李宗金，曹 富，張亞莉，張 玲*

（1. 安徽中醫(yī)藥大學(xué) 藥學(xué)院，安徽 合肥 230012；2. 安慶醫(yī)藥高等?？茖W(xué)校 藥學(xué)院，安徽 安慶 246052）

明黨參為傘形科植物明黨參Changium smyrnioides Wolff 的干燥根，具有潤肺化痰、養(yǎng)陰和胃、平肝解毒之功效，用于治療肺熱咳嗽、嘔吐反胃、食少口干、目赤眩暈、疔毒瘡瘍[1]等癥。

明黨參主要含多糖、膽堿、氨基酸、香豆素、甘露醇、L-天門冬酰胺和揮發(fā)油等成分。多糖具有免疫調(diào)節(jié)、抗疲勞、抗氧化和降血脂的作用[2]；膽堿可預(yù)防脂肪沉積于肝中，具有調(diào)節(jié)肝和膽囊的功能[3]；氨基酸與補(bǔ)益生津、平肝和胃的功效密切相關(guān)[2]；香豆素類成分具有抗HIV 病毒、抗腫瘤等藥理活性[4]；甘露醇不但具有利尿脫水、鎮(zhèn)咳、祛痰和平喘之功效，而且能清除羥自由基，對(duì)多種疾病均有明顯療效[3]；L-天門冬酰胺具有明顯的止咳、平喘、祛痰作用[4]，與明黨參的功效直接相關(guān)。

明黨參的加工方法始見于《本草從新》[5]，其謂：土人參（明黨參）“甘，微寒，蒸之極透則寒性去。”1963年版《中國藥典》[6](一部)首次收載明黨參，加工方法為“置沸水中煮至無白心，取出，刮去外皮，曬干?！?977 年版《中國藥典》[7]將其修訂為“置沸水中煮至無白心，取出，刮去外皮，漂洗，干燥。” 沿用至今。步達(dá)等[8]采用高效液相色譜法（HPLC）測定明黨參不同部位珊瑚菜內(nèi)酯的含量，發(fā)現(xiàn)珊瑚菜內(nèi)酯在根中的積累主要在根皮部，認(rèn)為明黨參加工棄去的根皮具有再利用價(jià)值。李祥等[9]采用氣相色譜-質(zhì)譜法（GC-MS）對(duì)明黨參加工過程中揮發(fā)油的化學(xué)成分和含量進(jìn)行了研究，結(jié)果表明明黨參經(jīng)過加工后揮發(fā)油含量減少，揮發(fā)油中的致敏活性成分明黨炔含量降低了73%。

本研究對(duì)不同加工方法明黨參中水溶性浸出物和主要化學(xué)成分多糖、膽堿、總香豆素、甘露醇、總氨基酸和L-天門冬酰胺的含量進(jìn)行比較，考察不同加工方法對(duì)明黨參藥材外觀性狀和主要成分含量的影響，確定明黨參的最佳加工方法，為提高明黨參的質(zhì)量提供依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Agilent 1260 型高效液相色譜儀（美國安捷倫科技公司）；BP-211D 型電子天平（十萬分之一，德國Sartorius 公司）；756MC 型紫外分光光度計(jì)（上海精密科學(xué)儀器有限公司）；KQ-250DB 型數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；HH 型數(shù)顯恒溫水浴鍋（金壇市金城國勝實(shí)驗(yàn)儀器廠）；Milli-Q 型超純水系統(tǒng)（德國Merck Millipore 公司）；QE-200 型高速粉碎機(jī)（浙江屹立工貿(mào)有限公司）。

1.2 試藥

氯化膽堿對(duì)照品（批號(hào)：100147）、L-天門冬酰胺對(duì)照品（批號(hào)：105949），均購于中國食品藥品檢定研究院；D-無水葡萄糖對(duì)照品（批號(hào)：160821）、珊瑚菜內(nèi)酯對(duì)照品（批號(hào)： 160325）、甘露醇對(duì)照品（批號(hào)：150904）、L-精氨酸對(duì)照品（批號(hào)：160821），均購于成都普菲德生物科技有限公司。所有對(duì)照品純度均≥98%。甲醇（色譜純，瑞典歐普森公司）；水為超純水；其它試劑均為分析純。

明黨參于2017 年5 月采自安徽省滁州市全椒縣玉屏山，經(jīng)安徽中醫(yī)藥大學(xué)王德群教授鑒定為傘形科植物明黨參Changium smyrnioides Wolff 的根。除去莖葉和須根，洗凈泥土，分別采用以下8 種加工方法制備成藥材。加工方法見表1。

2 方法

2.1 水溶性浸出物含量測定

按照2020 年版《中國藥典》（通則2201）項(xiàng)下的冷浸法測定[10]。

表1 明黨參加工方法Tab. 1 The processing method of Changii Radix

2.2 糖、總香豆素、甘露醇含量測定

取明黨參粉末（過三號(hào)篩）適量，精密稱定，參照2020 年版《中國藥典》“黃精”項(xiàng)下多糖含量測定方法測定多糖含量[11]，在624 nm 波長處測定樣品溶液的吸光度；采用紫外分光光度法[12]測定總香豆素含量，在270 nm 波長下測定樣品溶液的吸光度；參照文獻(xiàn)[4]所述方法測定明黨參中甘露醇含量。

2.3 膽堿含量測定

2.3.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 精密稱取氯化膽堿對(duì)照品適量，加水制成每1 mL 含1.088 mg 的溶液，即得對(duì)照品溶液。精密量取對(duì)照品溶液2、4、6、8、10 mL于25 mL 具塞試管中，參照文獻(xiàn)[13]標(biāo)準(zhǔn)曲線制備方法，在524 nm 處測定吸光度。以氯化膽堿濃度X 為橫坐標(biāo)，吸光度Y 為縱坐標(biāo)，得線性回歸方程Y = 0.727 5X - 0.011 5，r = 0.999 9。氯化膽堿質(zhì)量濃度在0.218 ～ 1.088 mg/mL 與吸光度線性關(guān)系良好。

2.3.2 測定法 取明黨參粉末（過三號(hào)篩）約5.0 g，精密稱定，加入100 mL 硝酸溶液（1 ∶3），參照文獻(xiàn)[13]供試品溶液制備方法，在524 nm 波長下測定吸光度。

2.4 總氨基酸含量測定

2.4.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 精密稱取L-精氨酸對(duì)照品適量，加入0.02 mol/L 的氫氧化鈉1 mL，加水制成每1 mL 含0.098 mg 的溶液，即得對(duì)照品溶液。精密量取對(duì)照品溶液0.10、0.20、0.30、0.40、0.50、0.60 mL，參照文獻(xiàn)[14]標(biāo)準(zhǔn)曲線制備方法，在568 nm處進(jìn)行測定。以L-精氨酸濃度 X 為橫坐標(biāo)，吸光度Y 為縱坐標(biāo)，得線性回歸方程Y = 0.0271 X + 0.003 7，r = 0.999 8。L-精氨酸濃度在0.394 ～ 2.362 μg/mL 與吸光度線性關(guān)系良好。

2.4.2 測定法 精密稱取明黨參粉末（過三號(hào)篩）約0.5 g，加70%乙醇30 mL，回流提取1 h，濃縮，加水溶解定容至100 mL[15]。精密量取供試品溶液1 mL，其余操作同“2.4.1”項(xiàng)下標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備。

2.5 L-天門冬酰胺含量測定

2.5.1 色譜條件 色譜柱：WondaSil C18-WR（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相為甲醇-水（10 ∶90），等度洗脫；柱溫：30 ℃；流速：0.8 mL/min；檢測波長：333 nm；進(jìn)樣量：5 μL。

2.5.2 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取L-天門冬酰胺對(duì)照品適量，加水制成每1 mL 含0.740 mg 的溶液，即得。

2.5.3 供試品溶液的制備 取明黨參粉末（過三號(hào)篩）約1.0 g，精密稱定，精密加入25 mL 水，超聲處理（功率：250 W，頻率：40 kHz）30 min，濾過，濾液置25 mL容量瓶中，用水定容至刻度，搖勻，即得。

2.5.4 衍生程序 取上述供試品及對(duì)照品溶液各1 mL，參照文獻(xiàn)[16]方法處理。按“2.5.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣，記錄峰面積，明黨參樣品和對(duì)照品HPLC色譜圖見圖1。

圖1 明黨參對(duì)照品溶液（A）和供試品溶液（B）HPLC 圖Fig. 1 HPLC chromatogram of reference substance solution (A) and test substance solution(B) of Changii Radix

2.5.5 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 精密量取對(duì)照品溶液1 mL，按“2.5.4”項(xiàng)下衍生程序進(jìn)行衍生化處理，在“2.5.1”色譜條件下，注入高效液相色譜儀，進(jìn)樣量分別為2、4、6、8、10 μL，以進(jìn)樣量X 為橫坐標(biāo)，峰面積Y 為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，回歸方程為Y = 13 762 468 X - 4 004，r = 0.999 3。結(jié)果表明，L-天門冬酰胺在0.210 ～ 1.060 μg 范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

3 結(jié)果與分析

3.1 樣品含量測定結(jié)果

分別取8 種不同加工方法下的明黨參樣品粉末（過三號(hào)篩），按上述方法測定其主要化學(xué)成分的含量。結(jié)果見表2。

表2 不同加工方法明黨參主要成分的含量（%，n = 3）Tab. 2 The content of main components of Changii Radix in different processing methods（%，n = 3）

由表2 可知，不同加工方法對(duì)明黨參主要成分的含量有一定影響，明黨參經(jīng)沸水煮4 min 后水溶性浸出物含量最高，刮皮烘干后含量最低；煮2 min 多糖含量最高，煮3 min 含量最低；煮3 min 總氨基酸含量最高，蒸后明礬浸漂含量最低。

3.2 主成分分析

采用SPSS17.0 軟件處理數(shù)據(jù)，以主成分分析法對(duì)不同加工方法的明黨參多指標(biāo)成分綜合分析。根據(jù)綜合評(píng)價(jià)函數(shù)，計(jì)算不同加工方法明黨參質(zhì)量綜合得分，結(jié)果見表3。

表3 不同加工方法明黨參主要成分含量綜合評(píng)判結(jié)果Tab. 3 Comprehensive evaluation results of the main components of Changii Radix by different processing methods

由表3 可知，直接烘干藥材雖然質(zhì)量評(píng)價(jià)得分高，但樣品干燥時(shí)間長、易生蟲，且藥材外觀不明亮。綜合考慮以上因素，確定方法4 水煮3 min 后干燥為最佳加工方法。

4 討論

明黨參多糖含量測定波長是對(duì)照品和供試品溶液在400 ～800 nm 掃描所得吸收曲線的最大吸收波長，與2020 年版《中國藥典》[11]中黃精多糖的測定波長不同，可能與實(shí)驗(yàn)中所使用的試劑和儀器有關(guān)，經(jīng)過反復(fù)試驗(yàn)后，最終確定624 nm 為測定明黨參多糖含量的最大吸收波長。在明黨參膽堿含量測定中，為減少實(shí)驗(yàn)誤差，保證吸光度在0.3 ～0.7 之間，在文獻(xiàn)基礎(chǔ)上對(duì)試驗(yàn)參數(shù)進(jìn)行了調(diào)整。明黨參總氨基酸的含量測定中發(fā)現(xiàn)明黨參用精氨酸作為對(duì)照品時(shí)，對(duì)照品溶液與供試品溶液的吸收曲線和最大吸收波長一致，且吸光度值穩(wěn)定，加樣回收率符合要求，因此選用了精氨酸作為對(duì)照品。

明黨參刮皮后干燥與直接干燥相比，水溶性浸出物含量下降46.96%，總香豆素含量下降31.01%，而多糖含量增加69.63%，膽堿含量增加53.85%，氨基酸含量增加8.01%，L-天門冬酰胺含量增加9.72%，甘露醇含量增加2.65%。香豆素含量減少與文獻(xiàn)[8]中珊瑚菜內(nèi)酯主要積累在根皮結(jié)果一致。不刮皮直接干燥的明黨參干燥時(shí)間較長，藥材在干燥過程中多糖、氨基酸等初生代謝物質(zhì)有所消耗，故而直接干燥的藥材初生代謝物質(zhì)含量較低；香豆素等次生代謝物主要見于明黨參的皮部，所以經(jīng)過刮皮處理后含量下降。鑒于直接干燥的藥材外觀不明亮，且不易干燥，所以建議明黨參經(jīng)刮皮處理后干燥。

明黨參水煮至無白心與直接刮皮干燥相比，水煮后膽堿含量增加17%，L-天門冬酰胺含量增加28.48%，總氨基酸含量增加11.66%，而水溶性浸出物含量降低0.92%，多糖含量降低4.98%，總香豆素含量降低35.96%，甘露醇含量降低16.64%。因膽堿、L-天門冬酰胺和總氨基酸的含量與明黨參藥效相關(guān)，所以通過水煮至無白心后得到的藥材藥用價(jià)值更高。

水煮至無白心與蒸至無白心均是通過高溫使明黨參含有的大量淀粉糊化，以達(dá)到快速干燥的目的。本研究通過比較這兩種加工方法發(fā)現(xiàn)，明黨參蒸至無白心后膽堿、甘露醇、L-天門冬酰胺及總氨基酸含量分別降低7.69%、52.53%、35.96%、22.54%，而水溶性浸出物、總香豆素、多糖含量分別增加55.32%、29.82%和24.22%。膽堿、甘露醇、L-天門冬酰胺和氨基酸與明黨參潤肺化痰、平肝功效相關(guān)，建議水煮至無白心后刮皮干燥。

明礬浸漂和清水洗相比，明黨參用明礬浸漂后多糖、膽堿、總香豆素、氨基酸及L-天門冬酰胺含量均有所降低，分別降低16.62%、7.41%、17.57%、26.19%及16.15%，甘露醇含量增加11.11%，水溶性浸出物含量增加1.22%。說明明礬浸漂后會(huì)導(dǎo)致藥材有效成分降低，故不建議用明礬浸漂。

5 結(jié)論

本研究通過比較8 種不同加工方法下明黨參藥材的水溶性浸出物、多糖、膽堿、總香豆素、甘露醇、總氨基酸和L-天門冬酰胺的含量，結(jié)合性狀等因素確定明黨參的最佳加工方法：沸水中煮至無白心，取出，刮去外皮，清水中漂洗，干燥。此種加工方法（殺青）可以快速殺死植物細(xì)胞、使酶滅活、殺死微生物，加快藥材干燥，使藥材外觀明亮，性狀美觀，最大程度地保留藥效成分，提高藥材的質(zhì)量，便于保存。