亚洲免费av电影一区二区三区,日韩爱爱视频,51精品视频一区二区三区,91视频爱爱,日韩欧美在线播放视频,中文字幕少妇AV,亚洲电影中文字幕,久久久久亚洲av成人网址,久久综合视频网站,国产在线不卡免费播放

        ?

        輕微肝性腦病患者經(jīng)頸靜脈肝內(nèi)門體分流術后不同預后組腸道菌群的變化

        2021-03-03 02:32:32李萌浩湯世豪王鉦鈺郭文剛殷占新韓國宏
        臨床肝膽病雜志 2021年2期
        關鍵詞:球菌腦病菌群

        李萌浩, 李 凱, 湯世豪, 王鉦鈺, 郭文剛, 殷占新, 韓國宏

        空軍軍醫(yī)大學西京消化病醫(yī)院 消化介入科, 西安 710032

        肝性腦病(HE)是繼發(fā)于肝臟嚴重疾病所出現(xiàn)的以代謝紊亂為基礎、輕重程度不同的神經(jīng)精神異常綜合征[1-2]。輕微肝性腦病(MHE)是HE癥狀最輕微的階段,可降低患者生活質(zhì)量,增加顯性腦病(OHE)發(fā)生率和死亡風險。慢性肝硬化患者中MHE的患病率高達80%[3],住院肝硬化患者隱匿性HE的發(fā)病率為39.9%[4]。研究表明,肝硬化患者腸道菌群發(fā)生明顯改變[5-7],腸道菌群失調(diào)隨肝硬化嚴重程度加重而加重[8]。OHE患者和MHE患者的腸道菌群具有特征性變化,如有益菌/原生菌群減少,而有害菌/潛在致病菌增多等[9]。

        經(jīng)頸靜脈肝內(nèi)門體分流術(TIPS)是降低門靜脈壓力最有效的方式之一,可顯著控制再出血率,減輕腹水程度,但是HE作為TIPS術后最主要的并發(fā)癥,嚴重影響術后患者的生活和生存質(zhì)量[1]。由于缺乏重視,TIPS術前很少對患者進行MHE檢測,那么MHE患者TIPS術后預后如何,是否與腸道菌群的改變有關成為一個值得探討的問題。因此,本文通過高通量測序方法,分析TIPS術后不同預后的患者其腸道菌群與術前的差異,探索從菌群角度預防和治療MHE患者TIPS術后腦病的新策略。

        1 資料與方法

        1.1 研究對象 選取2016年7月—2017年7月在本院接受TIPS治療的MHE患者。MHE的診斷根據(jù)中華醫(yī)學會肝病學分會制定的《肝硬化肝性腦病診療指南》[10],術前1~3 d及術后1個月對患者進行傳統(tǒng)紙-筆神經(jīng)心理學測試:HE心理學評分,包括數(shù)字連接試驗(NCT) A、B,數(shù)字符號試驗(DST),軌跡描繪試驗,系列打點試驗5個子測試試驗。若NCT-A、DST均陽性,或5個子試驗中任何2項異常,即診斷為MHE。OHE診斷根據(jù)West-Haven標準及分級[11]。

        1.2 納入標準 (1)經(jīng)臨床/實驗室檢查,影像學檢查或肝活檢確診為肝硬化;(2)計劃接受TIPS治療以預防門靜脈高壓性靜脈曲張再出血;(3)術前檢測為MHE患者。

        1.3 排除標準 (1)肝臟及胃腸道惡性腫瘤;(2)術前腹瀉、血便、便秘;(3)術前HE病史;(4)未控制的嚴重活動性感染(>2級)或敗血癥;(5)嚴重的心、腎、肺功能不全;(6)曾接受TIPS或手術分流史;(7)布加綜合征;(8)入組前3個月胃腸道手術史;(9)近期計劃肝移植手術;(10)懷孕或哺乳期受試者。

        1.4 研究方法 分別于術前1~3 d和術后1個月收集糞便樣本及采樣時臨床資料信息。采樣前1 d囑患者清淡飲食,使用無菌采樣管收集新鮮糞便,液氮速凍后在超凈工作臺上預處理,取采樣管中心部位樣本3~5 g于樣本管中,存于實驗室-80 ℃冰箱。并于采樣當天記錄患者的臨床資料信息。根據(jù)患者術后1個月內(nèi)發(fā)生HE的類型進行分組。

        1.5 糞便微生物DNA提取、鑒定以及16S rRNA高通量測序 糞便微生物DNA提取、鑒定以及16S rRNA 測序由上海態(tài)昌基因科技有限公司完成。糞便樣本DNA提取采用E.Z.N.A.?Stool DNA Kit (Omega Bio-tek,Inc.,美國),采用熱循環(huán)PCR系統(tǒng)擴增細菌16S rRNA基因的V3-V4超變區(qū),引物序列為338F (5′-ACTCCTACGGGAGGCAGCA-3′)和 806R(5′-GGACTACHVGGGTWTCTAAT-3′),PCR反應采用EasyCycler 96 PCR 擴增儀 (Analytik Jena Corp.,德國) 完成。PCR擴增產(chǎn)物經(jīng)過純化后,安裝如上擴增方法完成8個循環(huán)的index擴增反應,每個樣本的index標簽不重復。將產(chǎn)物進行純化后,按照等摩爾比進行混合,并采用Illumina Miseq平臺 (Illumina Inc.,美國) 根據(jù)官方說明書操作完成測序(每個糞便樣本至少完成2萬條測序數(shù)據(jù))。

        1.6 倫理學審查 本研究方案經(jīng)由西京醫(yī)院藥物臨床試驗倫理委員會審批,批號:KY20172061-1,患者均簽署知情同意書。

        1.7 統(tǒng)計學方法 分析SPSS 19.0和R v3.6.1 統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)分析。計量資料采用M(P25~P75)表示,3組間比較采用Kruskal-WallisH檢驗,采用Bonferroni法進行多個樣本的多重比較;同組患者術前術后的比較采用Wilcoxo符號秩檢驗。計數(shù)資料組間比較采用χ2檢驗。微生物組Beta分析基于Bray Curtis距離矩陣進行主坐標分析(PCoA),使用Adonis法(PerMANOVA)對比組間差異。P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

        2 結果

        2.1 一般資料 共納入接受TIPS治療的MHE患者28例,術前患者中位年齡51歲,男13例,女15例,中位MELD評分13分,Child-Pugh分級A/B/C級分別9/15/4例。根據(jù)患者術后1個月內(nèi)發(fā)生HE的類型分為3組:無HE組(n=8,28.6%)、MHE組(n=12,42.8%)和OHE組(n=8,28.6%)。3組患者術前臨床資料均未見明顯差異(P值均>0.05)(表1)。

        表1 不同預后組術前基線特征比較

        2.2 物種組成分析 總體患者的腸道菌群主要由5個優(yōu)勢菌門(平均相對豐度占比>1%)組成:厚壁菌門(45.0%)、擬桿菌門(30.6%)、變形菌門(17.2%)、放線菌門(4.78%)和疣微菌門(1.9%)。菌門水平3組間比較無明顯差異,且術后未見明顯改變(P值均>0.05)。

        2.3 Alpha多樣性指數(shù)分析 Alpha多樣性包括Chao1指數(shù)、Ace指數(shù)、Shannon指數(shù)和Simpson指數(shù),對比發(fā)現(xiàn),術前3組患者的alpha多樣性無明顯差異(P值均>0.05)(表2),術后各組alpha多樣性無明顯改變且3組間無明顯差異(P值均>0.05)。

        表2 不同預后組術前alpha多樣性比較

        2.4 Beta多樣性指數(shù)分析 基于Bray Curtis距離矩陣的PCoA分析顯示,3組間beta多樣性在術前和術后沒有明顯差異。縱向?qū)Ρ戎?,僅MHE組術前和術后的beta多樣性明顯改變(PerMANOVA法,F(xiàn)=2.71,P=0.049)(圖1)。

        注:基于Bray Curtis距離矩陣的主坐標分析,MHE組術前術后beta多樣性有統(tǒng)計學差異(F=2.71,P=0.049)。

        2.5 物種差異分析 無HE組患者TIPS術后相比術前,原生菌群小桿菌屬(Z=2.521,P=0.012)、 糞球菌屬(Z=2.1,P=0.036)、解黃酮菌屬(Z=2.1,P=0.036)、瘤胃菌科某屬(Z=2.1,P=0.036)和狹義梭菌屬(Z=1.96,P=0.049)相對豐度顯著升高。原生菌假丁酸弧菌屬(Z=1.859,P=0.063)、有害菌如丹毒絲菌科未知屬(Z=1.82,P=0.069)和顆粒鏈菌屬(Z=1.82,P=0.069)相對平度差異均無統(tǒng)計學意義。

        MHE組患者術后部分有害菌顆粒鏈菌屬(Z=2.521,P=0.012)、腸球菌屬(Z=2.51,P=0.012)、鏈球菌屬(Z=2.432,P=0.015)和羅氏菌屬(Z=2.001,P=0.045)豐度明顯減低,而部分有害菌韋榮球菌屬(Z=2.353,P=0.019)和巨球菌屬(Z=1.955,P=0.05)則明顯升高。

        對于OHE組患者,僅有韋榮球菌屬(Z=2.38,P=0.017)豐度顯著升高,其他菌群豐度未見明顯變化(圖2)。

        圖2 不同預后組TIPS術前術后腸道菌群變化情況

        采用增長倍數(shù)(術后菌群相對豐度/術前菌群相對豐度,豐度為0則按10-6計算)來描述菌群術后的變化量,對比發(fā)現(xiàn),糞球菌屬的變化量在3組間具有明顯差異[無HE組 vs MHE組 vs OHE組:2.00(1.11~91.61) vs 1.21(0.26~6.79) vs 0.09(0.01~0.92),χ2=6.249,P=0.043](圖3)。

        注:3組間菌群變化量有明顯差異(χ2=6.249,P=0.043),球菌屬變化量在無HE組和MHE組中均明顯高于OHE組(P值分別為0.021、0.050),而無HE組與MHE組差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。

        3 討論

        本研究通過16S rRNA測序的方法,開展了一項縱向觀察性研究。描述MHE患者經(jīng)TIPS術后不同腦病狀態(tài)的患者腸道菌群的變化,探索術后菌群的改變與術后腦病程度關系。

        TIPS術后,3組患者腸道菌群的alpha多樣性無明顯差異,總體菌群組成相似,可能與肝硬化失代償期患者較差的菌群狀態(tài)有關。術后無HE組患者,菌群失調(diào)好轉,小桿菌屬、糞球菌屬、解黃酮菌屬、瘤胃菌科某屬、狹義梭菌屬和假丁酸弧菌屬增多,這些菌屬多屬于毛螺菌科和瘤胃菌科,是健康人體內(nèi)的原生菌群,它們參與人腸道內(nèi)碳水化合物發(fā)酵產(chǎn)生短鏈脂肪酸,減輕結腸炎癥[12-15],且與致病菌競爭營養(yǎng),產(chǎn)生抗菌肽,可能改善腸道屏障[16-18]。這在克羅恩病和肝硬化的研究中均有所體現(xiàn)[17-18]。而有害菌如丹毒絲菌科未知屬和顆粒鏈菌屬減少。

        對于MHE組患者,顆粒鏈菌屬、腸球菌屬、鏈球菌屬和羅氏菌屬豐度減低,而韋榮球菌屬和巨球菌屬(均屬韋榮球菌科下級菌屬)則升高。而OHE組患者僅有韋榮球菌屬增多。顆粒鏈菌屬和羅氏菌屬是口腔和腸道菌群中的機會致病菌,腸球菌屬在肝硬化患者和HE患者中富集,與MELD評分有顯著的正相關性[8-9]。鏈球菌屬和韋榮球菌屬與腸道菌群失調(diào)以及較差的認知水平相關[19-20]。Bajaj[9]報道了與健康人相比肝硬化HE患者韋榮球菌科相對豐度明顯更高。另外,既往文獻[21-23]發(fā)現(xiàn)韋榮球菌屬某些菌種參與了數(shù)種嚴重的炎癥反應。

        因此本研究推測,雖然TIPS術建立了新的門體分流道,使部分腸源性毒素可以直接從門靜脈進入體循環(huán),但是術后門靜脈高壓得到緩解,腸道微循環(huán)和腸道環(huán)境發(fā)生改變,從而對腸道菌群產(chǎn)生了一定的影響。(1)原生菌群豐度升高而有害菌豐度降低,腸道微生態(tài)恢復,產(chǎn)生的腸源性毒素減少,MHE患者的腦病狀態(tài)得到改善;(2)有害菌/潛在致病菌有的增多有的減少,菌群狀態(tài)未得到明顯改善,隱性腦病狀態(tài)未緩解;(3)腦病富集菌韋榮球菌屬明顯增多,菌群失調(diào)加重,患者發(fā)生OHE。同時本研究發(fā)現(xiàn)糞球菌屬的變化量與術后腦病的嚴重程度呈負相關。說明了原生菌群的增多對TIPS術后患者預后有更為重要的影響。

        本研究存在一定的局限性。首先樣本量較小,需要大樣本多中心研究對結果進行驗證;第二,使用16S rRNA測序而不是宏基因組使研究不能深入到菌種水平進行分析;第三,研究未考慮環(huán)境因素、飲食以及藥物使用如抗生素和質(zhì)子泵抑制劑等的影響;同時,TIPS術對腸道微環(huán)境具體產(chǎn)生了什么樣的作用,為什么會出現(xiàn)不同的腸道菌群改變,以及對于發(fā)生HE的患者,是菌群惡化造成腦病發(fā)生還是腦病發(fā)生導致菌群惡化仍需要進一步研究。

        總的來說,本研究報道了經(jīng)TIPS術后不同腦病狀態(tài)的MHE患者腸道菌群的變化情況,發(fā)現(xiàn)腸道菌群失調(diào)狀態(tài)的改善情況與術后腦病狀態(tài)呈負相關。其中原生菌群的升高相對有更重要的作用。這為預防和治療MHE患者術后腦病提供了微生物角度策略。

        利益沖突聲明:本研究不存在研究者、倫理委員會成員、受試者監(jiān)護人以及與公開研究成果有關的利益沖突,特此聲明。

        作者貢獻聲明:韓國宏教授負責課題設計;李萌浩、湯世豪、李凱、王鉦鈺、郭文剛和殷占新參與收集數(shù)據(jù);李萌浩進行資料分析和撰寫論文;李凱副主任醫(yī)師和韓國宏教授指導撰寫文章,修改論文并最后定稿。

        猜你喜歡
        球菌腦病菌群
        一株禽源糞腸球菌的分離與鑒定
        “云雀”還是“貓頭鷹”可能取決于腸道菌群
        中老年保健(2022年2期)2022-08-24 03:20:50
        “水土不服”和腸道菌群
        科學(2020年4期)2020-11-26 08:27:06
        結節(jié)病合并隱球菌病的研究進展
        擴散張量成像MRI 在CO中毒后遲發(fā)腦病中的應用
        IL-33在隱球菌腦膜炎患者外周血單個核中的表達及臨床意義
        一株副球菌對鄰苯二甲酸酯的降解特性研究
        邯鄲市中醫(yī)院腦病科
        肉牛剩余采食量與瘤胃微生物菌群關系
        咽部菌群在呼吸道感染治療中的臨床應用
        人妻丰满熟妇av一区二区 | 亚洲国产一区二区三区网| 精品久久久亚洲中文字幕| 91久久香蕉国产熟女线看| 婷婷成人丁香五月综合激情| 少女高清影视在线观看动漫| 亚洲另类激情综合偷自拍图| 日韩精品一区二区三区视频 | 一本色道久久爱88av| 人妻熟妇乱又伦精品视频app | 国产精品久久久久久久久免费 | 亚洲一区二区三区在线中文| 日本女优激情四射中文字幕| 日本最新免费二区| 久久香蕉国产线看观看网| 午夜视频免费观看一区二区| 午夜大片在线播放观看| 亚洲av无码专区亚洲av伊甸园 | 国内揄拍国内精品少妇| 男女边吃奶边做边爱视频 | 国产免费资源高清小视频在线观看| 日本变态网址中国字幕| 免费视频无打码一区二区三区| 精品亚洲成a人片在线观看| 亚洲成人福利在线观看| 中文字幕高清一区二区| 亚洲av成人综合网成人| 麻豆一区二区99久久久久| 成人无码区免费AⅤ片WWW| av在线一区二区三区不卡| 日本真人做爰免费视频120秒| 亚洲国产成人精品无码区在线观看| 高清av一区二区三区在线| 青青草免费手机视频在线观看| 婷婷中文字幕综合在线| 成人无码区免费AⅤ片WWW| 综合激情五月三开心五月| 天天摸夜夜摸夜夜狠狠摸| 在线综合网| 久久亚洲一区二区三区四区五| 欧美嫩交一区二区三区|