詹永， 廖霞， 楊勇， 羅楊， 徐麗娟

(1.重慶市中藥研究院，重慶 400065； 2.中藥健康學(xué)重慶市重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，重慶 400065； 3.云南民族大學(xué)，云南 昆明 650031)

艾葉為菊科植物艾(ArtemisiaargyiLevl.et Vant.)的干燥葉，是中國(guó)傳統(tǒng)中藥，常用于炎癥、瘟疫、出血、皮膚瘙癢、經(jīng)寒不調(diào)和肺結(jié)核等疾病的預(yù)防治療[1]。艾葉在中國(guó)資源豐富，以河南省、湖北省和湖南省產(chǎn)量較多，但不同產(chǎn)地艾葉質(zhì)量參差不齊。河南省南陽(yáng)市是醫(yī)圣張仲景的故鄉(xiāng)，艾草輸出量大、質(zhì)量好，以“艾草之鄉(xiāng)”享譽(yù)國(guó)內(nèi)外，故產(chǎn)于此地的艾草稱為宛艾[2-3]。宛艾含有揮發(fā)油、鞣質(zhì)、萜類和多酚類物質(zhì)等化學(xué)成分[4-6]，其中，多酚類物質(zhì)在生物活性方面發(fā)揮了重要作用。多酚類物質(zhì)是植物中最常見(jiàn)的活性物質(zhì)，可分為黃酮類、簡(jiǎn)單酚類、酚酸類及花色苷類等，具有很強(qiáng)的抗氧化、抗衰老、抗菌、抗炎、降膽固醇和預(yù)防心血管疾病等作用。多酚類物質(zhì)也是植物中的主要抗氧化活性成分，以黃酮類為主[7-8]，是預(yù)防或減少慢性疾病的關(guān)鍵，具有廣闊的應(yīng)用前景[9]。

艾葉作為中醫(yī)常用藥，目前公認(rèn)湖北省蘄春縣所產(chǎn)的蘄艾最佳，故相關(guān)研究主要集中于蘄艾，且對(duì)于艾葉揮發(fā)油的研究較為普遍。隨著艾葉市場(chǎng)需求增大，宛艾產(chǎn)業(yè)迅猛發(fā)展，南陽(yáng)市已成為中國(guó)最大的艾葉輸出基地。相關(guān)研究表明，宛艾的高效液相色譜(high performance liquid chromatography，HPLC)指紋圖譜可與蘄艾聚為一類，且質(zhì)量高于其他品種艾葉[10-12]。但是，目前關(guān)于宛艾的基礎(chǔ)研究還比較薄弱，有關(guān)多酚類物質(zhì)的研究更是鮮有報(bào)道。因此，本研究以宛艾為原料，以總多酚和總黃酮得率為考察指標(biāo)，優(yōu)化宛艾多酚類物質(zhì)提取工藝，采用高效液相色譜法定性定量分析組成成分，評(píng)估其抗氧化活性，以期為宛艾產(chǎn)業(yè)發(fā)展及其多酚類物質(zhì)的開(kāi)發(fā)利用提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

宛艾，購(gòu)自南陽(yáng)市宛名艾草制品有限公司；蘆丁，分析純，購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院；1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)、亞硝酸鈉、氫氧化鈉、碳酸鈉、沒(méi)食子酸、抗壞血酸，分析純，購(gòu)自山東西亞化學(xué)股份有限公司；2,2′-聯(lián)氮-雙-3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸(ABTS)，分析純，購(gòu)自美國(guó)Sigma公司；硝酸鋁，分析純，購(gòu)自成都市科龍化工試劑廠；甲醇，分析純，購(gòu)自重慶川東化工有限公司；新綠原酸、綠原酸、隱綠原酸、異綠原酸A、異綠原酸C標(biāo)準(zhǔn)品(純度≥98%)，購(gòu)自成都曼斯特生物科技有限公司；乙酸，色譜級(jí)，購(gòu)自西隴科技股份有限公司；乙腈，色譜級(jí)，購(gòu)自美國(guó)Fisher chemical公司。

1.2 試驗(yàn)設(shè)備

752紫外可見(jiàn)光分光光度計(jì)(上海舜宇恒平科技儀器有限公司)；KQ3200E型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)；YF-118B高速藥物粉碎機(jī)(浙江省瑞安市環(huán)球藥械廠)；AUW220D分析天平(日本島津公司)；3-18KS型冷凍離心機(jī)(美國(guó)Sigma公司)；Shimadzu 20A高效液相色譜儀(日本島津公司)。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 宛艾葉多酚類物質(zhì)提取 稱取宛艾樣品粉末0.1 g(過(guò)60目篩)，加入體積分?jǐn)?shù)80%甲醇，超聲波提取60 min，25 ℃冷卻，13 000 r·min-1離心10 min，取上清液，即得提取物溶液，于-18 ℃冷凍保存。

1.3.2 總多酚得率測(cè)定 參照文獻(xiàn)[13]的方法進(jìn)行，采用福林-酚法測(cè)定多酚含量，以沒(méi)食子酸為標(biāo)準(zhǔn)品，760 nm處測(cè)定吸光度值，沒(méi)食子酸質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)(x)，吸光度為縱坐標(biāo)(y)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程為：y=0.004x+0.019(R2=0.997 0)。根據(jù)公式(1)計(jì)算總多酚得率。

(1)

式中：N為稀釋倍數(shù)；C為經(jīng)吸光度計(jì)算得出的總多酚質(zhì)量濃度；V為提取物體積；m為宛艾質(zhì)量。

1.3.3 總黃酮得率測(cè)定 參照文獻(xiàn)[14]的方法進(jìn)行，采用硝酸鋁比色法測(cè)定總黃酮含量，以蘆丁為標(biāo)準(zhǔn)品，510 nm處測(cè)定吸光度值，以蘆丁質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)(x)，吸光度值為縱坐標(biāo)(y)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程為：y=0.005x+0.012(R2=0.999 0)。根據(jù)公式(2)計(jì)算總黃酮得率。

(2)

式中：N為稀釋倍數(shù)；C為經(jīng)吸光度計(jì)算得到總黃酮質(zhì)量濃度；V為提取物體積，；m為宛艾質(zhì)量。

1.3.4 宛艾多酚類物質(zhì)提取單因素試驗(yàn) 精密稱取宛艾樣品粉末0.1 g，設(shè)定m(宛艾/g)∶V(甲醇/mL)(以下簡(jiǎn)稱“宛艾質(zhì)量體積比”)=1∶40，甲醇體積分?jǐn)?shù)80%，超聲時(shí)間60 min，超聲次數(shù)1次為固定條件，分別考察宛艾質(zhì)量體積比(1∶20、1∶30、1∶40、1∶50、1∶60、1∶70)、甲醇體積分?jǐn)?shù)(50%、60%、70%、80%、90%、100%)、超聲時(shí)間(15、30、45、60、75、90 min)和提取次數(shù)(1、2、3、4次)對(duì)總多酚和總黃酮得率的影響。

1.3.5 宛艾多酚類物質(zhì)提取響應(yīng)面優(yōu)化試驗(yàn) 根據(jù)單因素試驗(yàn)結(jié)果，通過(guò)Box-Behnken中心組合法進(jìn)行響應(yīng)面設(shè)計(jì)，優(yōu)化宛艾多酚類物質(zhì)提取工藝。以宛艾質(zhì)量體積比(A)、甲醇體積分?jǐn)?shù)(B)、超聲時(shí)間(C)為自變量，總多酚和總黃酮得率為響應(yīng)值(Y1、Y2)進(jìn)行回歸擬合分析。

1.3.6 宛艾多酚類物質(zhì)的組分分析 參照DUAN等[15]的方法并做適當(dāng)修改，將宛艾提取物和多酚標(biāo)準(zhǔn)品過(guò)0.22 μm有機(jī)濾膜，用于HPLC法分析。色譜條件：采用Acclaim 120 C18色譜柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)；流動(dòng)相為乙腈(A)-體積分?jǐn)?shù)0.1%乙酸(B)；流速0.7 mL·min-1；柱溫30 ℃；進(jìn)樣量10 μL；檢測(cè)波長(zhǎng)340 nm。梯度洗脫程序：0～5 min，體積分?jǐn)?shù)88% B；5～15 min，體積分?jǐn)?shù)88%～78% B；15～25 min，體積分?jǐn)?shù)78% B；25～35 min，體積分?jǐn)?shù)78%～75% B；35～40 min，體積分?jǐn)?shù)75%～60% B。

1.3.7 宛艾多酚提取物抗氧化能力的測(cè)定 (1) DPPH自由基清除能力測(cè)定：參考周春峰等[16]的方法測(cè)定，以抗壞血酸為對(duì)照，宛艾提取物稀釋后于517 nm波長(zhǎng)處測(cè)定樣品的吸光度Ai；以乙醇溶液為空白，測(cè)定其吸光度Aj。根據(jù)公式(3)計(jì)算樣品DPPH自由基的清除率。

(3)

(2) ABTS+·自由基清除能力測(cè)定：參考SOONG等[17]的方法測(cè)定，以抗壞血酸為對(duì)照，宛艾提取物稀釋后于734 nm波長(zhǎng)處測(cè)定樣品的吸光度Ai；以去離子水為空白，測(cè)定其吸光度Aj。根據(jù)公式(4)計(jì)算樣品ABTS+·自由基的清除率。

(4)

1.3.8 數(shù)據(jù)分析 采用Design Expert.8.0.6軟件處理設(shè)計(jì)響應(yīng)面試驗(yàn)和處理數(shù)據(jù)，采用Origin 8.0計(jì)算清除自由基的半數(shù)抑制率(IC50值)和Excel 2007軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 宛艾多酚類物質(zhì)提取單因素試驗(yàn)結(jié)果

2.1.1 宛艾質(zhì)量體積比對(duì)多酚類物質(zhì)得率的影響 宛艾質(zhì)量體積比對(duì)總多酚和總黃酮得率的影響如圖1所示。當(dāng)宛艾質(zhì)量體積比小于1∶60時(shí)，總多酚得率隨著宛艾質(zhì)量體積比增加而增加；當(dāng)質(zhì)量體積比為1∶60時(shí)，總多酚得率最大為5.28%；當(dāng)宛艾質(zhì)量體積比大于1∶60時(shí)，總多酚得率呈下降趨勢(shì)。宛艾總黃酮得率隨宛艾質(zhì)量體積比增加而增加；當(dāng)宛艾質(zhì)量體積比大于1∶50時(shí)，總黃酮得率大幅度增加，當(dāng)宛艾質(zhì)量體積比為1∶60時(shí)為10.99%；隨著宛艾質(zhì)量體積比繼續(xù)增加，總黃酮得率增加緩慢。

圖1 宛艾質(zhì)量體積比對(duì)總多酚和總黃酮得率的影響Fig.1 Effect of mass volume ratio of Wan’ai on the yield of total polyphenols and total flavonoids

2.1.2 甲醇體積分?jǐn)?shù)對(duì)宛艾多酚類物質(zhì)得率的影響 甲醇體積分?jǐn)?shù)對(duì)宛艾總多酚和總黃酮得率的影響如圖2所示。隨著甲醇體積分?jǐn)?shù)增加，總多酚和總黃酮得率呈現(xiàn)先增加后降低的趨勢(shì)。當(dāng)甲醇體積分?jǐn)?shù)為70%時(shí)，總多酚和總黃酮得率均最大，分別為4.95%、11.67%，繼續(xù)增加甲醇體積分?jǐn)?shù)，總多酚和總黃酮得率下降。

2.1.3 超聲時(shí)間對(duì)宛艾多酚類物質(zhì)得率的影響 超聲時(shí)間對(duì)宛艾總多酚和總黃酮得率的影響如圖3所示。總多酚和總黃酮得率隨超聲時(shí)間的增加均呈現(xiàn)先增加后減小再緩慢增加的趨勢(shì)，但緩慢增加幅度不大。當(dāng)超聲時(shí)間為45 min時(shí)，總多酚和總黃酮得率均最高，分別為4.80%、10.01%。

圖2 甲醇體積分?jǐn)?shù)對(duì)宛艾提取物總多酚和總黃酮得率的影響Fig.2 Effect of methanol volume fraction on the yield of total polyphenols and total flavonoids from Wan’ai

圖3 超聲時(shí)間對(duì)宛艾提取物總多酚和總黃酮得率的影響Fig.3 Effect of ultrasonic time on the yield of total polyphenols and total flavonoids from Wan’ai

2.1.4 提取次數(shù)對(duì)宛艾多酚類物質(zhì)得率的影響 提取次數(shù)對(duì)宛艾總多酚和總黃酮得率的影響如圖4所示。隨著提取次數(shù)增加，總多酚和總黃酮得率增加，提取3次時(shí)分別為5.03%、10.65%，之后增加幅度較小。考慮到經(jīng)濟(jì)和時(shí)間成本，選取提取次數(shù)為3次。

2.2 宛艾多酚類物質(zhì)提取響應(yīng)面工藝優(yōu)化結(jié)果

2.2.1 宛艾多酚類物質(zhì)提取響應(yīng)面優(yōu)化設(shè)計(jì)與試驗(yàn)結(jié)果 為確定宛艾多酚類物質(zhì)的最佳提取工藝，以單因素試驗(yàn)結(jié)果為依據(jù)，采用Box-behnken的中心組合設(shè)計(jì)原理，以總多酚和總黃酮得率為考察指標(biāo)，對(duì)宛艾質(zhì)量體積比(A)、甲醇體積分?jǐn)?shù)(B)、超聲時(shí)間(C)3個(gè)水平進(jìn)行編碼，響應(yīng)面分析試驗(yàn)的因素和水平見(jiàn)表1，設(shè)計(jì)方案及結(jié)果見(jiàn)表2。

2.2.2 回歸方程的建立與顯著性檢驗(yàn) 對(duì)表2中的試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行多元回歸擬合，得到宛艾總多酚對(duì)試驗(yàn)因素的二次多項(xiàng)方程為Y1=6.23+0.20A+0.11B+0.24C-0.068AB-0.068AC-0.034BC-0.091A2-0.11B2-0.71C2，宛艾總黃酮對(duì)試驗(yàn)因素的二次多項(xiàng)方程為Y2=13.20+0.15A+0.048B+0.24C-0.060AB-0.37AC-0.054BC-0.22A2-0.27B2-1.01C2，決定系數(shù)分別為0.990 2、0.974 8，校正系數(shù)分別為0.977 6、0.942 4，表明該模型能解釋總多酚響應(yīng)值變化的97.76%，解釋總黃酮響應(yīng)值變化的94.24%，變異系數(shù)分別為1.16%、1.23%，該回歸模型重現(xiàn)性較好，擬合程度較好。

圖4 提取次數(shù)對(duì)宛艾提取物總多酚和總黃酮得率的影響Fig.4 Effect of extraction times on the yield of total polyphenols and total flavonoids from Wan’ai

表1 響應(yīng)面試驗(yàn)因素水平及編碼Table 1 Factors and levels in response surface

表2 響應(yīng)面試驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果Table 2 Response surface design arrangement and experimental results

試驗(yàn)方差分析結(jié)果見(jiàn)表3和表4。模型P值均小于0.000 1，表明回歸模型達(dá)到顯著水平，失擬項(xiàng)均不顯著(P>0.05)，表明擬合程度較好，模型建立有效[18]。影響宛艾提取物總多酚得率的因素主次順序?yàn)槌晻r(shí)間>宛艾質(zhì)量體積比>甲醇體積分?jǐn)?shù)。一次項(xiàng)檢驗(yàn)中自變量A、B、C對(duì)該模型影響極顯著；二次項(xiàng)檢驗(yàn)中A2、B2、C2影響顯著；交互項(xiàng)均不顯著，表明各因素對(duì)總多酚得率有影響，而因素間的交互作用影響不顯著。影響宛艾提取物總黃酮得率的主次順序?yàn)槌晻r(shí)間>宛艾質(zhì)量體積比>甲醇體積分?jǐn)?shù)。一次項(xiàng)檢驗(yàn)中自變量A、C對(duì)該模型影響顯著，自變量B無(wú)顯著影響；二次項(xiàng)檢驗(yàn)中A2、B2、C2均影響顯著；交互項(xiàng)AC影響顯著，而其他交互項(xiàng)未達(dá)到顯著效果，表明各因素對(duì)總黃酮得率的影響不是簡(jiǎn)單的線性關(guān)系，而是非線性關(guān)系。

表3 總多酚回歸模型方差分析結(jié)果Table 3 Analysis of variance of total polyphenols for the fitted regression model

表4 總黃酮回歸模型方差分析結(jié)果Table 4 Analysis of variance of total flavonoids for the fitted regression model

2.2.3 宛艾多酚類物質(zhì)提取響應(yīng)面分析與驗(yàn)證試驗(yàn) 宛艾多酚類物質(zhì)提取工藝中宛艾質(zhì)量體積比、甲醇體積分?jǐn)?shù)、超聲時(shí)間3個(gè)因素之間交互作用對(duì)總多酚和總黃酮得率的影響如圖5所示。響應(yīng)曲面坡度越陡峭，總多酚和總黃酮得率對(duì)于操作條件的改變?cè)矫舾?，反之曲面坡度越平緩，操作條件的改變對(duì)總多酚和總黃酮得率的影響也就越小。超聲時(shí)間的曲線比較陡峭，表明超聲時(shí)間對(duì)總多酚和總黃酮得率的影響最為顯著，其次為宛艾質(zhì)量體積比和甲醇體積分?jǐn)?shù)，表現(xiàn)為曲線較平緩。

經(jīng)Design Expert 8.0.6統(tǒng)計(jì)軟件優(yōu)化，總多酚最佳提取條件為宛艾質(zhì)量體積比m(宛艾/g)∶V(甲醇/mL)=1∶68.44、甲醇體積分?jǐn)?shù)72.86%、超聲時(shí)間46.36 min，理論得率為6.35%；總黃酮最佳提取條件為宛艾質(zhì)量體積比m(宛艾/g)∶V(甲醇/mL)=1∶62.76、甲醇體積分?jǐn)?shù)70.51%、超聲時(shí)間46.01 min，理論得率為13.23%。為方便實(shí)際操作，綜合考慮影響總多酚和總黃酮得率各因素以及經(jīng)濟(jì)成本，將提取工藝調(diào)整為宛艾質(zhì)量體積比m(宛艾/g)∶V(甲醇/mL)=1∶63、甲醇體積分?jǐn)?shù)71%、超聲時(shí)間46 min，重復(fù)3次試驗(yàn)進(jìn)行驗(yàn)證，最終得到總多酚和總黃酮得率分別為6.27%、13.21%，與模型理論值相近，表明該模型能較好用于優(yōu)化宛艾多酚類物質(zhì)提取工藝。

圖5 宛艾多酚類物質(zhì)提取各因素交互作用影響的響應(yīng)面圖

2.3 宛艾多酚類物質(zhì)組分分析

為進(jìn)一步明確宛艾多酚類物質(zhì)的組成，采用HPLC法對(duì)宛艾樣品進(jìn)行定性定量分析，混合標(biāo)準(zhǔn)品和宛艾樣品色譜圖如圖6所示，各種標(biāo)準(zhǔn)品的保留時(shí)間具有明顯差異。宛艾樣品中含有新綠原酸、綠原酸、隱綠原酸、異綠原酸A、異綠原酸C 共5種成分。以標(biāo)準(zhǔn)品峰面積對(duì)含量進(jìn)行線性回歸，回歸方程見(jiàn)表5。宛艾多酚類物質(zhì)含量排序?yàn)楫惥G原酸A>異綠原酸C>綠原酸>隱綠原酸>新綠原酸，以異綠原酸A為主要酚酸，含量為53.45 mg·g-1。

注：1,新綠原酸；2,綠原酸;3,隱綠原酸;4,異綠原酸A;5,異綠原酸C。

表5 宛艾樣品中多酚類物質(zhì)組分含量Table 5 The contents of polyphenols from Wan’ai

2.4 宛艾多酚提取物抗氧化能力分析

2.4.1 DPPH陽(yáng)離子自由基清除能力 宛艾多酚提取物和抗壞血酸對(duì)清除DPPH自由基能力如圖7所示。在0～40 mg·L-1，宛艾多酚提取物DPPH自由基清除能力隨多酚質(zhì)量濃度增加而增加，最高為86.48%，超過(guò)40 mg·L-1時(shí)，增加速度趨于緩慢。由表6可知，宛艾多酚提取物DPPH自由基清除率的IC50值為18.38 mg·L-1，略低于抗壞血酸18.50 mg·L-1，說(shuō)明宛艾多酚提取物清除DPPH自由基能力略強(qiáng)于抗壞血酸。

圖7 宛艾提取物DPPH自由基清除能力

表6 宛艾提取物清除DPPH自由基的IC50值Table 6 IC50 values for DPPH radical scavenging capacity of extract from Wan’ai mg·L-1

2.4.2 ABTS+·自由基清除能力 宛艾多酚提取物和抗壞血酸對(duì)清除ABTS+·自由基能力如圖8所示。在試驗(yàn)質(zhì)量濃度范圍內(nèi)，隨著多酚質(zhì)量濃度增加，宛艾多酚提取物ABTS+·自由基清除能力增加，且清除能力強(qiáng)于抗壞血酸。由表7可知，宛艾多酚提取物ABTS+·自由基清除率的IC50值為0.37 mg·L-1，低于抗壞血酸IC50值0.78 mg·L-1，說(shuō)明宛艾多酚提取物具有較好的ABTS+·自由基清除活性。

圖8 宛艾提取物ABTS+·自由基清除能力

表7 宛艾提取物清除ABTS+·自由基的IC50值Table 7 IC50 values for ABTS+· radical scavenging capacity of extract from Wan’ai mg·L-1

3 結(jié)論與討論

宛艾是中國(guó)傳統(tǒng)中草藥，在養(yǎng)生保健、醫(yī)療救治以及美容等領(lǐng)域逐漸受到大眾青睞，本研究對(duì)推進(jìn)南陽(yáng)市宛艾產(chǎn)業(yè)健康發(fā)展有重大意義。本試驗(yàn)采用超聲輔助法提取宛艾多酚類物質(zhì)，以總多酚和總黃酮得率為考察指標(biāo)，采用響應(yīng)面法優(yōu)化提取工藝，通過(guò)HPLC法對(duì)宛艾多酚類物質(zhì)進(jìn)行定性定量分析，并測(cè)定其對(duì)DPPH和ABTS+·自由基的清除能力。在單因素試驗(yàn)中，當(dāng)宛艾質(zhì)量體積比大于1∶60時(shí)總黃酮得率增加緩慢，推測(cè)是因?yàn)殡S著宛艾質(zhì)量體積比繼續(xù)增加，宛艾提取物中黃酮成分逐漸達(dá)到溶解飽和狀態(tài)[19]；同時(shí)，總多酚得率呈現(xiàn)降低趨勢(shì)，推測(cè)是因?yàn)槠渌苄猿煞纸鲈龆?，阻礙了多酚溶出[20]。當(dāng)甲醇體積分?jǐn)?shù)高于70%時(shí)，總多酚和總黃酮得率下降，推測(cè)是甲醇體積分?jǐn)?shù)較高導(dǎo)致脂溶性雜質(zhì)溶出增多，形成競(jìng)爭(zhēng)性抑制[21]。當(dāng)超聲時(shí)間超過(guò)45 min，總多酚和總黃酮得率呈下降趨勢(shì)，推測(cè)是長(zhǎng)時(shí)間超聲波處理引起多酚類物質(zhì)被降解或破壞[22]。經(jīng)優(yōu)化后的最佳提取工藝條件為宛艾質(zhì)量體積比m(宛艾/g)∶V(甲醇/mL)=1∶63，甲醇體積分?jǐn)?shù)71%，超聲時(shí)間46 min，該條件下總多酚得率為6.27%，總黃酮得率為13.21%。黃艷玲等[23]采用響應(yīng)面法優(yōu)化微波輔助提取艾葉中的總黃酮提取率為8.805%，低于本研究結(jié)果。胡吉清等[24]采用水浴回流法提取不同采收期蘄艾的總黃酮得率為1.5%～6.95%，低于宛艾總黃酮得率，推測(cè)這與艾葉品種、提取方法以及測(cè)定方法不同有關(guān)。

HPLC法檢出宛艾多酚類物質(zhì)包括新綠原酸、綠原酸、隱綠原酸、異綠原酸A和異綠原酸C，其中異綠原酸A為主要物質(zhì)，含量為53.45 mg·g-1。宛艾與蘄艾和祁艾中檢測(cè)出多酚類物質(zhì)相同，但含量差異較大。蘄艾中綠原酸含量較高，其次是異綠原酸C和異綠原酸A[15]；祁艾中綠原酸和異綠原酸C較高，其次為異綠原酸A，而新綠原酸和隱綠原酸含量較低[25]。本研究結(jié)果表明，宛艾中含有較高的綠原酸類酚類物質(zhì)，推測(cè)是合成異綠原酸A的重要原料。綠原酸類多酚物質(zhì)是由咖啡酸與奎尼酸生成的縮酚酸，具有抗氧化、抗菌、免疫調(diào)節(jié)、抗動(dòng)脈粥樣硬化、抗炎、降糖和抑制亞硝化反應(yīng)等多種生物活性[26-27]，在醫(yī)藥、食品和化妝品等領(lǐng)域有較大應(yīng)用前景。體外抗氧化活性結(jié)果表明，宛艾多酚類物質(zhì)清除DPPH和ABTS+·自由基的IC50值分別為18.43、0.37 mg·L-1，較抗壞血酸抗氧化活性好，表明宛艾具有較好的抗氧化活性，有望成為新的天然抗氧化劑來(lái)源。本研究通過(guò)優(yōu)化宛艾多酚類物質(zhì)提取工藝，最大限度挖掘其應(yīng)用價(jià)值，為提升宛艾經(jīng)濟(jì)效益和促進(jìn)產(chǎn)業(yè)發(fā)展提供了新思路。