薛運(yùn)波│文

1.處女蜂王的選擇

選擇處女蜂王，一般是以個體大、腹部碩長、行動穩(wěn)健的處女蜂王為佳。準(zhǔn)備進(jìn)行人工授精的處女蜂王授精前可幽閉在小核群里，也可幽閉在框式貯王籠里。由于處女蜂王出房后所處的環(huán)境條件不同，在性成熟方面存在差異。處女蜂王出房前一天誘入核群，巢門口安裝隔王柵幽閉的處女蜂王，性成熟日齡與采用相同方法誘入交尾群的處女蜂王相同，最佳授精時期為8～10日齡。蜂王出房后一直幽閉在框式貯王籠內(nèi)，則性成熟時間要推遲2～3 天，此方法幽閉的處女蜂王授精最佳時期為10～13日齡。授精過早，由于處女蜂王未到性成熟期，雖然已經(jīng)授精，但精子轉(zhuǎn)移到蜂王受精囊的速度較慢，精液在蜂王輸卵管內(nèi)滯留時間過長，授精蜂王遲遲不能產(chǎn)卵，有的精液在蜂王輸卵管內(nèi)變質(zhì)導(dǎo)致蜂王死亡。授精過晚，處女蜂王在核群或框式貯王籠內(nèi)時間較長，影響核群與框式貯王籠的使用效率。

2.處女蜂王的麻醉

麻醉蜂王時先讓蜂王爬入誘入管內(nèi)，再將麻醉管與其對接，待蜂王退入麻醉管后，及時將通氣活塞推入，讓蜂王腹部露出3～4 節(jié)為止。然后安裝到授精儀底座上的固定器上，開啟CO2鋼瓶閥門，從洗瓶中可以觀察到CO2流量，通過調(diào)節(jié)閥門以每秒鐘流出約5 個氣泡為宜，麻醉時間30 秒左右，處女蜂王進(jìn)入昏迷狀態(tài)，直到授精完畢，方可解除麻醉。

3.人工授精

（1）拉開蜇針腔：蜂王麻醉的同時，調(diào)節(jié)顯微鏡的位置及焦距，使處女蜂王的腹部清晰呈現(xiàn)在視野中央。然后移動背腹鉤操縱桿，當(dāng)蜂王腹部停止抽動時，移動腹鉤操縱桿，使腹鉤鉤住腹板，接著在探針的配合下使背鉤鉤住背板，同時移動背、腹鉤操縱桿雙向拉動，使背、腹板拉至3～4mm 的距離。調(diào)整顯微鏡焦距，移動背鉤操縱桿，使背鉤端部“膨大”部分伸到蜂王蜇針鞘基部，并使其嵌入基部的三角縫內(nèi)。背鉤嵌入后，再次移動背、腹鉤操縱桿，把背、腹板距離拉至5～6mm（圖1）。

圖1 打開的蜇針腔

（2）進(jìn)針注射：蜂王背、腹板拉開后，調(diào)整蜂王的角度，使蜂王的縱軸線與注射器縱軸平行，其縱軸線與垂直線的夾角30°左右。調(diào)節(jié)顯微鏡至蜇針腔清晰，此時可以看到蜇針腔中央靠近蜇針鞘基部有一皺褶開口，該開口就是陰道口?？吹疥幍揽诤?，移動注射器，排除授精針頭尖部的保護(hù)液和氣泡，調(diào)節(jié)縱

向?qū)к壥贯樇饨咏幍揽?，左手將陰道探針插入陰道，并向蜂王腹面靠攏。使探針壓住陰道瓣突，并使陰道口擴(kuò)張，這時右手調(diào)節(jié)縱向?qū)к壥贯樇庋刂结樀谋巢啃煨爝M(jìn)入陰道，直至中輸卵管，取出探針，當(dāng)進(jìn)針深度達(dá)到約1.8mm 時，進(jìn)針略感受到阻力，陰道口有下陷跡象時，停止進(jìn)針，然后將授精針頭稍退出一點(diǎn)，開始注射精液。如果在授精針頭達(dá)到這個深度之前，其周圍的軟組織開始隨著移動，表明針頭很可能插入到陰道旁邊的瓣突或者誤進(jìn)入側(cè)囊，應(yīng)該立即退出，再次進(jìn)針。在一切順利進(jìn)行時，慢慢將精液注入。如果授精針頭內(nèi)的精液不移動，同時，精液與生理液之間的氣泡呈被壓縮狀態(tài)時，則表明針頭沒有進(jìn)入輸卵管內(nèi)，需要重新調(diào)整進(jìn)針。蜂王背部和腹部之間的中線必須與腹鉤和背鉤間的中線完全一致，注射器也必須準(zhǔn)確地直線推進(jìn)。如果蜂王被正確固定時，蜇針腔底部所呈現(xiàn)的三角形陰道瓣褶是左右對稱的。如果這些步驟都能正確進(jìn)行，授精針頭會比較容易推進(jìn)入中輸卵管內(nèi)。一次性授精通常注射8μl 精液；二次性授精每次各注射4～5μl 精液。第一次與第二次授精間隔時間為24～48 小時。注精完畢，稍待10～15 秒后退出授精針頭，卸下麻醉管，小心退出蜂王，給蜂王作上標(biāo)記，待蘇醒后送回原核群（圖2、圖3、圖4、圖5）。

圖2 探針輔助進(jìn)針的授精過程（引自Ruttner，1976）

圖3 授精進(jìn)針

圖4 注射精液

圖5 授精蜂王點(diǎn)標(biāo)記

（3）解剖觀察授精結(jié)果：初次進(jìn)行人工授精的技術(shù)人員，很想盡早了解一下操作結(jié)果。解剖觀察授精蜂王的方法是：首先用昆蟲針剌穿蜂王的胸部固定到蠟盤上，用手術(shù)剪刀剪去翅和足，然后沿著蜂王腹部背板的中線從第6 節(jié)向前剪開，直至剪到第二節(jié)，在第二節(jié)處向兩邊各剪一刀，末節(jié)背板由前向后剪開。在解剖時剪刀的尖部向上挑，以免剪破內(nèi)臟。用6 根昆蟲針把剪開的背板向兩邊的蠟盤上固定，然后用比較尖的鑷子將蜜囊、腸道及毒腺拉出，調(diào)整體視顯微鏡焦距至清晰，此時在視野中可以看到蜂王的兩個側(cè)輸卵管均勻充滿精液，膨大為兩個圓球狀，說明授精成功。如果蜂王的兩個側(cè)輸卵管膨脹大小不一，說明進(jìn)針偏位，或進(jìn)針過深，針尖進(jìn)入一側(cè)輸卵管內(nèi)；如果側(cè)輸卵管呈線狀只有少量精液或內(nèi)有氣泡，均視為授精失?。▓D6、圖7、圖8）。

圖6 蜂王生殖系統(tǒng)解剖

圖7 授精成功的蜂王

圖8 蜂王授精失敗，雙側(cè)輸卵管精液量不一致且右側(cè)輸卵管中有氣泡

（4）操作人員基本要求：在授精操作過程中，要求操作穩(wěn)、準(zhǔn)、輕，以免背腹鉤和針頭損傷蜂王；熟練了解體視顯微鏡、授精儀的各部件性能，要求在雙眼不離開目鏡的情況下，雙手能操作自如；每只蜂王從麻醉至授精結(jié)束要求控制在5 分鐘以內(nèi)，熟練者大約在1～2 分鐘左右。蜂王的背腹板一經(jīng)打開，必須及時進(jìn)針注射，以免陰道口干燥造成進(jìn)針困難。再之，背腹板長時間打開也會增加污染的機(jī)會。