丁建東 朱 榮 盧日剛 常 艷 陳 華 項(xiàng)新華*

1. 廣西壯族自治區(qū)食品藥品檢驗(yàn)所，廣西 南寧 530021； 2. 中國食品藥品檢定研究院，北京 100050

能力驗(yàn)證是評價(jià)實(shí)驗(yàn)室技術(shù)能力的有效手段,是實(shí)驗(yàn)室通過外部措施對其內(nèi)部質(zhì)量控制方法的一種重要補(bǔ)充手段,是確保實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理體系持續(xù)改進(jìn)的有效措施之一[1]。實(shí)驗(yàn)室應(yīng)該積極參與并認(rèn)真對待每次能力驗(yàn)證，做到為我所用，不斷提升自身管理能力和技術(shù)水平[2]。

注射用青蒿琥酯是我國擁有完全自主知識產(chǎn)權(quán)的創(chuàng)新藥，也是首個獲世界衛(wèi)生組織推薦的重癥瘧疾一線治療藥物，目前研究發(fā)現(xiàn)青蒿琥酯在其他疾病的治療上也有一定功效[3-5]。高效液相色譜法是藥品檢驗(yàn)常用的檢測方法[6]，在藥品檢測領(lǐng)域有著廣泛的應(yīng)用，已為各國藥典廣泛收載。本次含量測定能力驗(yàn)證的主要目的是，考察藥品生產(chǎn)企業(yè)QC實(shí)驗(yàn)室和藥品檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室的檢驗(yàn)技術(shù)水平及檢測數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性，確定實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行化學(xué)藥品高效液相色譜法進(jìn)行成分含量測定的能力,識別實(shí)驗(yàn)室中的問題以及實(shí)驗(yàn)室間的差異，增加實(shí)驗(yàn)室客戶對實(shí)驗(yàn)室能力的信任。文章將就能力驗(yàn)證的實(shí)施過程和統(tǒng)計(jì)技術(shù)進(jìn)行討論。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 高效液相色譜儀，十萬分之一電子天平。

1.2 試藥 雙氫青蒿素對照品(批號100184-201202)、青蒿素對照品(批號100202-200402)、青蒿琥酯對照品(批號100200-201003)均購自中國食品藥品檢定研究院；甲醇、乙腈為色譜純，水為超純水，其他試劑均為分析純。

2 方法

2.1 樣品制備 樣品來源于桂林南藥股份有限公司生產(chǎn)的原料藥，為白色粉末，裝于西林瓶，軋蓋包裝，每瓶裝量約120 mg，隨機(jī)數(shù)字編號，編號為QA0099-**** 。

2.2 樣品均勻性、穩(wěn)定性檢驗(yàn)和運(yùn)輸實(shí)驗(yàn)

2.2.1 樣品均勻性、常溫穩(wěn)定性、加速穩(wěn)定性檢驗(yàn) 隨機(jī)抽取，隨機(jī)抽取20瓶，在重復(fù)條件下測定2次。檢驗(yàn)方法按《中國藥典》2015年版二部“注射用青蒿琥酯”項(xiàng)下含量測定方法測定[7]?？疾鞓悠窋M定包裝，在常溫放置0個月、1個月、2個月和在加速(溫度40 ℃±2 ℃、相對濕度75%±5%)下放置的第5、10、15天分別隨機(jī)抽取樣品3份，進(jìn)行重復(fù)測定2次，所得結(jié)果為穩(wěn)定性的數(shù)據(jù)。

2.2.2 運(yùn)輸過程穩(wěn)定性試驗(yàn) 根據(jù)地域分布，考慮距離和環(huán)境因素，選擇距離較遠(yuǎn)、氣溫較高的3家實(shí)驗(yàn)室，海南、湖北、西藏各選一個郵寄試驗(yàn)點(diǎn)，各寄1份樣品，囑其原件郵回，收回后進(jìn)行青蒿琥酯的含量測定，觀察其穩(wěn)定性情況。

2.2.3 引濕性檢驗(yàn) 取樣品約0.2 g，平鋪于稱量瓶中，精密稱定，實(shí)驗(yàn)室環(huán)境下敞口放置，分別在10 min、30 min、60 min后稱定，計(jì)算引濕增重。

2.3 檢測要求 本次能力驗(yàn)證對每個參加實(shí)驗(yàn)室賦予了一個唯一代碼。各參加實(shí)驗(yàn)室會收到 2 支標(biāo)注為:“QA0099-實(shí)驗(yàn)室代碼”的樣品。作業(yè)指導(dǎo)書、結(jié)果報(bào)告單、被測物品接收狀態(tài)確認(rèn)表。要求實(shí)驗(yàn)室按照作業(yè)指導(dǎo)書的要求在規(guī)定的期限內(nèi)進(jìn)行檢驗(yàn)并反饋檢驗(yàn)結(jié)果。

2.4 參加實(shí)驗(yàn)室的具體情況 本次能力驗(yàn)證共有57家實(shí)驗(yàn)室報(bào)名參加，最后反饋檢驗(yàn)結(jié)果的為56家。提交結(jié)果。參加實(shí)驗(yàn)室分布于22個省(自治區(qū))、直轄市，其中，食品藥品檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)42家，藥品生產(chǎn)企業(yè)QC實(shí)驗(yàn)室4家，其他檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)10家。

2.5 能力驗(yàn)證數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析的設(shè)計(jì)及評價(jià)原則

2.5.1 統(tǒng)計(jì)分析的設(shè)計(jì) 本次能力驗(yàn)證采用經(jīng)典統(tǒng)計(jì)[8]技術(shù)方法對結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，即采用經(jīng)典統(tǒng)計(jì)計(jì)算各實(shí)驗(yàn)室結(jié)果的Z比分?jǐn)?shù)統(tǒng)計(jì)的算術(shù)平均值作為指定值，傳統(tǒng)標(biāo)準(zhǔn)差作為能力評定標(biāo)準(zhǔn)差。能力驗(yàn)證樣品為單一濃度樣品，按下式分別計(jì)算本次能力驗(yàn)證計(jì)劃參加者的檢測結(jié)果，按公式計(jì)算Z值：Z=(x-X)/σ，式中x為參加者測試結(jié)果；X為算術(shù)平均值；σ為能力評定標(biāo)準(zhǔn)差。

本次能力驗(yàn)證以Z比分?jǐn)?shù)評價(jià)實(shí)驗(yàn)室的結(jié)果，即:若|Z|≤2，檢測結(jié)果為滿意；若 2<|Z|<3，檢測結(jié)果為有問題；若|Z|≥3，檢測結(jié)果為不滿意或離群值。

2.5.2 評價(jià)原則 本次能力驗(yàn)證以每個實(shí)驗(yàn)室報(bào)告的樣品的檢測結(jié)果為基礎(chǔ)，采用經(jīng)典統(tǒng)計(jì)技術(shù)進(jìn)行處理，用算術(shù)平均值作為指定值，傳統(tǒng)標(biāo)準(zhǔn)差作為能力評定標(biāo)準(zhǔn)差。主要統(tǒng)計(jì)量包括：樣本數(shù)、算術(shù)平均值、傳統(tǒng)標(biāo)準(zhǔn)差等。

3 統(tǒng)計(jì)處理及統(tǒng)計(jì)分析評價(jià)

3.1 樣品均勻性檢驗(yàn)結(jié)果 采用單因子方差分析法[9]對檢驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理，均勻性的試驗(yàn)測定結(jié)果和方差分析見表1和表2。樣品檢測值的F值為 1.707，均小于F臨界值F0.05(19，20) (2.137)，組間無顯著差異：F0.05，樣品的均勻性符合要求。

表1 樣品均勻性測定結(jié)果

表2 單因子方差分析結(jié)果

3.2 樣品穩(wěn)定性檢驗(yàn)結(jié)果 根據(jù)樣品均勻性試樣，樣品的初始含量100.27%。樣品進(jìn)行常溫穩(wěn)定性試驗(yàn)的結(jié)果和統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果分別見表3。

表3 樣品常溫穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果

采用t檢驗(yàn)法[9]，分別對常溫穩(wěn)定性檢驗(yàn)(F值1.016，小于Fcrit 3.982)、加速穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)(F值1.356小于Fcrit 3.239)、運(yùn)輸實(shí)驗(yàn)的樣品(F值4.559小于Fcrit 5.192)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理，F(xiàn)值均小于F臨界值，且P-value>0.05，表明無顯著性差異，樣品的穩(wěn)定性符合要求。

3.3 引濕性檢驗(yàn)結(jié)果 取樣品約0.2 g，平鋪于稱量瓶中，精密稱定，實(shí)驗(yàn)室環(huán)境下敞口放置，分別在10 min、30 min、60 min后稱定，計(jì)算引濕增重，均小于0.1%，表明試驗(yàn)取樣時(shí)，水分對結(jié)果的影響可以忽略。

3.4 能力驗(yàn)證結(jié)果 報(bào)名參加本次能力驗(yàn)證計(jì)劃的實(shí)驗(yàn)室共57家。1家中途退出，56家報(bào)告了結(jié)果。使用SPSS(13.0版本)數(shù)理統(tǒng)計(jì)軟件對56家實(shí)驗(yàn)室測得的青蒿琥酯含量數(shù)據(jù)進(jìn)行Kolmogorov-Smirnov法正態(tài)性檢驗(yàn) ，結(jié)果顯示：Kolmogorov-SmirnovZ值為0.863，P值大于0.05(P=0.446)，接受正態(tài)分布的假設(shè)。同時(shí)采用格拉布斯準(zhǔn)則[11]判斷無異常值，基于這種分布，適合采用經(jīng)典統(tǒng)計(jì)辦法評價(jià)各參加實(shí)驗(yàn)室的檢測結(jié)果。經(jīng)典統(tǒng)計(jì)參數(shù)匯總見表4。結(jié)果滿意的、不滿意的、可疑的實(shí)驗(yàn)室分別為53家、2家和1家，占反饋結(jié)果實(shí)驗(yàn)室總數(shù)(56家)比例分別為94.6%、3.6%和1.8%。為了清晰表示各實(shí)驗(yàn)室參加能力驗(yàn)證計(jì)劃的結(jié)果，能力驗(yàn)證的結(jié)果使用Z比分?jǐn)?shù)柱狀圖表示(見圖 1)，使每個實(shí)驗(yàn)室能夠很容易地與其它實(shí)驗(yàn)室的結(jié)果進(jìn)行比較。

表4 檢測結(jié)果統(tǒng)計(jì)參數(shù)匯總表

4 技術(shù)分析及技術(shù)建議

4.1 不滿意和可疑結(jié)果原因分析 色譜分離及色譜行為欠佳從本次能力驗(yàn)證提供的原始記錄系統(tǒng)適用性色譜圖看，2家離群的實(shí)驗(yàn)室中，1家分離度1.4，未達(dá)要求，主峰明顯變形，導(dǎo)致其含量測定結(jié)果與其他實(shí)驗(yàn)室之間有較大的差異；有一家色譜峰主峰略有變形。1家實(shí)驗(yàn)室的主峰與雙氫青蒿素之間還有未知峰積分，存在色譜行為相關(guān)參數(shù)相對較差的現(xiàn)象。

4.2 記錄問題 記錄存在以下問題：①液相色譜分析圖譜缺系統(tǒng)適用性試驗(yàn)圖；②對照品的配置中未見稱量記錄；③缺對照品的稱量記錄及對照品批號等關(guān)鍵信息記錄；④有手動積分的情況。以上數(shù)據(jù)反映部分參加實(shí)驗(yàn)室在數(shù)據(jù)的可靠性、完整性方面的管理有待提高。

4.3 電子數(shù)據(jù)存儲問題 原始記錄有2家實(shí)驗(yàn)室的色譜圖沒有存盤路徑，建議為利于檢驗(yàn)的溯源，圖譜的存盤路徑應(yīng)包含操作者姓名,一目了然,便于檢索，建議為：//姓名/檢品編號+檢品名稱；有2家色譜數(shù)據(jù)采集方法、分析方法和結(jié)果圖，保存于系統(tǒng)盤(C盤)，建議實(shí)驗(yàn)室加強(qiáng)數(shù)據(jù)的安全性管理，以免系統(tǒng)崩潰時(shí)，數(shù)據(jù)無法恢復(fù)，給溯源帶來問題。

4.4 技術(shù)建議 此次能力驗(yàn)證94.6%的實(shí)驗(yàn)室結(jié)果為“滿意”，說明多數(shù)實(shí)驗(yàn)室在執(zhí)行中國藥典標(biāo)準(zhǔn)時(shí)能夠保證測定結(jié)果的重現(xiàn)性和準(zhǔn)確性。但也有少部分實(shí)驗(yàn)室由于色譜條件不夠理想、實(shí)驗(yàn)操作不規(guī)范，導(dǎo)致測定結(jié)果為“可疑”甚至“不滿意”，建議加強(qiáng)人員色譜技術(shù)分析的培訓(xùn)。

5 討論

5.1 設(shè)備和色譜柱情況 根據(jù)各實(shí)驗(yàn)室提交原始記錄，使用的儀器設(shè)備和色譜柱均不同，在本次計(jì)劃中有17種不同品牌和10種規(guī)格的色譜柱被使用，涉及6種進(jìn)口品牌7種不同型號的高效液相色譜儀。提示，設(shè)備型號和色譜柱對該檢測結(jié)果影響不大，表明標(biāo)準(zhǔn)的適用性良好。

5.2 科學(xué)選擇統(tǒng)計(jì)方法 本次能力驗(yàn)證曾采用穩(wěn)健統(tǒng)計(jì)(四分位距)Z比分?jǐn)?shù)法對實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，結(jié)果有5家離群，3家可疑，滿意率為83%，但由于實(shí)驗(yàn)室上報(bào)數(shù)據(jù)相對較集中，穩(wěn)健統(tǒng)計(jì)四分位法計(jì)算得到的標(biāo)準(zhǔn)偏差過嚴(yán)，導(dǎo)致滿意率明顯下降，易出現(xiàn)統(tǒng)計(jì)學(xué)“棄真”錯誤。改用經(jīng)典統(tǒng)計(jì)，可有效避免這類錯誤。所以，為確保能力驗(yàn)證計(jì)劃的科學(xué)性，使所有參加能力驗(yàn)證活動的實(shí)驗(yàn)室都能獲得公平公正的評價(jià)，選擇合適的統(tǒng)計(jì)方法十分重要[11]。

5.3 記錄的重要性 本次能力驗(yàn)證采用經(jīng)典統(tǒng)計(jì)Z比分?jǐn)?shù)法，對實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，絕大多數(shù)實(shí)驗(yàn)室獲得了滿意的結(jié)果，真實(shí)的反映了實(shí)驗(yàn)室的能力水平。但從各實(shí)驗(yàn)室提交的原始記錄看，還存在一定的問題，實(shí)驗(yàn)室需引起重視并加以改進(jìn)。詳實(shí)的記錄是質(zhì)量體系成熟的標(biāo)志，是支持檢驗(yàn)結(jié)果和保護(hù)實(shí)驗(yàn)人員的最佳物證[12]，同時(shí)也是實(shí)驗(yàn)?zāi)軌蛩菰春蛷?fù)現(xiàn)的依據(jù)。

6 結(jié)論

通過本次注射用青蒿琥酯含量測定能力驗(yàn)證活動，結(jié)果表明，實(shí)驗(yàn)室高效液相色譜法的檢測能力總體較好, 個別不滿意實(shí)驗(yàn)室應(yīng)進(jìn)一步查證原因，采取措施及時(shí)糾正。今后不僅要加強(qiáng)藥品檢測人員的業(yè)務(wù)綜合技能的培訓(xùn)，還要重視實(shí)驗(yàn)記錄的重要性，確保檢測數(shù)據(jù)的溯源性及準(zhǔn)確可靠性。