王延朋 王啟船 柳云飛 謝 陽(yáng) 陳濤利 高新雅

目前，隨著環(huán)境惡化、吸煙人口及職業(yè)暴露的上升，肺癌發(fā)病率已居世界癌癥首位，其中75%～80%患者為非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)，因其5年生存率低，病死于浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)的患者占90%以上，其中，NSCLC不良預(yù)后的重要原因?yàn)橄嚓P(guān)基因異常表達(dá)[1-2]。泛素-蛋白酶體系統(tǒng)(UPS)是細(xì)胞內(nèi)蛋白降解途徑，其降解途徑屬于可逆過(guò)程；去泛素化酶(DUBs)在細(xì)胞生長(zhǎng)、凋亡、遺傳性腫瘤、神經(jīng)退行性疾病等中發(fā)揮著重要作用，其主要成員為卵巢癌結(jié)構(gòu)域蛋白酶(OTUD)，在人類(lèi)腦、肺、腎等組織內(nèi)有廣泛表達(dá)[3-4]。然而，肺癌組織病理與OTUD1基因表達(dá)相關(guān)性的報(bào)道尚不多見(jiàn)。本研究旨在探究OTUD1在NSCLC中的表達(dá)情況?，F(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2017年2月至2019年10月在南陽(yáng)市第二人民醫(yī)院治療的70例NSCLC患者，選取其癌組織石蠟標(biāo)本(n=70)及對(duì)應(yīng)癌旁組織(n=70)。男性44例，女性26例；年齡50～75歲，平均(58.05±0.20)歲；病理類(lèi)型：腺癌32例，鱗癌32例，其它6例；TNM分期：Ⅰ期10例，Ⅱ期17例，Ⅲ期20例，Ⅳ期23例；40例有吸煙史，25例有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。所有標(biāo)本均于手術(shù)中采集。本院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審核并通過(guò)本研究。

1.2 免疫組織化學(xué)染色及評(píng)分

NSCLC及癌旁正常組織切片均應(yīng)用免疫組織化學(xué)S-P法對(duì)其進(jìn)行染色。滴加一抗兔抗人OTUD1抗體4 ℃過(guò)夜，室溫將其置于生物素化的二抗辣根過(guò)氧化物酶中繼續(xù)孵育30 min。DAB顯色，蘇木精復(fù)染，封片后觀察并攝片。由2名專(zhuān)業(yè)病理科醫(yī)生獨(dú)立評(píng)估免疫組織化學(xué)結(jié)果，根據(jù)切片中細(xì)胞是否顯色、深淺評(píng)分，對(duì)染色強(qiáng)度進(jìn)行詳細(xì)的分類(lèi)：無(wú)著色為0分；淺黃色為1分；深黃色為2分；棕褐色為3分。計(jì)算每100個(gè)細(xì)胞中陽(yáng)性細(xì)胞所占百分比，其中占比<1/3為1分；>1/3～2/3為2分；>2/3為3分。2組評(píng)分相乘，陰性(-)<1分；陽(yáng)性(+)2～4分；強(qiáng)陽(yáng)性(++)>5分。OTUD1低表達(dá)0～4分，OTUD1高表達(dá)5～7分。

1.3 觀察指標(biāo)

(1)比較肺癌組織、癌旁正常組織OTUD1表達(dá)水平。(2)采用COX回歸分析性別、年齡、吸煙與否、淋巴結(jié)有無(wú)轉(zhuǎn)移、TNM分期、病理類(lèi)型與OTUD1蛋白表達(dá)的相關(guān)性。(3)經(jīng)Kaplan-Meier及COX回歸分析影響患者預(yù)后的相關(guān)因素。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

使用SPSS 22.0分析數(shù)據(jù)。計(jì)數(shù)資料使用頻數(shù)表示，卡方檢驗(yàn)進(jìn)行比較；使用Kaplan-Meier及COX進(jìn)行相關(guān)性分析。P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 肺癌組織、癌旁正常組織OTUD1表達(dá)水平比較

肺癌組織的OTUD1高表達(dá)率為48.57%(34/70)，顯著高于癌旁正常組織的5.71%(4/70),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=35.840，P<0.05)。

2.2 OTUD1與非小細(xì)胞肺癌臨床病理特征的關(guān)系

非小細(xì)胞肺癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者組織中OTUD1表達(dá)率高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者，TNM分期Ⅰ～Ⅱ者低于TNM分期Ⅲ～Ⅳ者(P<0.05)。見(jiàn)表1。

表1 不同臨床特征間OTUD1表達(dá)水平比較/例

2.3 NSCLC患者生存的影響因素分析

經(jīng)Kaplan-Meier及COX回歸分析顯示：淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期、OTUD1表達(dá)是患者生存的影響因素(P<0.05)，見(jiàn)圖1。見(jiàn)表2。

表2 NSCLC患者生存的影響因素分析表

圖1 NSCLC患者OTUD1表達(dá)情況與生存分析圖

3 討論

隨著外科手術(shù)方式的改進(jìn)及綜合治療方案的實(shí)施，以及分子生物靶向藥物的出現(xiàn)，肺癌患者的臨床治療取得較大的進(jìn)展，但總體5年生存率仍不樂(lè)觀，因此倡導(dǎo)個(gè)體化和精準(zhǔn)化治療成為目前的主流治療模式[5-6]。

近幾年，臨床廣泛關(guān)注泛素化酶與DUBs對(duì)于細(xì)胞周期調(diào)控及其與腫瘤發(fā)生的關(guān)系[7]。OTUDs屬于去泛素化酶家族一個(gè)重要成員，OTUD1為最早在體外證實(shí)可以發(fā)揮去泛素化酶活性作用的OTUD蛋白，包含1個(gè)由130個(gè)氨基酸組成的OTUD結(jié)構(gòu)域，且高度保守[8-10]。去泛素化酶可將泛素從泛素連接底物上移除，發(fā)揮調(diào)節(jié)細(xì)胞的增殖、周期進(jìn)程、轉(zhuǎn)錄激活及信號(hào)傳導(dǎo)等過(guò)程。目前關(guān)于OTUD1作用機(jī)制有以下兩種觀點(diǎn)，一種觀點(diǎn)認(rèn)為[11]，OTUD1可誘發(fā)p53依賴(lài)的細(xì)胞凋亡及抑制細(xì)胞增殖；另一種觀點(diǎn)認(rèn)為[12]，OTUD1可以與SMAD2/3結(jié)合，被抑制磷酸化的SMAD2/3可以通過(guò)蛋白酶體途徑進(jìn)行降解。姜維娜等[13]研究報(bào)道，OTUD1在結(jié)腸癌組織中的表達(dá)較癌旁組織高3.5倍，癌組織中OTUD1的蛋白表達(dá)水平也明顯高于癌旁組織。段菲[14]、熊金升[15]等分別在乳腺癌及膠質(zhì)細(xì)胞瘤中發(fā)現(xiàn)OTUD1在癌細(xì)胞組織中高表達(dá)的生物學(xué)行為。OTUD1高表達(dá)可作為預(yù)后不良的標(biāo)志物，其在卵巢癌和胃腺癌中促進(jìn)癌細(xì)胞的侵襲、轉(zhuǎn)移，通過(guò)抑制RAS泛素化促進(jìn)肺癌的發(fā)展。本次研究證實(shí)了OTUD1在NSCLC組織中的表達(dá)顯著高于正常肺組織，然而，其與其他臨床及病理特征之間的相關(guān)性不顯著，表明在NSCLC的發(fā)生發(fā)展中OTUD1高水平與之有著重要關(guān)系，上述研究的發(fā)現(xiàn)，可為以后關(guān)于肺癌的個(gè)體化及精準(zhǔn)化治療提供新的治療方向。國(guó)外學(xué)者研究報(bào)道[16]，OTUD1在結(jié)直腸癌組織中的表達(dá)水平與TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤浸潤(rùn)深度呈正相關(guān)，且可作為無(wú)進(jìn)展生存期和總生存期的一個(gè)獨(dú)立預(yù)后因素。本次研究發(fā)現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期及OTUD1高表達(dá)與患者的生存質(zhì)量相關(guān)，與上述研究報(bào)道相一致。本次研究中，與OTUD1低表達(dá)患相比，OTUD1高表達(dá)患者預(yù)后較差，進(jìn)一步表明，OTUD1高表達(dá)患者可能為預(yù)后高危人群。本研究對(duì)OTUBl蛋白在NSCLC中的作用機(jī)制提供了初步的實(shí)驗(yàn)依據(jù)，相信進(jìn)一步深入研究將為NSCLC的診治及新型化療藥物的研制提供新的方向。

綜上，OTUD1在NSCLC組織中高表達(dá)，與不良預(yù)后顯著相關(guān)，可以作為評(píng)估預(yù)后的獨(dú)立因素，并為NSCLC的生物靶向治療提供了一個(gè)新的思路。