李春勇，金 靜，王 霞，秦 曙

（山西功能農(nóng)產(chǎn)品檢驗(yàn)檢測(cè)中心，農(nóng)業(yè)農(nóng)村部農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估實(shí)驗(yàn)室（太原），太原 030031）

嘧菌酯（azoxystrobin）是一種全新的β-甲氧基丙烯酸酯類(lèi)殺菌劑，用于防治作物白粉病、褐斑病、霜霉病等多種病害[1]，在我國(guó)已登記使用在黃瓜、水稻、大豆等多種作物上[2-5]。目前國(guó)際上已制定的嘧菌酯在洋蔥上的最大殘留限量值為美國(guó)（1.0 mg/kg）、澳大利亞（2.0 mg/kg）、韓國(guó)（0.1 mg/kg）、歐盟（10 mg/kg）、日本（10 mg/kg），但我國(guó)尚未制定嘧菌酯在洋蔥上的最大殘留限量。

目前，嘧菌酯在作物和蔬菜上的檢測(cè)分析方法及殘留行為已有較多報(bào)道[6-8]，大多通過(guò)乙腈提取，固相萃取柱凈化后，采用氣相、液相色譜法進(jìn)行檢測(cè)。2018年農(nóng)藥殘留聯(lián)席會(huì)議報(bào)道了嘧菌酯在番石榴、火龍果、甘蔗、油菜籽等作物上的殘留行為[9]。結(jié)果表明，各種基質(zhì)的添加回收率及相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差均符合試驗(yàn)要求，其中在埃及進(jìn)行的番石榴試驗(yàn)中，嘧菌酯殘留量為小于0.014～0.106 mg/kg；在印度尼西亞和越南進(jìn)行的火龍果試驗(yàn)中，其最終殘留量值為小于0.008～0.653 mg/kg；在巴西甘蔗試驗(yàn)中，其最終殘留量值為小于0.010～0.080 mg/kg；在加拿大、美國(guó)的油菜籽試驗(yàn)中，其最終殘留量值為小于0.010～1.350 mg/kg。然而，關(guān)于嘧菌酯在洋蔥上的殘留消解未見(jiàn)報(bào)道。

本研究采用高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀（UPLCMS/MS）檢測(cè)技術(shù)，結(jié)合QuEChERS前處理方法，檢測(cè)洋蔥中嘧菌酯殘留量，研究其殘留和消解趨勢(shì)，為我國(guó)制定嘧菌酯在洋蔥上的殘留限量標(biāo)準(zhǔn)提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 儀器及試劑

TSQ QUANTUM ACCESS高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀，賽默飛世爾科技公司；QUINTIX224-1CN、BS210S、CAP8201天平，賽多利斯科學(xué)儀器（北京）有限公司；GM300刀式研磨儀，德國(guó)萊馳公司；5804 R、5824 R離心機(jī)、Varispenser 10-50 mL瓶口分液器，艾本德（德國(guó)）公司；LP2500多管渦旋混合儀，萊普特科學(xué)儀器：XK80-A快速混勻器，江蘇新康醫(yī)療器械有限公司。

嘧菌酯標(biāo)準(zhǔn)品：純度99.0%，國(guó)家農(nóng)藥質(zhì)檢中心；50%嘧菌酯水分散粒劑，海利爾藥業(yè)集團(tuán)股份有限公司；甲醇（色譜純），德國(guó)默克公司；乙腈（色譜純），美國(guó)天地試劑公司；甲酸（色譜純），美國(guó)費(fèi)希爾公司；乙酸銨（光譜純），天津光復(fù)科技發(fā)展有限公司；檸檬酸三鈉、檸檬酸氫二鈉鹽（分析純），國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；氯化鈉（分析純），北京化工集團(tuán)有限公司；無(wú)水硫酸鎂（分析純），天津鼎盛鑫化工有限公司；PSA、Cleanert PestiCarb（GCB），博納艾杰爾科技有限公司；鹽包：SHIMADZU-GL WondaPak QuEChERS SPE（4 g MgSO4＋1 g NaCl＋1g檸檬酸鈉＋0.5 g檸檬酸氫二鈉）、吸附劑：SHIMADZU-GL WondaPak QuEChERS SPE（142.5 mg MgSO4＋20 mg PSA＋7.5 mg GC-e），島津（上海）實(shí)驗(yàn)器材有限公司。

1.2 田間試驗(yàn)方法

于2018年分別在山西省晉中市、河南省濟(jì)源市、江蘇省南京市、上海市奉賢區(qū)、廣西南寧市、山東省濟(jì)南市六地進(jìn)行了嘧菌酯在洋蔥上的殘留田間試驗(yàn)。50%嘧菌酯水分散粒劑在洋蔥上的最終殘留試驗(yàn)的施藥劑量為300、450 g/hm2，施藥2次和3次，施藥間隔7 d，每個(gè)處理重復(fù)3次，小區(qū)面積15 m2。消解動(dòng)態(tài)試驗(yàn)按劑量450 g/hm2于洋蔥生長(zhǎng)至一半大小時(shí)施藥1次，重復(fù)3次，在處理小區(qū)相鄰位置設(shè)置空白對(duì)照，小區(qū)間設(shè)置隔離帶。

于最后一次施藥后14、21、28 d用隨機(jī)的方法在試驗(yàn)小區(qū)內(nèi)采集12株生長(zhǎng)正常、無(wú)病害的洋蔥頭作為最終殘留樣品。距施藥后2 h，1、3、5、7、10、14、21、30、45 d采用相同的辦法采集洋蔥植株樣品作為消解動(dòng)態(tài)樣品，切成1 cm以下的碎塊，充分混勻，用四分法分取150 g 2份，于-20℃冰柜保存，備用。

1.3 分析方法

1.3.1 樣品提取與凈化

稱(chēng)取粉碎的洋蔥樣品10.0 g于50 mL離心管中，加入10 mL乙腈，2500 r/min渦旋振蕩提取5 min。加入4 g無(wú)水硫酸鎂、1 g NaCl、1 g檸檬酸鈉和0.5 g檸檬酸氫二鈉，2500 r/min渦旋振蕩5 min，8000 r/min離心5 min。取上清液1.5 mL，至含吸附劑（142.5 mg MgSO4＋20 mg PSA＋7.5 mg GC-e）的2 mL凈化管中，2500 r/min渦旋振蕩5 min，5000 r/min離心2 min，取上清液過(guò)0.22 μm濾膜后待測(cè)。

1.3.2 儀器分析條件

液 相 條 件：Waters Atiantis dC18色 譜 柱（100 mm×2.1 mm，5 μm），液相流速0.3 mL/min，柱溫30℃，進(jìn)樣量10 μL，流動(dòng)相A為4 mmol/L乙酸銨甲醇溶液（含0.1%甲酸），流動(dòng)相B為4 mmol/L乙酸銨水溶液（含0.1%甲酸），梯度洗脫，見(jiàn)表1。

表1 梯度洗脫條件

質(zhì)譜條件：電噴霧離子源（ESI），正離子掃描模式，毛細(xì)管電壓為1.5 kV，鞘氣氣壓為1750 kPa，輔助氣壓為875 kPa，毛細(xì)管溫度為270℃，套管透鏡補(bǔ)償電壓為95 V，碰撞氣體為氬氣。在該質(zhì)譜條件下，嘧菌酯的保留時(shí)間為5.10 min，定性離子對(duì)為404.0/329.0 m/z（碰撞能為30 eV），定量離子對(duì)為404.0/372.0 m/z（碰撞能為15 eV）。

2 結(jié)果與討論

2.1 方法的線性相關(guān)性

精確稱(chēng)取嘧菌酯標(biāo)準(zhǔn)品（精確至0.1 mg），以乙腈溶解定容至10 mL，配成1000 μg/mL標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。分別用洋蔥頭、洋蔥植株的空白對(duì)照樣品溶液（空白對(duì)照樣品溶液制備過(guò)程同樣品前處理，每次與樣品同時(shí)制備）將1000 μg/mL標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液逐級(jí)稀釋配制 得 到0.01、0.02、0.05、0.1、0.2、0.5、1.0、2.0 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液。按1.3.2檢測(cè)條件測(cè)定，每個(gè)樣品進(jìn)樣3次，以質(zhì)量濃度x為橫坐標(biāo)，平均色譜峰面積y為縱坐標(biāo)，得到洋蔥頭基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為y=5×107x＋134505，相關(guān)系數(shù)R2=0.9999，洋蔥植株基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為洋蔥植株y=5×107x＋51304，相關(guān)系數(shù)R2=0.9998，方法定量限為0.01 μg/mL。

2.2 方法添加回收率及相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差

洋蔥頭在0.01、0.1、2.0 mg/kg添加水平下，嘧菌酯的平均回收率分別為96%、104%和94%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）均為3%，洋蔥植株在0.01、0.1、15.0 mg/kg添加水平下，平均回收率分別為101%、100%和100%，RSD值為2%、0.4%和2%，符合NY/T 788—2018《農(nóng)作物中農(nóng)藥殘留試驗(yàn)準(zhǔn)則》[10]。

2.3 最終殘留量

按1.2進(jìn)行最終殘留試驗(yàn)，洋蔥頭樣品采收間隔分別為10、14、21 d時(shí)，嘧菌酯在洋蔥頭上最終殘留量（表2）：山西（紫皮洋蔥）殘留量小于0.010～0.021 mg/kg；河南（黃皮洋蔥）殘留量小于0.010～0.015 mg/kg；江蘇（紅皮洋蔥）殘留量小于0.010 mg/kg；上海（紫玉洋蔥）殘留量小于0.010～0.015 mg/kg；廣西（紅皮洋蔥）殘留量小于0.045～1.08 mg/kg；山東（早紫洋蔥）殘留量小于0.010～0.021 mg/kg。廣西（紅皮洋蔥）最終殘留量顯著大于其他5個(gè)地區(qū)，可能與其的品種特殊有關(guān)，其他五地為常見(jiàn)洋蔥品種，單個(gè)植株只有一個(gè)較大的球狀鱗莖，而廣西樣品雖名叫紅皮洋蔥，但單株有多個(gè)鱗莖且呈不規(guī)則狀，對(duì)農(nóng)藥可能有較強(qiáng)的吸附能力。

表2 嘧菌酯在洋蔥頭中最終殘留試驗(yàn)結(jié)果

2.4 嘧菌酯在洋蔥植株中的消解動(dòng)態(tài)

由動(dòng)力學(xué)方程擬合結(jié)果（表3）表明，洋蔥植株中嘧菌酯的消解符合一級(jí)動(dòng)力學(xué)特征，江蘇、廣西的消解半衰期分別為3.9、3.8 d，降解較快。

3 結(jié)論

本研究建立了QuEChERS與高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀聯(lián)用（UPLC-MS/MS）檢測(cè)洋蔥中嘧菌酯殘留量的方法，回收率、精密度均符合檢測(cè)要求[10]。嘧菌酯在山西、江蘇、廣西洋蔥植株中消解較快，開(kāi)始采集5 d消解率達(dá)到80%左右。農(nóng)藥殘留量數(shù)值受作物品種和生長(zhǎng)期、施藥方式、施藥時(shí)間、以及氣候條件等多方面因素影響。從洋蔥動(dòng)態(tài)試驗(yàn)結(jié)果來(lái)看，山西、江蘇、廣西三地嘧菌酯的消解半衰期為5.7、3.9、3.8 d，試驗(yàn)期間平均氣溫分別為23.1℃、27.8℃、21.5℃，三地平均氣溫相差不大，消解半衰期較接近，推測(cè)嘧菌酯在洋蔥上的消解可能與氣溫有關(guān)。根據(jù)嘧菌酯在我國(guó)登記批準(zhǔn)的GAP數(shù)據(jù)和依據(jù)NY/T 788—2018《農(nóng)藥殘留試驗(yàn)準(zhǔn)則》[10]，在洋蔥上取得的殘留試驗(yàn)數(shù)據(jù)表明，洋蔥中嘧菌酯最終殘留量在小于0.010～1.08 mg/kg，低于世衛(wèi)組織聯(lián)合法典委員會(huì)（CAC）、歐盟和日本規(guī)定的最大殘留量10.0 mg/kg[11]。按照《食品中農(nóng)藥殘留風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估指南》[12]和《我國(guó)農(nóng)產(chǎn)品及食品中農(nóng)藥最大殘留限量制定指導(dǎo)原則》[13]，參照國(guó)際食品法典農(nóng)藥殘留委員會(huì)（CCPR）農(nóng)藥風(fēng)險(xiǎn)分析原則和世衛(wèi)組織農(nóng)藥殘留聯(lián)合專(zhuān)家會(huì)議（JMPR）風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估方法，提出了洋蔥上的最大殘留限量（MRL）建議值為2 mg/kg。結(jié)合我國(guó)農(nóng)藥登記情況和我國(guó)居民的人均膳食結(jié)構(gòu)[14]，普通人群嘧菌酯的國(guó)家估算每日攝入量是1.7 mg，占日允許攝入量的13.7%。根據(jù)本次試驗(yàn)結(jié)果表明，擬推薦的最大殘留限量不會(huì)對(duì)一般人群產(chǎn)生不可接受的風(fēng)險(xiǎn)，建議在洋蔥上使用50%嘧菌酯水分散粒劑時(shí)，最高制劑用藥量為40 g/畝（有效成分為300 g/hm2），最多施藥2次，施藥間隔7 d，安全間隔期14 d。本研究結(jié)果為科學(xué)合理用藥、國(guó)家制定MRL值提供了基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。

表3 嘧菌酯在洋蔥植株中消解動(dòng)力學(xué)參數(shù)