李 珂，嚴紅亞，覃袖偉，常志順，王天葆，2，信愛國，趙 蓉

（1.云南省畜牧獸醫(yī)科學院養(yǎng)禽與禽病研究所，云南昆明 650224；2.廣南縣舊莫鄉(xiāng)畜牧獸醫(yī)站，云南廣南 663302）

禽白血病病毒（avian leucosis virus，ALV）、禽網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增生病毒（avian retic uloendotheliosis virus，REV）和雞傳染性貧血病毒（chicken infectious anemia virus，CAV）是雞群中常見的免疫抑制性病原，可以感染多種禽類，造成免疫系統(tǒng)損傷和嚴重的免疫抑制，導(dǎo)致感染禽群生產(chǎn)性能降低或死亡[1-2]；禽腦脊髓炎病毒（avian encephalomyelitis virus，AEV）主要侵害家禽中樞神經(jīng)并引起非化膿性腦脊髓炎，導(dǎo)致感染禽群生產(chǎn)性能下降。這4 種病毒均可垂直傳播，且極易與其他病原和寄生蟲發(fā)生混合或繼發(fā)感染，給養(yǎng)雞業(yè)特別是種雞飼養(yǎng)業(yè)造成巨大經(jīng)濟損失[3]。我國寧夏、湖北、廣東、山東、吉林、重慶、浙江等多個省區(qū)市先后報道了ALV、REV、CAV 單獨或混合感染情況，其流行日趨嚴重[1-4]。云南省具有豐富的家禽遺傳資源，優(yōu)質(zhì)地方雞品種較多。據(jù)流行病學調(diào)查，云南省茶花雞群中存在ALV 感染[5]，昆明市地方雞群中存在REV 感染[6]。為了解云南省地方雞群這4 種病原的流行情況，2019 年對云南省5個區(qū)域的8 個品種地方雞群，采集血清樣品進行了ALV、REV、CAV 和AEV 血清學檢測，以期為這4 種病毒病預(yù)防提供數(shù)據(jù)支持。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試驗樣品 2019 年從滇東（昭通、文山）、滇西（大理）、滇中（楚雄）、滇南（紅河綠春）和滇北（麗江、迪慶）5 個區(qū)域，選取8 個各區(qū)域主要地方品種（南澗烏骨雞、尼西雞、云龍矮腳雞、綠春黃連雞、寧蒗高原雞、武定雞、文山土雞、鹽津烏骨雞）種雞場，翅靜脈采集血清進行抗體檢測。采樣雞群未進行ALV、REV、CAV 和AEV 免疫，且未見這4 種病原感染的明顯發(fā)病癥狀。采樣時，參考多省區(qū)市檢測結(jié)果，采用估計流行率抽樣法，設(shè)置信水平95%、可接受誤差10%、預(yù)期流行率50%，對照統(tǒng)計學中大群體估計患病率樣品抽樣表（Cannon 和Roe 二氏，1982），確定最少抽樣樣品數(shù)為96 份。綜合考慮不同品種雞場存欄規(guī)模，在各品種雞場采取隨機抽樣方式，共無菌采集2 295 份血清樣品，其中南澗烏骨雞610 份、尼西雞300 份、云龍矮腳雞300 份、綠春黃連雞260 份、寧蒗高原雞105份、武定雞300份、文山土雞130份、鹽津烏雞290 份。

1.1.2 診斷試劑 ALV-J 亞群抗體檢測試劑盒，購自美國IDEXX 公司；REV、CAV 和AEV 抗體檢測試劑盒，購自荷蘭BioChek 公司。

1.2 方法

1.2.1 抗體檢測 無菌采血，離心分離血清，按照ALV-J 亞群、REV、CAV 和AEV 的ELISA 抗體檢測試劑盒說明書進行抗體檢測和結(jié)果判定。

1.2.2 數(shù)據(jù)分析 將檢測結(jié)果錄入Excel，按品種、區(qū)域和混合感染類別進行統(tǒng)計和描述，分析不同區(qū)域、不同品種雞群ALV、REV、CAV 和AEV 的感染情況及混合感染種類。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同品種

8 個地方品種雞群的血清抗體檢測結(jié)果（表1）顯示：ALV、REV、CAV 和AEV 平均抗體陽性率分別為27.02%、72.77%、98.47% 和76.25%。不同品種雞群中，4 種病原的陽性率存在一定差異：ALV 陽性率，云龍矮腳雞最高（50.00%），綠春黃連雞最低（0）；REV 陽性率，云龍矮腳雞和寧蒗高原雞最高（均為100%），文山土雞最低（42.31%）；CAV 陽性率，8 個品種介于96.67%～100%；AEV 陽性率，綠春黃連雞較低（28.85%），其余介于73.33%～95.24%。

2.2 不同區(qū)域

滇東、滇西、滇中、滇南和滇北5 個區(qū)域的結(jié)果對比（表2）顯示：ALV 陽性率，滇南最低（0），滇中最高（38.33%）；REV 陽性率，滇北（65.43%）、滇西（65.93%）較低，而滇南（86.54%）、滇中（91.67%）較高；CAV 陽性率，各區(qū)域均較高，介于95.00%～100%；AEV 陽性率，滇南最低（28.85%），其他地區(qū)都在75%以上，其中滇東最高（90.48%）。

表1 云南省8 個地方品種雞雞群ALV、REV、CAV、AEV 抗體檢測結(jié)果

表2 云南省不同區(qū)域ALV、REV、CAV、AEV 抗體檢測結(jié)果

2.3 混合感染

2.3.1 不同混合感染類型 4 種病毒的混合感染檢測結(jié)果（表3～4）顯示：8 個地方品種雞群存在多種混合感染類型，其中二重感染（CAV+REV、CAV+AEV）、三重感染（CAV+REV+AEV）和四重感染（CAV+REV+AEV+ALV）的平均陽性率分別為32.90%、36.38%、15.90%。

2.3.2 不同區(qū)域混合感染 統(tǒng)計結(jié)果（表5）顯示：5 個區(qū)域普遍存在不同程度的混合感染，但各區(qū)域之間存在一定差異，其中滇東和滇中以三重感染為主，伴有二重和四重感染；滇西和滇北以二重和三重感染為主，伴有四重感染；滇南以二重感染為主，伴有三重感染。

表3 血清樣品中ALV、REV、CAV、AEV 單一感染和混合感染的檢測結(jié)果（n=2 295）

表4 云南省8 個地方品種雞ALV、REV、CAV、AEV 混合感染檢測結(jié)果

表5 云南省不同區(qū)域ALV、REV、CAV、AEV 混合感染檢測結(jié)果

3 討論

本研究對2019 年采自云南省5 個區(qū)域8 個品種地方雞的2 295 份血清樣品，應(yīng)用商品化ELISA 試劑盒進行了ALV、REV、CAV、AEV 血清抗體檢測，發(fā)現(xiàn)云南省地方雞雞群中ALV、REV、CAV、AEV 的抗體檢出率均較高，平均檢出率分別為27.02%、72.77%、98.47%、76.25%，且多以不同病毒組合的混合感染形式存在，尤以REV+CAV+AEV 混合感染率最高（28.32%）。不同區(qū)域、不同品種地方雞群中，除綠春黃連雞及其所屬的滇東地區(qū)未檢出ALV 感染外，其余品種和區(qū)域內(nèi)4 種病毒均有檢出，且均表現(xiàn)不同程度的混合感染，僅滇東地區(qū)未見四重感染。近年來，顏赟等[7]對商品肉雞群免疫抑制性病毒檢測的多重感染率為85.96%，鮑偉華等[3]對寧波市部分雞場免疫抑制性疫病混合感染的檢出率為80.0%。雞群中AEV 感染情況也不容樂觀，蛋雞的AEV 感染率達到了62%，放養(yǎng)雞群更是高達78%[8-10]。但未見關(guān)于4 種病毒多重感染的報道。本調(diào)查發(fā)現(xiàn)，云南省地方品種雞群中，4 種病毒的多重感染率高達99.78%，說明4 種病毒共感染現(xiàn)象在云南省地方品種雞群中非常嚴重，需要引起高度重視。

ALV、REV、CAV、AEV 多以隱性感染形式存在于臨床健康雞群中。當雞群因各種應(yīng)激因素導(dǎo)致抵抗力降低時，這些病毒就會大量復(fù)制，從而引起雞群發(fā)病和死亡，并可垂直傳播給下一代，導(dǎo)致上述病原難以根除。外來品種帶入、自然感染和部分禽用疫苗制品質(zhì)量不達標，可能是導(dǎo)致這些病原在雞群中廣泛存在的重要原因。云南省地處我國西南邊陲，動植物資源豐富，擁有數(shù)量龐大的家禽品種資源，但由于交通相對不便、飼養(yǎng)管理水平相對落后等原因，多數(shù)家禽品種未能得到很好的開發(fā)利用，仍然處于原代狀態(tài)。種雞場的種雞多從農(nóng)戶收購，而農(nóng)戶以放養(yǎng)和散養(yǎng)為主，其飼養(yǎng)的雞與野生感染禽類或外來品種病禽接觸的概率較高，背景相對復(fù)雜。由于上述病毒多呈隱形感染狀態(tài)，容易被忽視或難以發(fā)現(xiàn)，因而增加了病原傳播的可能。

目前國家對生產(chǎn)疫苗的SPF 雞群檢測管理仍不完善，雞群衛(wèi)生狀況令人擔憂。雞群注射了被病毒污染的疫苗，也可導(dǎo)致病毒抗體陽性[3]。據(jù)相關(guān)研究報道[11-12]，我國在部分批次的禽用疫苗中檢出了一種或多種免疫抑制性病毒陽性。本調(diào)查目的是了解云南省地方雞群中ALV、REV、CAV、AEV的感染情況，采集的血清樣品分別來源于8 個地方品種的種雞場，未進行4 種病毒的免疫接種，因此檢測出病毒抗體陽性即表明存在病毒感染，至于是自然感染，還是疫苗污染感染，仍需通過病原學方法進行深入探究。

4 種病毒中，ALV、REV、CAV 均可引起免疫抑制。國內(nèi)一些專家學者研究發(fā)現(xiàn)，多種免疫抑制性疾病病原的混合感染，具有協(xié)同或促進作用，增強了病毒對雞體免疫系統(tǒng)的破壞作用，可造成嚴重的免疫抑制，使機體內(nèi)免疫應(yīng)答降低，進而影響其他疫苗免疫抗體的產(chǎn)生，且混合感染抗體陽性率越高，其疫苗免疫抗體水平越低，導(dǎo)致免疫失敗的概率越高[13-15]。即使采取強化免疫，仍有部分個體處于不完全免疫狀態(tài)[16]，這極大增加了禽病發(fā)生概率和治療難度，特別是給禽流感、新城疫等重大動物疫病的免疫防控帶來了巨大壓力，存在因免疫失敗而引起疫病流行的風險。故開展地方品種種雞場特別是祖代種雞場的免疫抑制性疫病及AEV 的檢測，及時淘汰陽性雞群，建立無病毒的核心群，阻斷垂直傳播，定期對使用疫苗進行病毒檢測，避免使用病毒污染疫苗，同時加強飼養(yǎng)管理，提高雞群免疫力和雞場生物安全管理能力，是控制上述病毒流行的有效措施，并可降低疫病特別是重大疫病的發(fā)生風險。

4 結(jié)論

調(diào)查發(fā)現(xiàn)，云南省地方品種雞群的ALV、REV、CAV、AEV 感染較嚴重，感染十分普遍，且多以不同組合的混合感染形式存在，雖有一定的地區(qū)和品種分布差異，但無明顯規(guī)律性。建議加強地方品種雞群中4 種垂直傳播病毒的檢測，及時淘汰陽性雞群，逐漸凈化種群，同時定期進行疫苗污染監(jiān)測，提升飼養(yǎng)管理水平，保障云南地方雞種質(zhì)資源的安全健康發(fā)展。