曹 蕓，黃 誠(chéng)，楊澤林，馮 剛，梁望旺

（1.重慶市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，重慶 401120；2.重慶市武隆區(qū)動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，重慶 408500）

作為動(dòng)物疫病預(yù)防與控制機(jī)構(gòu)的重要組成部分，獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室是養(yǎng)殖業(yè)健康發(fā)展的強(qiáng)有力后盾和技術(shù)保障[1]。不管是獸醫(yī)科學(xué)研究、獸醫(yī)藥品研制，還是動(dòng)物疫病檢測(cè)診斷，都離不開(kāi)實(shí)驗(yàn)室工作[2]。實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)水平的高低直接影響到轄區(qū)內(nèi)動(dòng)物疫病防控水平和畜禽養(yǎng)殖業(yè)健康發(fā)展。為科學(xué)評(píng)價(jià)各級(jí)獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)水平，提升實(shí)驗(yàn)室的檢測(cè)能力，2010 年農(nóng)業(yè)部印發(fā)《獸醫(yī)系統(tǒng)實(shí)驗(yàn)室考核工作實(shí)施方案》[3]，明確要求每年組織一次實(shí)驗(yàn)室比對(duì)試驗(yàn)。按照方案要求，多個(gè)省級(jí)動(dòng)物疫病預(yù)防控制機(jī)構(gòu)先后開(kāi)展了檢測(cè)能力比對(duì)，并對(duì)轄區(qū)內(nèi)獸醫(yī)系統(tǒng)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)能力進(jìn)行了評(píng)價(jià)[4-8]。從2011 年起，重慶市將所有區(qū)縣獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室全部納入比對(duì)范圍，每年組織實(shí)施覆蓋全市的獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)能力比對(duì)。本文梳理分析了2011—2019 年以來(lái)重慶市區(qū)縣獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)能力比對(duì)結(jié)果，以期為進(jìn)一步完善獸醫(yī)系統(tǒng)實(shí)驗(yàn)室管理體系，提高獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)能力提供參考。

1 材料與方法

1.1 比對(duì)方案

按照方案要求，重慶市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心（下稱“重慶市疫控中心”）在2011—2019 年每年組織全市區(qū)縣獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行檢測(cè)能力比對(duì)。由于區(qū)縣獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室PCR 系統(tǒng)配置存在差異，每次能力比對(duì)分為兩組。每年設(shè)置3～5 個(gè)比對(duì)項(xiàng)目，每個(gè)區(qū)縣參加3個(gè)項(xiàng)目的比對(duì)。比對(duì)實(shí)行“五統(tǒng)一”，即統(tǒng)一盲樣制作、統(tǒng)一比對(duì)項(xiàng)目、統(tǒng)一檢測(cè)時(shí)限、統(tǒng)一檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)、統(tǒng)一檢測(cè)試劑。歷年來(lái)的檢測(cè)項(xiàng)目和參加的區(qū)縣數(shù)量見(jiàn)表1。

1.2 比對(duì)材料制備

所有參加實(shí)驗(yàn)室比對(duì)的試劑和樣品，均由重慶市疫控中心準(zhǔn)備。比對(duì)盲樣，由重慶市疫控中心獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室統(tǒng)一制備、編號(hào)，并標(biāo)定樣品參考值，每份樣品量能確保重復(fù)檢測(cè)1～2 次。下發(fā)區(qū)縣的比對(duì)試劑為相同廠家的同一批次試劑。

表1 2011—2019 年重慶市區(qū)縣獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)能力比對(duì)項(xiàng)目

1.3 試驗(yàn)方法與標(biāo)準(zhǔn)

比對(duì)試驗(yàn)包括普通RT-PCR、熒光定量RTPCR、普通PCR、熒光定量PCR、iELISA、cELISA、LpB-ELISA、HI、SAT 等9 種檢測(cè)方法，項(xiàng)目涉及H5、H7 亞型流感、口蹄疫、非洲豬瘟、豬瘟、高致病性豬繁殖與呼吸綜合征、新城疫、布魯氏菌病等8 種重大動(dòng)物疫病和人獸共患病的血清學(xué)或病原學(xué)檢測(cè)。統(tǒng)一采用國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)或國(guó)家參考實(shí)驗(yàn)室推薦的方法和試劑開(kāi)展比對(duì)（表2）。

表2 重慶市區(qū)縣獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)能力比對(duì)采用的檢測(cè)方法和依據(jù)

1.4 比對(duì)結(jié)果判定

相關(guān)項(xiàng)目的比對(duì)結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)見(jiàn)表3。

2 比對(duì)結(jié)果

2.1 總體情況

2011—2019 年，共有39 個(gè)區(qū)縣獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室參加了檢測(cè)能力比對(duì)。其中，2019 年比對(duì)樣品結(jié)果正確率最高，為98.99%；2012 年比對(duì)樣品結(jié)果正確率最低，為92.94%。經(jīng)χ2檢驗(yàn)，2011—2014 年實(shí)驗(yàn)室比對(duì)結(jié)果無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05），從2015年開(kāi)始實(shí)驗(yàn)室比對(duì)樣品結(jié)果正確率逐年上升，與前4 年相比存在顯著差異（P＜0.05），且比對(duì)結(jié)果正確率穩(wěn)定在97%以上（表4）。

表3 重慶市區(qū)縣獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)能力比對(duì)項(xiàng)目評(píng)判標(biāo)準(zhǔn)

表4 2011—2019 年重慶市區(qū)縣獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室比對(duì)結(jié)果匯總

2.2 不同片區(qū)比對(duì)

將39 個(gè)區(qū)縣實(shí)驗(yàn)室按照地域劃分為渝西（22個(gè)）、渝東南（6 個(gè)）和渝東北片區(qū)（11 個(gè)），3 個(gè)片區(qū)比對(duì)樣品結(jié)果正確率分別為95.64%、97.53%和96.83%。經(jīng)χ2檢驗(yàn)，3 個(gè)片區(qū)間比對(duì)結(jié)果存在顯著差異（P＜0.05）。在2011—2019 年開(kāi)展的9 次比對(duì)中，有10 個(gè)區(qū)縣實(shí)驗(yàn)室比對(duì)結(jié)果全部正確，且這些實(shí)驗(yàn)室全部集中在渝西片區(qū)；渝東南和渝東北片區(qū)的實(shí)驗(yàn)室歷年來(lái)比對(duì)結(jié)果均存在不同程度的偏差（表5）。

表5 2011—2019 年重慶市不同區(qū)域獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室比對(duì)結(jié)果

2.3 不同實(shí)驗(yàn)室比對(duì)

2011—2014 年，區(qū)縣實(shí)驗(yàn)室比對(duì)結(jié)果出現(xiàn)偏差的頻次較高，其中編號(hào)為2、5、10、25、28、34、35 的實(shí)驗(yàn)室均出現(xiàn)了3～4 次偏差，尤其編號(hào)為2、5、10、28、35 的實(shí)驗(yàn)室比對(duì)樣品正確率低于平均水平（圖1）。從2015 年開(kāi)始，區(qū)縣實(shí)驗(yàn)室比對(duì)結(jié)果更加穩(wěn)定，除編號(hào)為2、28、32 的實(shí)驗(yàn)室比對(duì)結(jié)果仍存在較大偏差外，其余實(shí)驗(yàn)室的比對(duì)樣品正確率均能夠達(dá)到85%以上（圖2）。

2.4 不同檢測(cè)方法比對(duì)

圖1 2011—2014 年重慶市各區(qū)縣獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室比對(duì)結(jié)果

圖2 2015—2019 年重慶市各區(qū)縣獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室比對(duì)結(jié)果

檢測(cè)項(xiàng)目主要涵蓋4 種類別的檢測(cè)方法，即PCR/RT-PCR（含普通、熒光定量）、ELISA（含iELISA、cELISA、LpB-ELISA）、HI 和SAT。結(jié)果顯示，PCR 類比對(duì)項(xiàng)目的平均樣品正確率最高，為99.53%，離散系數(shù)最低；ELISA、HI 和SAT 類的正確率分別為95.87%、90.40%和94.66%，低于PCR 類比對(duì)項(xiàng)目，但離散系數(shù)分別為4.53、5.85和4.36，明顯高于PCR 類項(xiàng)目。經(jīng)χ2檢驗(yàn)，4 種類別的比對(duì)項(xiàng)目之間樣品正確率差異極顯著（P＜0.001）。具體見(jiàn)表6。

表6 2011—2019 年重慶市區(qū)縣獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室不同檢測(cè)方法比對(duì)結(jié)果

3 討論

3.1 從總體比對(duì)結(jié)果來(lái)看，區(qū)縣獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室整體檢測(cè)水平穩(wěn)步提升

2011—2019 年，重慶市區(qū)縣獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室比對(duì)樣品正確率從92.94%上升至98.99%，特別是2015 年以后比對(duì)樣品正確率常年穩(wěn)定在97%以上。通過(guò)持續(xù)開(kāi)展比對(duì)，所有區(qū)縣實(shí)驗(yàn)室比對(duì)結(jié)果正確率均穩(wěn)步提升，尤其在多年出現(xiàn)較大偏差的情況下，編號(hào)為2、28、32 的實(shí)驗(yàn)室自2018 年起比對(duì)結(jié)果正確率達(dá)到并超過(guò)了85%，編號(hào)為5、10、25、35 的實(shí)驗(yàn)室自2015 年起比對(duì)結(jié)果正確率達(dá)到100%，實(shí)驗(yàn)室間差距進(jìn)一步縮小。區(qū)縣獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室整體檢測(cè)水平的提升，其原因一方面可能是，重慶市從2014 年開(kāi)始實(shí)施“區(qū)縣獸醫(yī)系統(tǒng)實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化建設(shè)項(xiàng)目”，分批為各區(qū)縣新添或更換檢測(cè)用儀器設(shè)備，從而提高了檢測(cè)效率和檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確度；另一方面可能是，重慶市疫控中心多年來(lái)不斷強(qiáng)化對(duì)區(qū)縣檢測(cè)人員的技術(shù)和理論知識(shí)培訓(xùn)，尤其是要求每年比對(duì)結(jié)果不正確的區(qū)縣派員參加市級(jí)跟班培訓(xùn)直到合格為止，從而提高了檢測(cè)人員的專業(yè)技術(shù)水平。隨著重慶市實(shí)驗(yàn)室能力建設(shè)和管理水平的提升，大部分區(qū)縣實(shí)驗(yàn)室具備了良好的動(dòng)物疫病檢測(cè)能力，能夠?yàn)榻⒖茖W(xué)完善的動(dòng)物疫病防控體系提供基礎(chǔ)。

3.2 從不同區(qū)域?qū)嶒?yàn)室比對(duì)結(jié)果來(lái)看，實(shí)驗(yàn)室發(fā)展不平衡的問(wèn)題依然存在

比對(duì)結(jié)果顯示，渝西片區(qū)比對(duì)樣品正確率最低，但實(shí)驗(yàn)室正確率最高。通過(guò)分析發(fā)現(xiàn)，9 年間比對(duì)結(jié)果全部正確的實(shí)驗(yàn)室、結(jié)果存在較大偏差的實(shí)驗(yàn)室均來(lái)自這個(gè)片區(qū)，說(shuō)明渝西片區(qū)實(shí)驗(yàn)室間發(fā)展極不平衡，形成了明顯的“兩極分化”。就重慶市而言，渝西片區(qū)的經(jīng)濟(jì)發(fā)展水平明顯高于渝東南和渝東北片區(qū)，居民對(duì)動(dòng)物和動(dòng)物產(chǎn)品的需求更加旺盛，動(dòng)物交易和屠宰量更大，動(dòng)物調(diào)運(yùn)更加頻繁。然而，多年來(lái)這個(gè)片區(qū)的個(gè)別實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)能力始終處于全市平均水平之下，這既不利于動(dòng)物疫病的早期診斷、疑似動(dòng)物疫情的有效防控，也不利于保障動(dòng)物源性食品安全和公共衛(wèi)生安全。渝東南和渝東北片區(qū)的實(shí)驗(yàn)室比對(duì)樣品正確率高于渝西片區(qū)，但比對(duì)結(jié)果不穩(wěn)定，可能與這兩個(gè)片區(qū)實(shí)驗(yàn)室經(jīng)費(fèi)投入不足、人員流動(dòng)性較大有關(guān)。因此，還需根據(jù)不同區(qū)縣的實(shí)際情況，制定更有針對(duì)性的措施，逐步規(guī)范實(shí)驗(yàn)室運(yùn)行管理來(lái)提升實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)能力。

3.3 從不同檢測(cè)項(xiàng)目的比對(duì)結(jié)果來(lái)看，PCR 類比對(duì)項(xiàng)目的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)能力最好

重慶市區(qū)縣實(shí)驗(yàn)室PCR、ELISA、HI 和SAT 等4 個(gè)檢測(cè)項(xiàng)目的平均樣品正確率分別為99.53%、95.87%、90.40% 和94.66%，其中PCR類比對(duì)項(xiàng)目的結(jié)果離散度最小，穩(wěn)定性最高，這可能是由于PCR 類檢測(cè)主要由儀器設(shè)備讀取數(shù)據(jù)，受主觀因素影響較小造成的，也可能與重慶市在全市范圍內(nèi)普及PCR 檢測(cè)技術(shù)有關(guān)。特別是非洲豬瘟疫情發(fā)生后，該市要求每個(gè)區(qū)縣至少配置1 臺(tái)熒光PCR 儀，并先后組織了3 次非洲豬瘟檢測(cè)能力專項(xiàng)比對(duì)。目前全市32 個(gè)畜牧主產(chǎn)區(qū)縣均配備了全新的熒光PCR 設(shè)備，區(qū)縣檢測(cè)人員均能熟練采用熒光PCR 方法開(kāi)展非洲豬瘟病原學(xué)檢測(cè)。從比對(duì)結(jié)果可以看出，ELISA、HI 和SAT 等定量和半定量檢測(cè)項(xiàng)目平均樣品正確率較低且結(jié)果離散度較大。由于這類項(xiàng)目對(duì)于規(guī)范操作步驟、控制檢測(cè)環(huán)境、嚴(yán)格結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)、標(biāo)定檢測(cè)試劑的要求較高[9]，特別在結(jié)果判定過(guò)程中存在一定的主觀性，故建議盡可能保證檢測(cè)隊(duì)伍的穩(wěn)定，并持續(xù)對(duì)檢測(cè)人員開(kāi)展專業(yè)技能培訓(xùn)，提高檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。

4 結(jié)論

經(jīng)過(guò)9 年持續(xù)開(kāi)展覆蓋全市的區(qū)縣獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室比對(duì)發(fā)現(xiàn)，重慶市基層獸醫(yī)系統(tǒng)實(shí)驗(yàn)室整體檢測(cè)水平有了很大提升，說(shuō)明重慶市基層獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室能力建設(shè)卓有成效。然而，仍有個(gè)別區(qū)縣實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果不穩(wěn)定，定量項(xiàng)目檢測(cè)水平欠佳。因此檢測(cè)水平不高的實(shí)驗(yàn)室要查找原因，研究落實(shí)改進(jìn)措施，努力提高檢測(cè)能力，從而為動(dòng)物疫病防控提供強(qiáng)有力的技術(shù)支持。