閆曉慶

摘? ? 要：以乙醇為溶劑，采用醇系統(tǒng)提取法對(duì)黃花棘豆中的活性物質(zhì)進(jìn)行提取，得到粗浸膏;以菜蚜為供試蟲(chóng)，采用內(nèi)吸作用法進(jìn)行室內(nèi)生物測(cè)定。通過(guò)黃花棘豆材料粗浸膏提取物對(duì)供試蚜蟲(chóng)的殺蟲(chóng)結(jié)果表明，黃花棘豆提取物對(duì)蚜蟲(chóng)具有一定的抑制作用。處理后，在濃度為10 mg/mL、48 h時(shí)，粗浸膏的殺蟲(chóng)活性可以達(dá)到0.558 mg/mL。

關(guān)鍵詞：黃花棘豆提取物;蚜蟲(chóng);活性研究

文章編號(hào)： 1005-2690（2021）02-0012-02? ? ? ?中國(guó)圖書(shū)分類號(hào)： S452? ? ? ?文獻(xiàn)標(biāo)志碼： B

試驗(yàn)以蚜蟲(chóng)為試蟲(chóng)，通過(guò)對(duì)黃花棘豆進(jìn)行提取，得到粗浸膏，初步測(cè)定粗提取物的殺蟲(chóng)活性。

1? ?材料與方法

1.1? ?試驗(yàn)材料

1.1.1? ?供試黃花棘豆的采集及預(yù)處理

黃花棘豆（Oxytropis ochrocephala L.）采自甘肅省武威天?？h。選用生長(zhǎng)良好的開(kāi)花期黃花棘豆全株，洗凈、朝涼處晾干，粉碎并過(guò)40目篼（孔徑0.37 mm）后密封，置于0～4 ℃冰箱中保存?zhèn)溆肹1]。

1.1.2? ?供試蟲(chóng)

蚜蟲(chóng)（ Lipaphis erysimi）由植保站實(shí)驗(yàn)室提供。

1.2? ?黃花棘豆活性成分提取及分離純化方法

1.2.1? ?黃花棘豆粗浸膏的制備及活性測(cè)定

1.2.1.1? ? 黃花棘豆粗浸膏的制備

采用醇系統(tǒng)提取法：將剪碎的植物樣品裝入直徑為50 cm的平底燒瓶中，然后加入乙醇至圓底燒瓶的2/3高度，把圓底燒瓶放入水浴鍋中加熱至60 ℃，將加熱揮發(fā)的溶劑進(jìn)行冷凝回流。24 h后倒出圓底燒瓶中的溶劑，減壓濃縮得到浸膏，每次裝樣重復(fù)3～5次，重復(fù)上述過(guò)程直至樣品被提取完，收集浸膏，置于0～4 ℃冰箱中保存?zhèn)溆肹2]。

1.2.1.2? ? 活性測(cè)定方法

采用內(nèi)吸作用法對(duì)供蟲(chóng)進(jìn)行生物活性測(cè)定，具體方法如下：

（1）藥劑配制：將供試藥劑分別稀釋為10 mg/mL、5 mg/mL、2.5 mg/mL、1.25 mg/mL、0.625 mg/mL，并做好標(biāo)記備用。

（2）植物根際周圍土壤處理：取盆栽棘豆幼苗6盆，將配好的藥劑50 mL澆到幼苗根際深2 cm處，然后用土覆蓋，做好標(biāo)記，以清水處理的植株為對(duì)照。

（3）施藥后5 d，每盆植株上接入蚜蟲(chóng)50頭，每個(gè)濃度處理3個(gè)重復(fù)。在接入蚜蟲(chóng)時(shí)動(dòng)作一定要輕。接完試蟲(chóng)后，一般要用玻璃鐘罩或隔蟲(chóng)網(wǎng)將不同處理的植株進(jìn)行隔離或封閉，避免不同處理植株上蚜蟲(chóng)的相互轉(zhuǎn)移和外界蚜蟲(chóng)遷飛到處理植株上，影響試驗(yàn)結(jié)果。

（4）處理后24 h、48 h分別檢査蟲(chóng)口消長(zhǎng)情況，在處理后24 h之內(nèi)蚜蟲(chóng)將會(huì)岀現(xiàn)中毒現(xiàn)象，如體壁皺縮、體色變深或由透明變?yōu)椴煌该?、嘔吐等，這些現(xiàn)象可以借助于擴(kuò)大鎊或顯微鏡進(jìn)行觀察，按下式計(jì)算蟲(chóng)口減退率和校正蟲(chóng)口減退率，并填寫(xiě)表格。

蟲(chóng)口減退率（%）=

×100

校正蟲(chóng)口減退率（%）=

×100

1.2.2? ?黃花棘豆粗浸膏溶劑萃取及萃取相的生物測(cè)定

1.2.2.1? ? 黃花棘豆粗浸膏溶劑萃取

分別用石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇為萃取溶劑對(duì)粗浸膏進(jìn)行萃取。將粗浸膏加水溶解，然后倒入500 mL的分液漏斗中，加入一定量的石油醚，塞緊分液漏斗旋塞，放平分液漏斗振蕩數(shù)次（注意邊振蕩邊排氣），豎直靜止20 min后，從上面倒出石油醚部分，減壓濃縮，重復(fù)5次，收集石油醚相浸膏。

其他溶劑萃取同石油醚萃取，注意二氯甲烷萃取時(shí)，由于二氯甲烷密度大于水的密度，所以二氯甲烷部分從下面放出，得到粗浸膏萃取后的4個(gè)萃取相[3]。

1.2.2.2? ? 殺蟲(chóng)活性測(cè)定方法

同1.2.1.2。

1.2.3? ?二氯甲烷相和乙酸乙酯相合并后極性洗脫及不同極性段殺蟲(chóng)活性測(cè)定

1.2.3.1? ? 合并二氯甲烷相和乙酸乙酯相的極性洗脫

由于二氯甲烷相和乙酸乙酯相抑菌活性相近，并且通過(guò)薄層析點(diǎn)樣，硫酸或者磷鉬酸顯色，樣點(diǎn)R值很相近，所以二者合并，對(duì)合并后的相進(jìn)行繼續(xù)分離，用石油醚∶丙酮為洗脫體系，可按照60∶1、30∶1、15∶1、8∶1、3∶1、1∶1極性依次增大的順序進(jìn)行洗脫，最后得到A（60∶1）、B（30∶1）、C（15∶1）、D（8∶1）、E（3∶1）、F（1∶1）6個(gè)極性段。對(duì)6個(gè)極性段進(jìn)行殺蟲(chóng)活性測(cè)定，方法同1.2.1.2。對(duì)殺蟲(chóng)活性相同的極性段進(jìn)行合并，然后采用硅膠柱層析、葡聚糖凝膠、MC、反相等進(jìn)行繼續(xù)分離，直至得到純化合物。

1.2.3.2? ? 殺蟲(chóng)活性測(cè)定方法

同1.2.1.2。

1.2.4? ?正丁醇相極性洗脫及不同極性段殺蟲(chóng)活性測(cè)定方法

正丁醇相極性洗脫由于正丁醇相的殺蟲(chóng)活性很高，所以對(duì)正丁醇相也進(jìn)行繼續(xù)分離，采用二氯甲烷∶甲醇為洗脫體系，按照60∶1、30∶1、15∶1、8∶1、3∶1、1∶1極性依次增大的順序進(jìn)行洗脫，最后得到G（60∶1）、H（30∶1）、I（15∶1）、J（8∶1）、K（3∶1）、L（1∶1）6個(gè)極性段，對(duì)6個(gè)極性段進(jìn)行殺蟲(chóng)活性測(cè)定，方法同1.2.1.2。對(duì)殺蟲(chóng)活性相同且樣點(diǎn)值相近的極性段進(jìn)行合并，采用硅膠柱層析、葡聚糖凝膠、MCI、反相等進(jìn)行繼續(xù)分離，直至得到純化合物。

2? ?結(jié)果與分析

2.1? ?黃花棘豆粗浸膏對(duì)菜蚜生測(cè)結(jié)果

粗浸膏提取物對(duì)菜蚜生測(cè)結(jié)果表明，粗浸膏提取物處理菜蚜后，死亡率與處理濃度呈明顯的線性關(guān)系，即隨著濃度的增大死亡率顯著增大。處理48 h后，10 mg/mL與2.5 mg/mL、1.25 mg/mL及0.625 mg/mL均存在顯著差異。

2.2? ? 四相提取物對(duì)菜蚜的毒力生測(cè)結(jié)果

生測(cè)結(jié)果表明，四相提取物處理菜蚜后，死亡率與處理濃度呈明顯的線性關(guān)系，即隨著濃度的增大死亡率顯著增大。4種萃取相對(duì)菜蚜毒力測(cè)定結(jié)果（48 h）顯示，黃花棘豆粗浸膏4個(gè)萃取相對(duì)蚜蟲(chóng)的毒力隨著處理濃度的遞減死亡率下降;4種萃取相中，石油醚相LC50 為1.336 mg/mL，最大;二氯甲烷相次之;正丁醇相LC50最小，因4種萃取相中二氯甲烷相與乙酸乙酯相的Rf值相近具有相同的活性成分，應(yīng)將其合并。四相提取物對(duì)菜蚜生測(cè)結(jié)果顯示24 h后，正丁醇相與乙酸乙酯相死亡率相差不大，顯著高于石油醚相與二氯甲烷相，48 h后，各相間死亡率差異顯著，正丁醇相最大，為53.47%，乙酸乙酯相次之石油醚相最小，為41.20%。結(jié)果顯示，正丁醇相有利于提高提取物對(duì)菜蚜的毒力。4種萃取相對(duì)菜蚜毒力測(cè)定結(jié)果（24 h）顯示，各相回歸方程相關(guān)性均較好，結(jié)果也可靠。4種萃取相中，石油醚相LC50為1.144 mg/mL最大;二氯甲烷相次之;正丁醇相LC50最小，應(yīng)用前景較好[4]。

3? ?小結(jié)與討論

黃花棘豆提取物殺蟲(chóng)物質(zhì)屬于天然植物活性成分，具有對(duì)其不易生耐藥性、藥物殘留少等優(yōu)點(diǎn)。試驗(yàn)對(duì)黃花棘豆提取物抑菌物質(zhì)進(jìn)行了初步分離。

黃花棘豆材料粗浸膏提取物對(duì)供試蚜蟲(chóng)的殺蟲(chóng)結(jié)果表明，黃花棘豆提取物對(duì)蚜蟲(chóng)有一定抑制作用。處理后，在濃度為10 mg/mL、48 h時(shí)，粗浸膏的殺蟲(chóng)活性最高位70%，后隨濃度的降低基本呈直線下降的趨勢(shì)。

萃取的4個(gè)相石油醚相、二氯甲烷相、乙酸乙酯相、正丁醇相，隨著濃度從10 mg/mL降到0.625 mg/mL殺蟲(chóng)率基本呈遞減趨勢(shì)。正丁醇相殺蟲(chóng)活性最高，石油醚相最低，二氯甲烷相和乙酸乙酯相的殺蟲(chóng)活性基本相同。正丁醇相在濃度為10 mg/mL和5 mg/mL時(shí)殺蟲(chóng)率均大于90%，但當(dāng)濃度降為2.5 mg/mL時(shí)殺蟲(chóng)率迅速降為68%，后隨濃度降低逐漸下降。二氯甲烷相在最高濃度時(shí)殺蟲(chóng)率為84%，后隨濃度降低一次下降。乙酸乙酯相在濃度大于2.5 mg/mL時(shí)殺蟲(chóng)率均大于70%，由于二氯甲烷相和乙酸乙酯相的活性基本相同，所以對(duì)兩相進(jìn)行合并，對(duì)合并后的相石油醚∶丙酮體系的不同極性段進(jìn)行極性洗脫，分為6個(gè)極性段，分別為60∶1、30∶1、15∶1、8∶1、3∶1、1∶1。之后對(duì)不同的極性段在不同的濃度下做殺蟲(chóng)活性試驗(yàn)。結(jié)果顯示，整個(gè)活性變化隨濃度的降低呈現(xiàn)下降的趨勢(shì)，10∶1段和5∶1段活性基本相同，均高于其他3個(gè)濃度的活性。在濃度10 mg/mL和5 mg/mL， 60∶1、30∶1、15∶1、8∶1、1∶1 5個(gè)極性段的殺蟲(chóng)活性基本成直線上升趨勢(shì)，在3∶1段活性最高位分別為82%和80%，1∶1極性段又迅速減小。濃度為2.5 mg/mL時(shí)，在30∶1極性段活性最高為68%，結(jié)果顯示有很好的殺蟲(chóng)效果[5]。

在正丁醇相的6個(gè)極性段中，殺蟲(chóng)活性基本呈正態(tài)分布的趨勢(shì)，在二氯甲烷正丁醇為15∶1和8∶1時(shí)達(dá)到最大值。在濃度為10 mg/mL和5 mg/mL時(shí)，各個(gè)極性段的活性基本相同，但均高于其他濃度的活性。在濃度為10 mg/mL，15∶1和8∶1極性段活性相同均為84%，在5 mg/mL、8∶1極性段時(shí)殺蟲(chóng)活性最高為86%。

參考文獻(xiàn)：

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