郭延林 張樹泉 王小亮

山東省泰安市中醫(yī)醫(yī)院腦病科,山東 泰安 271000

腦梗死為臨床常見多發(fā)疾病，是我國發(fā)病率、致殘率、病死率最高的疾病之一，給家庭和社會(huì)帶來了極大的負(fù)擔(dān)。超早期靜脈溶栓和機(jī)械取栓治療是目前急性腦梗死具有循證醫(yī)學(xué)證據(jù)的治療方法，腦血管再通治療可挽救“缺血半暗帶”，使其向正常組織轉(zhuǎn)化或穩(wěn)定不繼續(xù)惡化[1]。超早期血管開通治療后可通過“氧化應(yīng)激”“炎性反應(yīng)”等多種渠道發(fā)生“缺血-再灌注(I/R)”損傷[2]，加重腦組織損傷，導(dǎo)致神經(jīng)功能缺損加重。因此，如何減輕和改善腦缺血再灌注損傷成為腦梗死患者腦血管開通治療后的又一嚴(yán)峻挑戰(zhàn)。中醫(yī)藥在腦梗死的治療中積累了豐富的經(jīng)驗(yàn)，為探索中醫(yī)藥改善腦缺血再灌注損傷的效果和作用機(jī)制，在前期臨床研究的基礎(chǔ)上，本研究采用益腎通脈方干預(yù)腦缺血再灌注大鼠，觀察其神經(jīng)功能缺損情況和相關(guān)血液學(xué)指標(biāo)，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 SPF級(jí)SD雄性大鼠，體質(zhì)量260～280 g，購自山東中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK-(魯)2019-0005。

1.2 藥物與制劑 益腎通脈方(制首烏20 g，山茱萸15 g，肉蓯蓉15 g， 炒山藥15 g，麥冬15 g，石斛15 g，五味子5 g，菖蒲10 g，郁金10 g，茯苓30 g，當(dāng)歸30 g，川芎30 g，全蝎10 g，益母草30 g，炙甘草5 g)，由泰安市中醫(yī)醫(yī)院藥劑科北京康仁堂顆粒藥房提供。分別加蒸餾水制成低劑量(1 mL含2.5 g生藥)、高劑量(1 mL含5 g生藥)的混懸液。

1.3 方法

1.3.1 分組 所有大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組、模型組、益腎通脈低劑量組和益腎通脈高劑量組4組，各10只。

1.3.2 模型制作 模型組、益腎通脈低劑量組和益腎通脈高劑量組參照Zea Longa[3]采用線栓法制作腦缺血再灌注模型：術(shù)前動(dòng)物禁食禁水 12 h，稱質(zhì)量后腹腔注射水合氯醛(3.0 mL/kg)麻醉，待大鼠麻醉后固定，用電動(dòng)剃須刀清理頸胸部鼠毛，碘伏消毒，切開皮膚，逐層分離直至暴露右側(cè)的頸總動(dòng)脈(CCA)和迷走神經(jīng)，再依次分離暴露CCA分叉部，頸內(nèi)動(dòng)脈(ICA)，頸外動(dòng)脈(ECA)，后將尼龍縫合線從CCA插入ICA并向前推動(dòng)，以阻斷至左大腦中動(dòng)脈(MCA)直至出現(xiàn)輕微阻力，腦缺血1 h后拔出線栓進(jìn)行缺血再灌注。假手術(shù)組只進(jìn)行血管神經(jīng)分離，不插入線栓。判斷造模成功標(biāo)準(zhǔn)：①懸尾實(shí)驗(yàn)不能完全伸展對(duì)側(cè)前爪；②前肢抵抗對(duì)側(cè)推力能力下降；③出現(xiàn)追尾現(xiàn)象。出現(xiàn)上述癥狀之一即為造模成功。

1.3.3 給藥治療 造模成功24 h后，益腎通脈低劑量組、益腎通脈高劑量組分別給予低劑量混懸液、高劑量混懸液各2 mL；假手術(shù)組和模型組給予2 mL的蒸餾水。每日1次，給藥治療時(shí)間為3 d。

1.4 觀察指標(biāo)

1.4.1 神經(jīng)功能評(píng)定 實(shí)驗(yàn)開始后，采取改良Bederson評(píng)分法[4]每天對(duì)大鼠的神經(jīng)功能損傷程度進(jìn)行評(píng)分：總分4分，其中無明顯損傷記0分；受損腦對(duì)側(cè)前肢蜷縮，不能完全伸展記1分；向受損腦的對(duì)側(cè)轉(zhuǎn)圈記2分；向受損腦的對(duì)側(cè)傾斜記3分；身體癱軟且無意識(shí)記4分。神經(jīng)功能損傷程度隨分值增大而加重。

1.4.2 血液學(xué)指標(biāo) 實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，經(jīng)腹主動(dòng)脈取血靜置，分離血清，分別測(cè)定血清丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、缺氧誘導(dǎo)因子-1α(HIF-1α)、內(nèi)皮素-1(ET-1)、內(nèi)皮型一氧化氮合酶(eNOS)、一氧化氮(NO)水平。

2 結(jié)果

2.1 益腎通脈方對(duì)大鼠神經(jīng)功能缺損的影響 假手術(shù)組大鼠由于并未進(jìn)行動(dòng)脈栓塞，故未出現(xiàn)腦梗死缺血癥狀，在7、14 d神經(jīng)功能缺損評(píng)分均為0分。模型組大鼠7、14 d神經(jīng)功能缺損評(píng)分均明顯高于其他組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);隨著益腎通脈方劑量的增加，大鼠神經(jīng)功能缺損評(píng)分逐漸降低，且在7、14 d各劑量益腎通脈方組大鼠神經(jīng)功能缺損評(píng)分均明顯低于模型組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，提示益腎通脈方在改善腦缺血再灌注大鼠神經(jīng)功能缺損方面起到顯著作用。見表1。

表1 四組大鼠神經(jīng)功能缺損評(píng)分比較

2.2 血液學(xué)指標(biāo)的變化 通過不同的試劑盒對(duì)血液指標(biāo)的檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，與假手術(shù)組比較，在其他三組大鼠體內(nèi)，MDA，HIF-1α，ET-1，eNOS和NO的含量均增加了，而SOD的含量出現(xiàn)降低。MDA和NO的含量在四組中的變化均不明顯。與假手術(shù)組相比，SOD的含量在模型組和益腎通脈低劑量組中顯著下降(P<0.05)，HIF-1α、ET-1在其他三組中顯著增加(P<0.05)，eNOS的含量在模型組和益腎通脈低劑量組中顯著下降(P<0.05)。與模型組比較，SOD的含量在益腎通脈高劑量組中顯著升高(P<0.05)，HIF-1α、eNOS的含量在益腎通脈高劑量組中顯著減少(P<0.05)。這些結(jié)果表明，益腎通脈處方對(duì)缺血再灌注大鼠血清SOD，HIF-1α和eNOS的含量均顯示出顯著的改善作用，但對(duì)ET-1的含量影響不顯著。見表2、表3、圖1。

表2 四組大鼠血清MDA、SOD、HIF-1α比較

表3 四組大鼠血清ET-1、eNOS、NO比較

圖1 四組大鼠血液學(xué)指標(biāo)比較

3 討論

腦梗死即缺血性腦血管病(ischemic cerebrovascular disease,ICVD)是由于腦血管狹窄或閉塞,腦組織因血流消失處于缺血、缺氧狀態(tài),后期出現(xiàn)腦組織壞死軟化,從而導(dǎo)致神經(jīng)功能缺損的一類疾病,具有高發(fā)病率、高致死致殘率、高復(fù)發(fā)率等特點(diǎn),嚴(yán)重威脅人民健康。隨著靜脈溶栓技術(shù)、腦血管支架成形術(shù)、血管內(nèi)機(jī)械取栓治療水平的提高，腦血管得以再通的同時(shí)，腦缺血再灌注損傷也越來越成為學(xué)術(shù)界關(guān)注的重點(diǎn)和熱點(diǎn)。腦缺血再灌注損傷(cerebral ischemia reperfusion injury,CIRI)是腦缺血一定時(shí)間后，再次恢復(fù)血液供應(yīng)時(shí),通過級(jí)聯(lián)反應(yīng)對(duì)腦組織造成的再次損傷，常導(dǎo)致神經(jīng)功能缺損、腦梗死和腦水腫等并發(fā)癥的出現(xiàn)，嚴(yán)重者可出現(xiàn)腦出血,引起嚴(yán)重功能障礙。缺氧情況下星形膠質(zhì)細(xì)胞釋放炎癥介質(zhì),缺血再灌注后腦組織內(nèi)滲入血液系統(tǒng)成分,引發(fā)血源性水腫,從而使得體內(nèi)超氧化物歧化酶(SOD)活性,丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)、血清白介素(IL)、腫瘤壞死因子(TNF)等表達(dá)上調(diào)[5]。SOD活性表明機(jī)體抗氧化能力,MDA表明細(xì)胞受損傷程度,而NO參與缺血性損傷的病理機(jī)制，IL是腦缺血急性期的重要炎癥介質(zhì)，TNF在腦缺血再灌注后誘導(dǎo)的白細(xì)胞浸潤和組織損傷中發(fā)揮重要作用。ET-1是血管活動(dòng)的重要調(diào)節(jié)因子之一，具有強(qiáng)效的調(diào)節(jié)血管收縮作用，其參與新生血管生成和血管重塑，促進(jìn)細(xì)胞外基質(zhì)合成，尤其在血栓性疾病的病理改變過程中發(fā)揮著重要的調(diào)節(jié)作用[6]。HIF-1α是腦組織缺血、缺氧狀態(tài)的重要信號(hào)分子，對(duì)缺血缺氧環(huán)境中組織細(xì)胞的能量代謝、血管舒縮功能、炎癥反應(yīng)、血管再生以及細(xì)胞衰亡等方面具有提示作用[7]。

本課題組在研讀歷代醫(yī)家理論經(jīng)驗(yàn)記載和最新醫(yī)學(xué)研究進(jìn)展的基礎(chǔ)上，結(jié)合自身臨床體會(huì)，逐步形成了“以傳統(tǒng)中醫(yī)辨證論治為主線，充分利用現(xiàn)代科技，以取象比類的思維方式，全面實(shí)現(xiàn)中醫(yī)現(xiàn)代化”的學(xué)術(shù)思想，在此指導(dǎo)下，把傳統(tǒng)中醫(yī)病機(jī)與現(xiàn)代病理結(jié)合，傳統(tǒng)中藥功效與現(xiàn)代藥理結(jié)合，采用中醫(yī)傳統(tǒng)辨證與現(xiàn)代微觀辨證相結(jié)合的辨證方法，積極開展缺血性中風(fēng)的理論與臨床研究?；趥鹘y(tǒng)醫(yī)學(xué)與現(xiàn)代醫(yī)學(xué)認(rèn)識(shí)，本課題組提出腦梗死的發(fā)生,是由于腎虛痰瘀內(nèi)生或其他因素致生痰瘀,阻于腦絡(luò)而發(fā)。腦組織缺血壞死可視為腎虛腦消髓減的微觀指征, 核心梗死周圍缺血半暗帶可視為血瘀的微觀指征, 梗死周圍水腫可視為痰阻的微觀指征。因此，本學(xué)科提出腎虛血瘀痰阻是急性腦梗死的重要病機(jī), 補(bǔ)腎活血化痰是急性腦梗死的基本治法[8]。據(jù)此理論，本課題組擬定益腎通脈方，應(yīng)用于急性腦梗死患者，前期臨床研究[9]發(fā)現(xiàn)，使用益腎通脈方治療急性腦梗死，可加速水腫消退，改善神經(jīng)功能缺損，提高日常生活能力，減輕殘障程度。

本研究結(jié)果顯示：采用益腎通脈方干預(yù)腦缺血再灌注大鼠，可很好地改善神經(jīng)功能缺損，升高血清SOD水平，降低血清HIF-1α和eNOS含量，提示益腎通脈方改善腦缺血再灌注大鼠神經(jīng)功能的作用機(jī)制可能與抗氧化、減輕炎癥反應(yīng)有關(guān)，在一定程度上可起到腦保護(hù)作用。本研究仍存在一些不足，比如樣本量較少導(dǎo)致部分檢測(cè)指標(biāo)沒有出現(xiàn)顯著差異，只進(jìn)行了單一時(shí)間點(diǎn)檢測(cè)、未開展時(shí)間-效果關(guān)系分析等，在今后的研究中當(dāng)進(jìn)一步完善。