冉繼春，陽 勇，花 雷，吉光見稚代

(重慶市中藥研究院，重慶400065 )

黃連為毛茛科植物黃連Coptis chinensis Franch.、三角葉黃連Coptis deltoidea C. Y. Cheng et Hsiao 或云連Coptis teeta Wall. 的干燥根莖[1]?；瘜W(xué)成分主要為生物堿類[2]，具有抗菌、增強免疫等作用[3]。其主要產(chǎn)地有四川、重慶、云南等地[4]。黃連作為傳統(tǒng)名貴中藥，有著廣泛用途和開發(fā)潛力[5]。當前，中藥性狀評價，依然是老藥工通過主觀經(jīng)驗判斷來鑒別，評價結(jié)果會受到感觀差異和檢測環(huán)境的影響，客觀性和準確性難以保證[6]。黃連歷來都有色黃者更佳的說法。在前期研究中發(fā)現(xiàn)，確與生物堿含量具有一定相關(guān)性[7]。該研究采用現(xiàn)代測色技術(shù)[8]將黃連提取液的顏色轉(zhuǎn)換成數(shù)字化表達，結(jié)合其成分含量，進行相關(guān)性分析，探尋顏色評價的數(shù)字化方法。

1 材料

1.1 儀器

CM-5 型分光測色計（日本柯尼卡美能達控股公司）；LC-20A 型高效液相色譜儀（日本島津公司）。

1.2 藥品與試劑

鹽酸小檗堿對照品（批號：110713-201814，中國食品藥品檢定研究院，純度：86.7%）；磷酸二氫 鉀（ 批 號： P1040499，GENERAL-REAGENT）；十二烷基硫酸鈉（批號：P1194208，GENERALREAGENT）；磷酸（批號：201907050，KESHI）；甲醇（批號：20190701，重慶川東化工）；無水乙醇（批號：20200101，重慶川東化工）；水為一級水。產(chǎn)自四川、重慶的黃連藥材18 批，經(jīng)本院吉光見稚代研究員鑒定均為毛茛科植物黃連的干燥根莖。詳見表1。

表1 黃連藥材來源Tab. 1 Sources of Coptis chinensis Franch.

2 方法與結(jié)果

2.1 黃連提取液色度測定方法

2.1.1 測定條件 采用分光測色計，液體測量，觀察光源為D65 透過光，觀察視角10°，起止波長：360 ～740 nm，每個樣品測定3 次后取平均值。

2.1.2 供試品制備 黃連藥材 55 ℃干燥 8 h ，打粉，過50目藥篩，稱取黃連粉末0.1、0.2、0.3、0.4、0.5 g，各三份，粉末分別用100 mL 無水乙醇、甲醇、一級水溶解，超聲提取30 min，離心10 min（8 000 r/min），取上清液測定色度值。

2.1.3 色度檢測方法篩選 色度測定同一提取液的3 個指數(shù)中，a*值最小，b*次之，L*最大。由此得知，在色調(diào)上黃連提取液顏色是以黃色為主，所以選擇b*值作為色度的主要參考值。當濃度為0.3 g/100 mL時，顏色b*值趨于飽和穩(wěn)定，之后隨濃度增加顏色值趨于穩(wěn)定。由表2 可知，采用無水乙醇提取線性相關(guān)程度最好，所以選擇0.3 g/100 mL 無水乙醇來提取黃連，測定其色度值。

表2 不同溶劑色度值結(jié)果分析Tab. 2 Analysis of chromaticity values of different solvents

2.1.4 色度檢測方法學(xué)試驗

對黃連提取液，采用“2.1.3”項下篩選的顏色測定方法，進行色度檢測精密度、重復(fù)性、穩(wěn)定性實驗，結(jié)果RSD 分別為0.07%、1.11%、1.55%，表明該方法的精確度、穩(wěn)定性、重復(fù)性良好。

2.2 HPLC 含量測定方法

2.2.1 色譜條件、對照品溶液制備、供試品溶液制備

均參照《中國藥典》黃連含量檢測方法[1]。

2.2.2 線性關(guān)系考察 精密量取對照品溶液，配制成濃度分別為3.62、18.10、36.20、72.40、144.80、289.60 μg/mL 的系列溶液，按“2.2.1”項下色譜條件進樣，繪制標準曲線，得到回歸方程 Y = 72 750 X ＋50 986 （R2= 0.999 5），結(jié)果表明鹽酸小檗堿在 3.62 ～289.60 μg/mL 范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.2.3 含量檢測方法學(xué)考察 采用“2.2.1”項下色譜條件，進行精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性、加樣回收等試驗，結(jié)果RSD 分別為0.33%、0.08%、0.96%、1.62%，表明該方法的精密度、重復(fù)性、準確度良好，且在12 h 內(nèi)穩(wěn)定。

2.3 黃連色度與含量檢測結(jié)果

對18 批產(chǎn)自四川和重慶的黃連，采用“2.1.3”項下條件檢測其色度值，“2.2.1”項下色譜條件，檢測其含量值；結(jié)果發(fā)現(xiàn)顏色值與有效含量上差距較大，顏色b*值，范圍在53.99 ～113.58 之間；主要成分鹽酸小檗堿含量值4.13 ～8.01 之間。見表3。

表3 黃連提取液色度及含量值Tab. 3 The color and content of Coptis extract

2.4 黃連色度與含量相關(guān)性分析

采用SPSS 22.0 軟件對18 批黃連提取液色度值與有效成分含量進行Pearson 相關(guān)性分析，測算出相關(guān)系數(shù)，其中鹽酸小檗堿和黃連堿含量與L*值r = -0.626 1、-0.602 6，P ＜ 0.01；鹽酸小檗堿和黃連堿含量與a*值r = 0.608 6、0.598 7，P ＜ 0.01；鹽酸小檗堿、黃連堿、表小檗堿含量與b*值r = 0.668 8、0.865 3、0.778 9 ，P ＜ 0.01，巴馬汀與b*值 r = 0.554 3，P ＜ 0.05；說明提取液的亮度顏色越亮鹽酸小檗堿、黃連堿含量越少；顏色越紅鹽酸小檗堿和黃連堿含量的含量越高；顏色越黃，鹽酸小檗堿、巴馬汀、黃連堿、表小檗堿的含量越高。見表4。

表4 黃連提取液與有效成分之間的相關(guān)系數(shù)（n =18）Tab. 4 Correlation coefficient between Coptis extract and effective ingredients （n = 18）

3 討論

該研究將現(xiàn)代仿生技術(shù)應(yīng)用于黃連顏色的表達上面，黃連的主要成分是生物堿類，鹽酸小檗堿和黃連堿在紅、黃兩個色度方向都呈顯著相關(guān)，與亮度都呈顯著負相關(guān)；巴馬汀、表小檗堿在黃色方向有相關(guān)性；所以黃連提取液主要生物堿為偏暗的黃紅色，進一步驗證了傳統(tǒng)鑒別經(jīng)驗的有效性。川渝兩地是黃連藥材的主產(chǎn)區(qū)域，該研究所得的實驗規(guī)律對此藥材具有代表性，該方法也可推廣到其它中藥材中。中藥材的顏色是性狀評價的基本條件之一，該研究為中藥材顏色鑒別提供新的方法，也為《中國藥典》的顏色描述提供參考，有利于中藥材綜合質(zhì)量評價。該方法能更快速、準確對藥材顏色進行檢測，解決了以傳統(tǒng)經(jīng)驗鑒別的“因人而異”問題，同時以數(shù)字化的方式將顏色進行闡述，工藝可復(fù)制性強。

4 結(jié)論

中藥作為中華文化的傳統(tǒng)歷史瑰寶，對人類健康有重要影響，然而，中藥不被國際社會認可，很大程度上是因為中藥成分的復(fù)雜性，藥效過程的整體、多元化，要解決這一問題，急需將傳統(tǒng)經(jīng)驗轉(zhuǎn)換為現(xiàn)代科學(xué)的表達方法。該研究為中藥材質(zhì)量評價提供新的參考方法，具有重要意義。對推進中藥材顏色鑒別進入數(shù)字化進程，促進中藥全球化起到積極作用。