dá)呢？有研究指出，CD25與FLT3-ITD基因突變具有相關(guān)性，CD25+AML患者FLT3-ITD基因突變發(fā)生率高，CD25+患者若FLT3-ITD基因突變，預(yù)后最差[13]。FLT3-ITD基因突變通過下游信號轉(zhuǎn)導(dǎo)與轉(zhuǎn)錄激活子5（signal transducer and activator of tranions 5，STAT5）通路使細(xì)胞發(fā)生惡變[14]，但目前IL-2R的Jak-STAT信號傳導(dǎo)途徑與FLT3-ITD蛋白下游STAT5信號通路之間的關(guān)系尚未明確。遺憾的是，因1年無病生存的患者僅存活1例，所以對0.5年無病生存作出對比。在本研究中，CD25+患者中FLT3-ITD基因突變者及復(fù)雜/高危核型者在0.5年無病生存和1年總體生存的預(yù)后并無統(tǒng)計學(xué)差異，但今后需要開展更大樣本量和研究時間的項(xiàng)目。

研究指出，CD25在AML各亞型均有表達(dá)，表達(dá)情況無差異，并且與其他髓系免疫標(biāo)記無相關(guān)性[11]，提示CD25表達(dá)與AML細(xì)胞的不同細(xì)胞形態(tài)學(xué)停滯階段無關(guān)。本研究結(jié)果顯示CD25表達(dá)陽性率為15.56%，各個亞型患者中均有CD25的表達(dá)，但除外M7，這可能由于樣本數(shù)量過少所限，若擴(kuò)大樣本量研究，有望將CD25作為AML治療后微小殘留病灶監(jiān)測指標(biāo)，有助于鞏固治療方案和移植時機(jī)的選擇。另有報道也揭示了CD25與殘留病灶的關(guān)系，指出CD25的表達(dá)高低可預(yù)示移植效果，移植前CD25表達(dá)水平與移植效果呈負(fù)相關(guān)，建議對于移植前CD25仍有表達(dá)的患者做作一步的病灶清除治療，有望提高移植成功率[15-16]。

本研究存在不足之處。首先，因整體樣本量還不夠，CD25的表達(dá)率不高，致使各組間病例數(shù)量少，統(tǒng)計得出的結(jié)果還不足以支持論據(jù)，需要更進(jìn)一步驗(yàn)證；另外，除了復(fù)雜/不良核型以及FLT3-ITD基因突變，影響AML預(yù)后的因素還有很多，本研究的關(guān)聯(lián)因素和方法較為單一，多參數(shù)分析能提高結(jié)論的正確性。

綜上所述，CD25表達(dá)與AML患者預(yù)后不良相關(guān)。臨床在患者造血干細(xì)胞移植前后行髓細(xì)胞CD25表達(dá)檢測對移植效果有一定的預(yù)測意義。