（西北民族大學(xué)化工學(xué)院 甘肅 730106）

葡萄（拉丁學(xué)名：Vitis vinifera）為葡萄科葡萄屬的木質(zhì)藤本植物，果實球形或橢圓[1]。根據(jù)特性來看，葡萄介于熱性和涼性之間，屬于平性水果，所以這一類的水果更加的適合多數(shù)人食用。有開胃健脾、補虛強腎、補氣益血、強健筋骨等作用。葡萄皮中白藜蘆醇的含量高于葡萄的其他部位。白藜蘆醇現(xiàn)在已經(jīng)被研究發(fā)現(xiàn)具有非常高的藥用價值且已經(jīng)成為了世界上不可或缺的營養(yǎng)和藥用的商品等。

白藜蘆醇的化學(xué)名稱是3,4',5-三羥基-1,2-二苯基乙烯（3,4',5-芪三酚）。它是在植物被外界不明因素的影響下為保護(hù)自己所產(chǎn)生的一種抗菌素[2]。

白藜蘆醇于1940年首次從毛葉藜蘆（veratrum guandiforum）的根部分離得到。經(jīng)查詢文獻(xiàn)得知，白藜蘆醇是一種天然的抗氧化劑，可降低血液粘稠度[3-7]，抑制血小板凝結(jié)和血管舒張，保持血液暢通[8]，具有抗動脈粥樣硬化和冠心病[9]，缺血性心臟病、高血脂的防治作用，對認(rèn)知障礙也有一定的改善作用[10-12]，還可以預(yù)防癌癥的發(fā)生及發(fā)展[13-17]。

1.材料儀器與設(shè)備

(1)實驗材料

夏黑葡萄皮、無水乙醇（分析純）（中國食品藥品檢定研究院）、白藜蘆醇對照品（中國食品藥品檢定研究院）（分析純）、氫氧化鈉溶液、鹽酸溶液、蒸餾水、濾紙、硫酸鋁濾紙、容量瓶、燒杯、長頸漏斗、玻璃棒、鐵架臺、移液管、吸耳球、磨口錐形瓶、溫度計。

(2)實驗儀器與設(shè)備

紫外分光光度計（722E型-上海光譜儀器有限公司）、恒溫水浴鍋（HWS28型-電熱恒溫水浴鍋上海一恒科學(xué)儀器有限公司）、分析天平（FA1204型-天津天馬衡基儀器有限公司）、電子天平（FAZ204B型-上海精密科學(xué)儀器有限公司）、分子篩(天津華星金輝制藥機械有限公司、鼓風(fēng)干燥箱（DHG-9055A-上海齊欣科學(xué)儀器有限公司）、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海緒航科學(xué)儀器有限公司）。

2.實驗方法與結(jié)果

(1)檢測波長的確定

精密稱取白藜蘆醇對照品5mg于50ml的棕色容量瓶中，用乙醇（分析純）溶解并定容至刻度線，以乙醇溶液作空白對照，對白藜蘆醇對照品溶液進(jìn)行全波長紫外掃描，結(jié)果表明白藜蘆醇的乙醇溶液在326nm處有最大吸收，而空白樣品在此處無吸收，對波長測定無干擾，故選擇326nm為檢測波長。

(2)標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立

將上述配制的0.1mg/ml的白藜蘆醇標(biāo)準(zhǔn)溶液，之后通過梯度稀釋，配制成0.004mg/ml、0.005mg/ml、0.006mg/ml、0.007mg/ml、0.008mg/ml的白藜蘆醇的標(biāo)準(zhǔn)對照品溶液，以乙醇溶液作空白對照，在最大吸收波長326nm下測定吸光度，再以吸光度（A）對濃度（C）進(jìn)行線性回歸，得回歸方程A=117.32x+0.00782（R2=0.9994）。

圖1

(3)材料的前處理

首先將葡萄皮去肉洗凈，置于干燥箱中，在65℃下干燥8小時至干脆，然后將其粉碎全部通過2號篩，95%通過2號篩。用托盤天平稱取葡萄皮粉末5g，置于蒸餾燒瓶中，加入35ml95%乙醇，60℃下水浴浸提60min后，常壓下長頸漏斗過濾。所得濾液按照紫外光譜條件檢測。按照水浴溫度為50℃、60℃、70℃；水浴時間為40min、60min、80min；乙醇濃度為50%、60%、70%；料液比為1:6、1:7、1:8，進(jìn)行四因素三水平的正交優(yōu)化。

(4)葡萄皮中白藜蘆醇的提取率的測定

根據(jù)白藜蘆醇的標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中白藜蘆醇的質(zhì)量濃度，由下式計算提取率。

式中：C-葡萄皮中的白藜蘆醇的質(zhì)量濃度，mg/ml；V-樣品液體積，ml；D-稀釋倍數(shù)；M-樣品質(zhì)量，g。

(5)正交實驗設(shè)計

以浸提液中白藜蘆醇的浸提液為指標(biāo)，按照2.3的步驟操作，分別考察不同浸提溫度（50℃、60℃、70℃）、不同浸提時間（40min、60min、80min）、不同乙醇濃度（50%、60%、70%）、不同料液比（1:6、1:7、1:8）的浸提效果。正交試驗因素與水平見表1，正交試驗設(shè)計及結(jié)果見表2。

表1 正交試驗因素與水平

表2 浸提條件及指標(biāo)檢測結(jié)果

(6)數(shù)據(jù)分析與結(jié)果

由表2參數(shù)可知，對葡萄皮中白藜蘆醇提取率的影響，由大到小依次為料液比＞乙醇濃度＞浸提時間＞浸提溫度。白藜蘆醇的最佳提取工藝組合為A2B2C3D1，即浸提時間為60min，浸提溫度為60℃，料液比為1:8，乙醇濃度為50%，在上述條件同時滿足的情況下對葡萄皮中白藜蘆醇提取的效率可達(dá)到最大。計算所得其白藜蘆醇的提取率為2.079%。

3.討論

葡萄皮中的白藜蘆醇含量測定的方法有超聲萃取法、堿提酸沉法、加熱回流法等[18-19]，查詢相關(guān)文獻(xiàn)得知，加熱回流法更有利于白藜蘆醇的浸出。因為該方法在提取過程中，可以避免溶劑的揮發(fā)，而且溶劑可以回收循環(huán)利用，同時也避免了水溶性成分的干擾，具有操作簡便、提取效率高的特點。