關(guān)靜淵，李 璐，于美玲，韋英益，胡庭俊

（廣西大學(xué)動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，廣西 南寧530005）

辣蓼（Polygonum hydropoperL.）又名水蓼、柳蓼、白辣蓼、紅辣、蓼牙菜等，廣泛存在于我國(guó)南北各地，多生于溪邊、山坡、濕地，是傳統(tǒng)中草藥之一?！侗静菥V目》中記載：“蓼葉，辛、溫、無(wú)毒”，具有止痢止痛、解毒化瘀等功效。研究發(fā)現(xiàn)，辣蓼主要化學(xué)成分有黃酮類、揮發(fā)油類、三萜類、蒽醌類和蓼酸等，具有抗微生物、抗氧化、抗病毒、抗腫瘤和殺蟲等生物活性，在醫(yī)藥、食品、植物源農(nóng)藥等方面有良好的開發(fā)前景[1]。大量研究表明，黃酮類化合物具有生物抗氧化性、清除自由基作用、抗炎、免疫、抗菌、降血脂、降血壓、降血糖和鎮(zhèn)痛等生理活性[2]。研究發(fā)現(xiàn)，辣蓼黃酮的主要成分槲皮素與山柰酚，在RAW264.7細(xì)胞中能有效抑制脂多糖（LPS）誘導(dǎo)的NO釋放，表明該黃酮具有體外抗炎活性[3]。文章對(duì)辣蓼黃酮的體內(nèi)抗炎活性進(jìn)行研究，探討辣蓼黃酮正丁醇部分（FNB）是否具有抗炎作用。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

辣蓼黃酮正丁醇部分（FNB）由廣西大學(xué)動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院藥理實(shí)驗(yàn)室提取。

1.2 試驗(yàn)動(dòng)物

昆明系SPF級(jí)小鼠購(gòu)自廣西醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。

1.3 試驗(yàn)儀器設(shè)備

EnSpire多功能熒光酶標(biāo)儀（PerkinElmer）、Direct-Q 5UV純水系統(tǒng)（MERCK MILLIPORE）、CD-UPT-1純水儀（成都純?cè)娇萍加邢薰荆TDN超聲波清洗機(jī)（寧波新芝生物科技有限公司）、TYPE1-14微量離心機(jī)（SIGMA）、METTLER TOLEDO AB104-L電子分析天平（EL204瑞士）、制冰機(jī)（SANYO）、Uvmini1240紫外分光光度儀（日本島津）。

1.4 試驗(yàn)試劑

地塞米松磷酸鈉注射液（16052401A，貴州天地藥業(yè)公司）、炎癥因子用ELISA試劑盒（欣博盛生物科技有限公司）、小鼠環(huán)氧合酶（COX-1和COX-2）試劑盒（江蘇晶美生物科技有限公司）。

1.5 動(dòng)物分組及處理

將50只昆明系SPF級(jí)小鼠隨機(jī)分成5組，每組10只，雌、雄各半?？瞻讓?duì)照組，每只小鼠給予0.9%生理鹽水0.5 mL灌服，連續(xù)給藥5 d；陽(yáng)性藥物對(duì)照組，每只小鼠腹腔注射地塞米松注射液25 mg/kg體重，每天1次，連續(xù)5 d；FNB劑量組，每只小鼠給予辣蓼黃酮150、100、50 mg/kg體重灌服給藥，每天1次，連續(xù)5 d。

上述各個(gè)試驗(yàn)組小鼠在給藥5 d后，于最后一次給藥后1 h，小鼠左耳兩面涂抹0.05 mL二甲苯致炎，右耳作為對(duì)照。20 min后采樣用于各項(xiàng)指標(biāo)測(cè)定。

1.6 測(cè)定指標(biāo)及方法

1.6.1 臨床表現(xiàn)

試驗(yàn)期間，每天定時(shí)觀察并記錄小鼠的采食、飲水、精神狀況、被毛狀況、健康狀況及日常活動(dòng)。觀察小鼠是否出現(xiàn)與藥物相關(guān)的不良反應(yīng)，如精神狀態(tài)、呼吸、行為及糞便等情況變化。記錄小鼠不良反應(yīng)出現(xiàn)的時(shí)間、程度、持續(xù)時(shí)間。

1.6.2 炎性因子

1、持續(xù)推動(dòng)對(duì)網(wǎng)絡(luò)安全保護(hù)措施的投資。雖然目前核設(shè)施運(yùn)營(yíng)商已在努力優(yōu)先考慮網(wǎng)絡(luò)安全工作，但當(dāng)前的網(wǎng)絡(luò)威脅仍在不斷上升。因此，需要付出專門努力，將網(wǎng)絡(luò)安全最佳實(shí)踐納入到核設(shè)施的文化建設(shè)中。

對(duì)小鼠進(jìn)行眼球采血，靜置2 h，析出血清。取上層血清，3 000 r/min離心5 min，分裝后于-80℃保存，用于小鼠IL-6、IL-8、IL-10、IL-1β、TNF-α、MCP-1、COX-1和COX-2水平測(cè)定。嚴(yán)格按照ELISA試劑盒（深圳欣博盛生物科技有限公司）的說明書進(jìn)行測(cè)定。

1.6.3 臟器指數(shù)、小鼠耳腫脹度及耳腫脹率

然后將小鼠頸椎脫臼處死，分別取出胸腺和脾臟并稱重，計(jì)算臟器指數(shù)；用直徑6 mm打孔器在左右兩耳的同一部位打下耳片，立即用電子天平稱量?jī)啥亓?，?jì)算炎性腫脹度和腫脹抑制率。計(jì)算方法如下：

耳腫脹率=（左耳重量-右耳重量）/右耳重量×100%（1）

1.7 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析

用SPSS 22.0軟件進(jìn)行單因素方差分析，Duncan法進(jìn)行多重比較，試驗(yàn)所得數(shù)據(jù)用“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示。P＜0.05表示差異顯著，P＜0.01表示差異極顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 小鼠臨床表現(xiàn)

各組小鼠飲食正常、精神狀態(tài)良好，組間差異不明顯。

2.2 FNB對(duì)小鼠臟器指數(shù)的影響（見表1）

由表1可知，F(xiàn)NB處理后，3組小鼠的臟器指數(shù)與空白對(duì)照組差異不顯著（P＞0.05）。與空白對(duì)照組相比，陽(yáng)性藥物對(duì)照組肝臟指數(shù)顯著增加（P＜0.05），脾臟指數(shù)、胸腺指數(shù)顯著降低（P＜0.05）。

表1 FNB對(duì)小鼠臟器指數(shù)的影響Tab.1 Effect of FNB on organ index in mice 單位：mg/g

2.3 FNB對(duì)小鼠耳腫脹的影響（見表2）

由表2可知，陽(yáng)性藥物對(duì)照組小鼠耳腫脹率極顯著降低（P＜0.01）；FNB各劑量組與空白對(duì)照組相比較，小鼠耳腫脹率顯著或極顯著降低（P＜0.05，P＜0.01），說明FNB具有一定的抗炎作用。

表2 FNB對(duì)小鼠耳腫脹率的影響Tab.2 Effect of FNB on ear swelling rate in mice

2.4 FNB對(duì)小鼠炎性因子的影響（見表3、表4）

由表3可知，與空白對(duì)照組相比，陽(yáng)性藥物對(duì)照組小鼠血清IL-6、IL-8、IL-1β水平差異顯著（P＜0.05），其中陽(yáng)性藥物對(duì)照組IL-10差異極顯著（P＜0.01）。FNB各劑量組與空白對(duì)照組相比較，4種細(xì)胞因子均差異不顯著。

由表4可知，與空白對(duì)照相比，陽(yáng)性藥物對(duì)照組小鼠TNF-α、MCP-1、COX-1、COX-2水平差異顯著（P＜0.05）。FNB各劑量組與空白對(duì)照組相比較，4種炎性因子均差異不顯著。

表3 FNB對(duì)小鼠血清IL-6、IL-8、IL-10、IL-1β水平的影響Tab.3 EffectsofFNB on serum IL-6,IL-8,IL-10,IL-1 levelsin mice 單位：ng/L

表4 FNB對(duì)小鼠TNF-α、MCP-1、COX-1、COX-2水平的影響Tab.4 Effects of FNB on levels of TNF-α,McP-1,COX-1 and COX-2 in mice 單位：μg/L

3 討論

黃酮是植物的一種次級(jí)代謝產(chǎn)物，普遍存在于多種植物中，因藥理活性多樣和來(lái)源豐富等特點(diǎn)，一直是研究的熱點(diǎn)。近年來(lái)，國(guó)內(nèi)外大量的研究表明，黃酮具有顯著的抗炎作用。金巖等[4]研究松生等總黃酮提取工藝及鎮(zhèn)痛抗炎作用，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，松生等乙醇提取物、正丁醇提取物和乙酸乙酯提取物均具有明顯鎮(zhèn)痛抗炎作用。劉麗華等[5]對(duì)兔兒傘總黃酮抗炎作用研究中，兔兒傘總黃酮各劑量組能顯著降低小鼠毛細(xì)血管通透性；兔兒傘總黃酮高劑量組對(duì)二甲苯致小鼠耳腫脹有抑制作用，兔兒傘總黃酮具有較強(qiáng)的抗炎作用，其抗炎作用可能與其降低血管通透性有關(guān)。穿心蓮中提取的黃酮對(duì)炎性因子具有較強(qiáng)的清除能力，雞蛋清對(duì)急性炎癥有一定的作用[6]。

黃酮類化合物的抗炎作用與細(xì)胞因子及其受體有關(guān)。黃酮類化合物可通過抑制炎性細(xì)胞因子的產(chǎn)生或通過其他途徑發(fā)揮抗炎功效，也會(huì)影響細(xì)胞因子及其受體從而發(fā)揮抗炎作用。參與炎癥反應(yīng)的細(xì)胞因子種類很多，其中比較重要的是白細(xì)胞介素1β（IL-1β）、白細(xì)胞介素6（IL-6）、白細(xì)胞介素8（IL-8）、白細(xì)胞介素10（IL-10）、腫瘤壞死因子（TNF-α）等。IL-1β、TNF-α能激活NF-κB在炎癥反應(yīng)中使巨噬細(xì)胞和其他細(xì)胞分泌促炎因子IL-6、IL-8等。趙丹等[7]研究藍(lán)莓葉總黃酮的體外抗炎功效，結(jié)果表明，藍(lán)莓葉總黃酮通過影響炎癥相關(guān)因子表達(dá)量的產(chǎn)生，從而減弱促炎癥反應(yīng)，增強(qiáng)抗炎癥反應(yīng)，最終發(fā)揮抗炎功效。

黃酮類化合物也可以調(diào)節(jié)花生四烯酸代謝中參與炎癥反應(yīng)并起關(guān)鍵作用的酶活力，如磷脂酶、環(huán)氧合酶等，從而抑制花生四烯酸、前列腺素類的生成，進(jìn)而抑制炎癥產(chǎn)生。環(huán)氧合酶（COX）是催化合成各種前列腺素的限速酶，參與動(dòng)物機(jī)體各種生理、病理反應(yīng)，其具有2種結(jié)構(gòu)亞型，即結(jié)構(gòu)型COX-1和誘導(dǎo)型COX-2。COX-1的作用是參與炎癥，并可加重炎癥；而COX-2可能是在炎癥早期中啟動(dòng)炎癥反應(yīng)，而后期有助于炎癥恢復(fù)[8]。由于COX-2是炎癥關(guān)鍵介質(zhì)，所以很多新型非甾體抗炎藥物把其當(dāng)作主要作用靶點(diǎn)。Shil等[9]在發(fā)酵1、3、6、8、12個(gè)月的大豆中，發(fā)現(xiàn)發(fā)酵12個(gè)月的大豆的總黃酮的含量最高，并且能顯著性抑制iNOS和COX-2 mRNA的表達(dá)，體現(xiàn)最強(qiáng)的抗炎作用。穗花杉黃酮能減輕巴豆油導(dǎo)致的小鼠耳廓腫脹，并且抑制對(duì)豚鼠的環(huán)氧合酶和Ⅱ型磷脂酶A2活力[10]。

近年來(lái)，有學(xué)者對(duì)辣蓼黃酮的抗炎活性進(jìn)行探究。趙桂法等[11]把辣蓼與棗樹皮聯(lián)合一起治療急性腸炎，治療效果較好。將辣蓼滴眼液用于治療細(xì)菌性角膜炎、病毒性角膜炎、急慢性結(jié)膜炎和眼癢病，均獲得較好的效果[12-14]。為完備辣蓼黃酮的抗炎作用，本試驗(yàn)建立二甲苯致小鼠耳急性腫脹炎癥模型，然后觀察蓼黃酮FNB在小鼠體內(nèi)的抗炎作用。用藥后，耳部皮膚毛細(xì)血管充血清晰。試驗(yàn)中陽(yáng)性對(duì)照組胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)低于空白對(duì)照組，可見在地塞米松的作用下，小鼠的胸腺、脾臟有很大程度的萎縮。本試驗(yàn)中，陽(yáng)性藥物對(duì)照組的炎癥因子IL-6、IL-8、IL-1β、TNF-α、MCP-1、COX-1、COX-2與空白對(duì)照與相比差異顯著，IL-10差異極顯著，說明炎癥模型建立成功。FNB對(duì)小鼠的耳腫脹有抑制作用，表明FNB有一定的抗炎作用。

4 結(jié)論

小鼠體內(nèi)抗炎試驗(yàn)結(jié)果表明，不同劑量的辣蓼黃酮正丁醇部分（FNB）對(duì)小鼠具有一定的抗炎作用。