宋 晨，樊宏亮，2，王 琪，徐文琦，麻海瀾，呂向聰，王曉凱，趙紅霞*

（1.內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)獸醫(yī)學(xué)院，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010010；2.內(nèi)蒙古伊利實(shí)業(yè)集團(tuán)股份有限公司，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010010）

梅公散以烏梅、蒲公英、金銀花、連翹為主，并配以其他輔藥、矯正藥組合而成，具有較強(qiáng)的體外抗菌作用。為進(jìn)一步系統(tǒng)研究該中藥復(fù)方的抗炎作用及其抗炎作用機(jī)制，本試驗(yàn)展開針對(duì)梅公散對(duì)小鼠血液和組織中PGE2含量影響的研究，旨在為梅公散復(fù)方的臨床藥效評(píng)價(jià)奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物

純昆明種小鼠96 只，體重（20±2）g，雌、雄兼用，購(gòu)自內(nèi)蒙古大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。

1.2 試驗(yàn)材料

本實(shí)驗(yàn)室加工的梅公散，由烏梅、蒲公英、金銀花、連翹等中藥煎制而成；地塞米松磷酸鈉注射液（批號(hào)為08051211）購(gòu)自天津藥業(yè)焦作有限公司。

1.3 試劑與儀器

小鼠SE-selectin測(cè)定試劑盒，購(gòu)自江蘇酶標(biāo)生物科技有限公司；二甲苯、甲醛，均購(gòu)自天津市風(fēng)船化學(xué)試劑科技有限公司；蛋清。

Acculab ACL電子天平，購(gòu)自德國(guó)賽多科斯股份公司；低速離心機(jī)，購(gòu)自安徽中科中佳科學(xué)儀器有限公司；三用恒溫水箱，購(gòu)自金壇市杰瑞爾電器有限公司；高壓滅菌鍋，購(gòu)自日本HIRAYAMA公司；紫外可見分光光度計(jì)，購(gòu)自北京普析通用儀器有限責(zé)任公司；風(fēng)熱高溫烘干箱，購(gòu)自上海?，攲?shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司；多功能酶標(biāo)儀，購(gòu)自美國(guó)伯騰儀器有限公司。

1.4 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

采用二甲苯致炎法[1-5]，將96 只小鼠隨機(jī)分為4 組，每組2 個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)12 只；每組中選擇一個(gè)重復(fù)的小鼠應(yīng)用于測(cè)定耳廓、足跖腫脹，另一重復(fù)小鼠做其他試驗(yàn)用。連續(xù)灌喂4 d，1次/d。分組及給藥方案見表1。

表1 試驗(yàn)分組及給藥方案Tab.1 Experimental groups and administration scheme

1.5 測(cè)定指標(biāo)及方法

1.5.1 耳廓腫脹

第4 d給藥30 min后，將致炎劑二甲苯按0.02 mL/10 g兩面涂布于每只小鼠左耳前后，右耳作為對(duì)照。30 min后脫頸椎處死小鼠，沿耳廓線剪下兩耳，使用內(nèi)徑為7 mm的打孔器以對(duì)稱位置取小鼠左右耳片稱重，以每只小鼠的左耳片重減去右耳片重，即為左耳腫脹重量。

1.5.2 足跖腫脹

采用小鼠足跖腫脹法[1-3]。第4 d 給藥30 min 后，于每只小鼠左后足跖部皮下注射10%的蛋清0.01 mL，右后足跖部皮下注射2.5%甲醛溶液0.01 mL。分別于致炎前及致炎后0.5、1.0、2.0、3.0、4.0 h 測(cè)量左右足厚度并記錄，4 h后脫頸椎處死小鼠，踝關(guān)節(jié)處剪取炎癥后足稱重。計(jì)算左右足跖腫脹率。

1.5.3 血清中PGE2含量

第4 d給藥30 min后，將致炎劑二甲苯按0.02 mL/10 g的給藥劑量涂布于每只小鼠左耳前后，右耳作為對(duì)照，30 min 后分別從小鼠左右眼眶取血，并脫頸椎處死小鼠。小鼠血液3 000 r/min 離心15 min，取上清液，參照文獻(xiàn)[3]和文獻(xiàn)[6]競(jìng)爭(zhēng)性ELISA方法測(cè)定樣品中PGE2含量。

1.5.4 腫脹足中PGE2含量

第4 d 給藥30 min 后，每只小鼠后肢右足跖皮下注射1%甲醛0.01 mL致炎，左趾注射10%的蛋清0.01 mL。3 h后脫頸椎處死小鼠，剪下致炎后肢，稱重剪碎后置于6 mL生理鹽水中浸泡1 h，超聲提取0.5 h，浸泡液3 000 r/min離心15 min，取上清液0.3 mL 于試管內(nèi)，加入0.5 mol/L 的KOH-甲醇溶液2 mL，50 ℃水浴中異構(gòu)化20 min，加甲醇稀釋至10 mL，參照文獻(xiàn)[3]和文獻(xiàn)[6]競(jìng)爭(zhēng)性ELISA方法測(cè)定小鼠腫脹足中PGE2的含量。

1.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析

數(shù)據(jù)采用SPSS 19.0 軟件進(jìn)行單因素方差分析（One-way ANOVA），采用LSD 法進(jìn)行多重比較.結(jié)果以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示，P＜0.05 表示差異顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 梅公散對(duì)二甲苯所致小鼠耳廓腫脹的影響（見表2）

表2 梅公散對(duì)二甲苯致小鼠耳廓腫脹的影響Tab.2 Effect of Meigong powder on xylene-induced auricle swelling in mice單位：mg

由表2 可知，與陰性對(duì)照組相比，高劑量組及陽(yáng)性對(duì)照組均極顯著抑制二甲苯所致小鼠耳廓腫脹（P＜0.01），低劑量組顯著抑制二甲苯所致小鼠耳廓腫脹（P＜0.05）。

2.2 梅公散對(duì)蛋清和甲醛所致小鼠足趾腫脹率的影響（見表3、表4）

由表3可知，與陰性對(duì)照組相比，致炎2 h后，給予高劑量的梅公散可顯著抑制蛋清所致小鼠足趾腫脹（P＜0.05）；而在致炎4 h后，給予高、低劑量的梅公散均可極顯著抑制蛋清所致小鼠足趾腫脹（P＜0.01）。

表3 梅公散對(duì)蛋清所致小鼠足趾腫脹率的影響Tab.3 Effect of Meigong powder on toe swelling rate induced by egg white in mice 單位：%

由表4可知，與陰性對(duì)照組相比，致炎2 h后，給予低劑量的梅公散可極顯著抑制甲醛所致小鼠足趾腫脹（P＜0.01），給予高劑量的梅公散可顯著抑制甲醛所致小鼠足趾腫脹（P＜0.05）；致炎4 h后，低劑量梅公散可極顯著抑制甲醇所致小鼠足趾腫脹（P＜0.01），高劑量梅公散可顯著抑制甲醇所致小鼠足趾腫脹（P＜0.05）。

表4 梅公散對(duì)甲醛所致小鼠足趾腫脹率的影響Tab.4 Effect of Meigong powder on toe swelling rate induced by formaldehyde in mice 單位：%

2.3 梅公散對(duì)二甲苯致炎模型小鼠血清中PGE2含量的影響（見表5）

由表5可知，與陰性對(duì)照組相比較，高劑量的梅公散可顯著降低小鼠血清中PGE2含量（P＜0.05），而低劑量的梅公散則對(duì)血清中PGE2含量則無(wú)顯著作用（P＞0.05）。

表5 梅公散對(duì)二甲苯致炎模型小鼠血清中PGE2含量的影響Tab.5 Effect of Meigong powder on the content of PGE2 in serum of mice with xylene-induced inflammation 單位：μg/mL

2.4 梅公散對(duì)甲醛和蛋清所致小鼠腫脹足中PGE2含量的影響（見表6、表7）

由表6、表7 可知，與陰性對(duì)照組相比較，高劑量的梅公散可顯著降低甲醛和蛋清所致小鼠腫脹足中PGE2的含量（P＜0.05），而低劑量的梅公散則無(wú)顯著作用（P＞0.05）。

表6 梅公散對(duì)甲醛所致小鼠腫脹足中PGE2含量的影響Tab.6 Effect of Meigong powder on PGE2 content in mice swollen feet induced by formaldehyde 單位：μg/mL

表7 梅公散對(duì)蛋清所致小鼠腫脹足中PGE2含量的影響Tab.7 Effect of Meigong powder on PGE2 content in mice swollen feet induced by egg white 單位：μg/mL

3 討論

炎癥反應(yīng)嚴(yán)重?fù)p害動(dòng)物機(jī)體，甚至導(dǎo)致其死亡[7]。PGE2是一種炎癥介質(zhì)，當(dāng)動(dòng)物機(jī)體受到某些致炎因素影響時(shí)，PGE2大量釋放，使血管擴(kuò)張、通透性升高，引起組織腫脹，產(chǎn)生炎癥反應(yīng)，因此，抑制PGE2合成可減輕炎癥反應(yīng)[8-10]。研究發(fā)現(xiàn)，PGE2在急性炎癥后期時(shí)起極為重要的作用，且作用時(shí)間較持久[11]。臨床上常應(yīng)用抗炎藥物治療動(dòng)物機(jī)體的炎癥反應(yīng)，抗炎藥物以西藥為主，分為甾體類和非甾體類，雖然抗炎效果非常顯著，但長(zhǎng)期使用化學(xué)藥物可能會(huì)導(dǎo)致中樞神經(jīng)系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)及肝臟、腎臟的損傷，產(chǎn)生毒性反應(yīng)。有研究表明，許多中藥及其有效成分特具有較強(qiáng)的抗炎作用，以副作用小、作用靶點(diǎn)多、作用通路多、高效低毒等優(yōu)點(diǎn)廣泛應(yīng)用于臨床治療[12-14]。

本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在小鼠耳廓腫脹炎癥模型中，高、低劑量的梅公散均可抑制小鼠耳廓腫脹度，且高劑量梅公散對(duì)小鼠耳廓腫脹度的抑制效果與地塞米松組相當(dāng)。張浩等[5]研究發(fā)現(xiàn)，荊門上清丸高、中劑量組可抑制二甲苯致的小鼠耳廓腫脹。陳美安等[4]研究發(fā)現(xiàn)，蘭香草各提取部位高劑量組及乙酸乙酯部位中、高劑量組均可顯著抑制小鼠耳廓腫脹。本研究雖與上述研究的藥物不同，但高劑量組可抑制二甲苯所致小鼠耳廓腫脹，說(shuō)明梅公散、荊門上清丸、蘭香草對(duì)急性炎癥均存在一定抑制作用，且具有劑量依賴性。蛋清和甲醛所致小鼠足趾腫脹試驗(yàn)中，其足趾腫脹度隨時(shí)間延長(zhǎng)均產(chǎn)生一定變化，并在致炎1 h 后達(dá)到峰值；隨著時(shí)間延長(zhǎng)，腫脹度逐漸降低，致炎4 h 后高劑量梅公散可顯著抑制小鼠足趾腫脹，且均高于陽(yáng)性對(duì)照組，表明梅公散具有較好的抗炎作用。本試驗(yàn)中，高劑量梅公散可顯著降低二甲苯、蛋清、甲醛所致小鼠炎癥模型中PGE2含量，低劑量梅公散無(wú)明顯效果，表明梅公散具有一定的抗炎作用，且存在劑量依賴性。

4 結(jié)論

高劑量梅公散可較好地抑制急性炎癥，其作用機(jī)制可能與抑制炎癥介質(zhì)PGE2的合成有關(guān)。該組方結(jié)構(gòu)復(fù)雜，抗炎機(jī)制是否與其他炎癥因子有關(guān)仍待進(jìn)一步探討。