曹 坤，謝 楠，劉麗萍，鄭大偉，王松松,高 選

山東大學生殖醫(yī)學研究中心/國家輔助生殖與優(yōu)生工程技術(shù)研究中心/生殖內(nèi)分泌教育部重點實驗室(山東大學)，山東濟南 250001

隨著高新技術(shù)的發(fā)展,醫(yī)學檢驗技術(shù)和醫(yī)學檢驗儀器不斷更新,臨床檢驗工作已從以手工為主逐步向自動化發(fā)展。只有檢測系統(tǒng)的分析性能符合臨床使用要求,才可以將檢測系統(tǒng)用于臨床。穩(wěn)定的檢測系統(tǒng)必須保證其誤差在臨床可接受范圍之內(nèi),這是保障檢驗結(jié)果質(zhì)量的前提。目前,臨床實驗室對凝血常規(guī)指標的檢測仍然是通過全自動血凝儀進行，為了保證檢測結(jié)果的準確性，依據(jù)《臨床檢驗方法確認與性能評價》[1]、WS/T 406-2012《臨床血液學檢驗常規(guī)項目分析質(zhì)量要求》及WS/T 407-2012《醫(yī)療機構(gòu)內(nèi)定量檢驗結(jié)果的可比性驗證指南》的相關(guān)要求，本研究對本實驗室內(nèi)Sysmex CA 7000全自動血凝儀(下稱Sysmex CA 7000)和Sysmex CA 1500全自動血凝儀(下稱CA 1500)的批內(nèi)精密度、日間精密度、線性驗證、臨床可報告范圍、準確性及正確度等性能指標評價，為保障儀器間結(jié)果的一致性，進行2套檢測系統(tǒng)間實驗室比對，以便對使用的檢測系統(tǒng)做全面評估。

1 材料與方法

1.1標本來源

1.1.1批內(nèi)精密度試驗 血漿為本實驗室兩種水平(正常、中度異常)的臨床標本。

1.1.2日間精密度試驗 凝血4項檢測使用正常質(zhì)控血漿Dade Control 1(批號：548060)和異常質(zhì)控血漿 Dade Control 2(批號：548274)，D-二聚體(D-D)檢測使用質(zhì)控血漿INNOVANCE D-Dimer Controls(批號：47275)。

1.1.3CA 7000和CA 1500準確性驗證試驗 試驗血漿分別為2018年衛(wèi)生和計劃生育委員會臨床檢驗中心第1次室間質(zhì)量評價用血漿和2018年山東省臨床檢驗中心第2次室間質(zhì)量評價用血漿。

1.1.4正確度驗證試驗 試驗血漿為檢測結(jié)果在參考區(qū)間內(nèi)的臨床標本，線性驗證和臨床可報告范圍驗證試驗血漿為高值血漿標本。上述血漿標本處理用0.109 mmol/L枸櫞酸鈉1∶9抗凝 ，1 500×g離心力離心15 min。

1.2儀器與試劑 試驗前分別對CA 7000和CA 1500 2套檢測系統(tǒng)進行校準。試劑、校準品、質(zhì)控品為CA 7000和CA 1500配套產(chǎn)品。

1.3方法與判定標準

1.3.1批內(nèi)精密度驗證 根據(jù)美國臨床和實驗室標準協(xié)會(CLSI)EP15-A2文件[2]選取兩種水平(正常、中度異常)的臨床標本(枸櫞酸鈉抗凝血漿)，按常規(guī)方法分別在CA 7000和CA 1500上連續(xù)檢測11次，計算后10次檢測結(jié)果的算術(shù)平均值和標準差，計算變異系數(shù)(CV)，纖維蛋白原(FIB)異常標本的水平要求>6.0 g/L或<1.5 g/L,凝血酶原時間(PT)、活化部分凝血活酶時間(APTT)、凝血酶時間(TT)、FIB、D-D 的CV要求見表1。

表1 批內(nèi)精密度驗證各項目CV要求(%)

1.3.2日間精密度驗證 使用兩種水平(正常、異常)的質(zhì)控品，按常規(guī)方法分別在CA 7000和CA 1500上檢測，連續(xù)測定20 d，每天一次，計算在控數(shù)據(jù)的CV,各項目CV要求見表2。

表2 日間精密度驗證各項目CV要求(%)

1.3.3線性驗證 選取1份接近預期上限的高濃度血漿(H)，按常規(guī)方法分別在CA 7000和CA 1500上檢測，按照80%、60%、40%、20%、10%的比例進行稀釋，每種稀釋度重復測定2次，計算均值，將實測值與理論值進行比較，計算Y=aX+b，驗證線性范圍，要求r≥0.975，a=1.00±0.05。

1.3.4臨床可報告范圍 選取1份接近預期上限的高濃度血漿(H)，按照1∶1、1∶2、1∶4、1∶8、1∶16、1∶32、1∶64、1∶128……的比例進行稀釋，每種稀釋度重復測定2次，將2次實測結(jié)果的均值與理論值進行比較得出R，R在0.8～1.2的最大稀釋度為可報告范圍。

1.3.5準確性驗證 使用5份質(zhì)評物進行單次檢測，計算每份標本檢測結(jié)果與靶值的相對偏差，每個項目的相對偏差符合要求的比例應≥80%。

1.3.6正確度驗證 使用10份檢測結(jié)果在參考區(qū)間范圍內(nèi)的臨床標本，每份標本檢測2次，計算20次檢測結(jié)果的均值，以參加原中華人民共和國衛(wèi)生部室間質(zhì)量評價并且結(jié)果合格的CA 7000為靶機，以其檢測均值為標準，計算偏倚。WS/T 406-2012《臨床血液學檢驗常規(guī)項目分析質(zhì)量要求》只對FIB進行要求，故本實驗室只對FIB進行驗證，要求偏倚≤10%。

1.3.72套系統(tǒng)間實驗室數(shù)據(jù)比對 CLSI EP9-A2[3]文件提供的方法，每個項目的檢測選擇30份標本，其中包含正常、異常結(jié)果的標本，均無重度黃疸、脂血和溶血的標本。PT、APTT、FIB、TT、D-D這5個項目在2套檢測系統(tǒng)上同時測定。把CA 7000檢測值作為參考，進行2套檢測系統(tǒng)臨床可接受性判斷，偏倚必須符合CLIA′88規(guī)定的允許誤差的1/2(PT、APTT≤7.5%,TT、FIB、D-D≤10%)，偏倚符合標準比率≥80%，最后對檢測結(jié)果計算r、回歸方程，觀察各檢測結(jié)果間差異有無統(tǒng)計學意義。

2 結(jié) 果

2.1批內(nèi)精密度 CA7000和CA1500所測得的正常標本和異常標本的PT、APTT、FIB的批內(nèi)精密度結(jié)果均符合WS/T 406-2012《臨床血液學檢驗常規(guī)項目分析質(zhì)量要求》。其他項目正常標本和異常標本的檢測結(jié)果均在廠家標識的要求范圍內(nèi)，驗證通過，見表3。

表3 CA 7000和CA 1500批內(nèi)精密度試驗結(jié)果

2.2日間精密度 CA 7000和CA 1500所測得的正常標本和異常標本的PT、APTT、FIB的日間精密度結(jié)果均符合WS/T 406-2012《臨床血液學檢驗常規(guī)項目分析質(zhì)量要求》。其他項目正常標本和異常標本的檢測結(jié)果均在廠家標識的要求范圍內(nèi)，驗證通過，見表4。

表4 CA 7000與CA 1500日間精密度試驗結(jié)果

2.3線性驗證 CA 7000和CA 1500檢測FIB和D-D時按照比例稀釋進行線性驗證，線性驗證得出的a及r結(jié)果均滿足要求，驗證合格，見表5。

表5 CA 7000和CA 1500儀器線性驗證結(jié)果

2.4臨床可報告范圍 CA 7000和CA 1500檢測FIB和D-D時按照倍比稀釋，2套檢測系統(tǒng)的FIB和D-D最大稀釋倍數(shù)分別為16倍和32 倍，均具有較寬的臨床可報告范圍，見表6。

表6 CA 7000和CA 1500臨床可報告范圍試驗結(jié)果

2.5準確性驗證 CA7000和CA1500檢測質(zhì)評物的結(jié)果均在允許范圍內(nèi)，CA7000參加2018年衛(wèi)生和計劃生育委員會臨床檢驗中心第1次室間質(zhì)量評價、CA1500參加2018年山東省臨床檢驗中心第2次室間質(zhì)量評價均滿分通過，驗證通過。見表7。

表7 CA 7000和CA 1500準確性驗證偏倚結(jié)果(%)

2.6正確度驗證 本實驗室按照《臨床血液學檢驗常規(guī)項目分析質(zhì)量要求》對FIB進行正確度驗證，2套檢測系統(tǒng)間的偏倚符合文件要求， 見表8。

表8 CA 7000和CA 1500檢測FIB正確度驗證試驗結(jié)果

2.7系統(tǒng)間實驗室數(shù)據(jù)比對 2套檢測系統(tǒng)相同標本相同項目檢測結(jié)果比較分析，以CA 7000為參考， CA 1500的檢測結(jié)果與CA 7000的檢測結(jié)果進行比較，偏倚在1/2CLIA′88 TEa范圍內(nèi)的比例均≥80%。2套檢測系統(tǒng)回歸方程的r2結(jié)果均>0.95，比對結(jié)果相關(guān)性良好，檢測結(jié)果間差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，見表9、表10。

表9 CA 7000和CA 1500系統(tǒng)間實驗室數(shù)據(jù)比對結(jié)果

表10 CA 7000和CA 1500 2套檢測系統(tǒng)檢測結(jié)果

3 討 論

隨著凝血常規(guī)檢測標本的日益增加及臨床對凝血項目檢測的需求，檢測速度快的全自動血凝儀成為大部分臨床檢驗實驗室的首選。凝血4項和D-D檢測作為實驗室的常規(guī)檢測項目，在止凝血、抗凝治療、溶栓治療和止血及血栓疾病的診斷和治療中可提供可靠的檢測依據(jù)，因此，儀器的穩(wěn)定及檢測結(jié)果的準確就顯得尤為重要[4-5]。本實驗室同時配備CA 1500和CA 7000這2臺全自動血凝儀，2套檢測系統(tǒng)使用的都是原產(chǎn)公司的質(zhì)控品和試劑，既能滿足常規(guī)檢測的要求，又可以保證實驗室急診項目標本周轉(zhuǎn)時間。

為了保證實驗室結(jié)果的可靠性，在保證CA 1500和CA 7000 2套檢測系統(tǒng)定期維護及定期校準的前提下，本實驗室按照原中華人民共和國衛(wèi)生部頒布的《醫(yī)療機構(gòu)臨床實驗室管理辦法》和ISO15189的要求[6]，對2套檢測系統(tǒng)同時進行性能評價，并進行了2套檢測系統(tǒng)之間的實驗室比對。

性能評價驗證結(jié)果表明，CA 7000批內(nèi)精密度為0.76%～4.34%，日間精密度為1.99%～6.04%，CA 1500批內(nèi)精密度為0.80%～5.04%，日間精密度為3.61%～9.68%，2套檢測系統(tǒng)各個項目的批內(nèi)精密度和日間精密度均在WS/T 406-2012《臨床血液學檢驗常規(guī)項目分析質(zhì)量要求》的最小允許范圍內(nèi)。實驗數(shù)據(jù)也顯示，較先進的CA 7000批內(nèi)精密度和日間精密度明顯優(yōu)于CA 1500。2套檢測系統(tǒng)均進行了FIB和D-D 2個項目的線性范圍驗證，2套檢測系統(tǒng)r≥0.975，a均在1.00±0.05范圍內(nèi)，線性評價良好。在臨床可報告范圍性能評價中，選取本實驗室1份接近預期上限的高濃度血漿，進行比例稀釋后分別進行了FIB和D-D檢測，結(jié)果表明， CA 1500和CA 7000 2套檢測系統(tǒng)均具有較寬的臨床可報告范圍，可以同時滿足臨床檢測需求。分析FIB檢測數(shù)據(jù)，認為依據(jù)《臨床血液學檢驗常規(guī)項目分析質(zhì)量要求》，2套檢測系統(tǒng)的正確度評價合格。在準確性性能評價中，CA 7000和CA 1500 2套檢測系統(tǒng)分別參加2018年衛(wèi)生和計劃生育委員會和山東省臨床檢驗中心凝血試驗室間質(zhì)量評價，均滿分通過，PT、APTT、FIB、TT 4個項目的偏倚系數(shù)也均在廠家要求的范圍內(nèi)，說明2套檢測系統(tǒng)準確性良好。本實驗室準確性性能評價采用的是參加室間質(zhì)量評價的結(jié)果數(shù)據(jù)，室間質(zhì)量評價的標本靶值是通過不同實驗室使用同一儀器同一方法，剔除離群值后獲得的所有結(jié)果的平均值，通過本方法進行準確性性能評價更容易識別實驗室存在的問題，即識別系統(tǒng)誤差，然后制訂相應的預防及補救措施。借助室間質(zhì)量評價來進行準確性評價，不僅方便，而且可以對檢測方法的有效性和可比性進行相應監(jiān)控。

對于同一實驗室用2套及以上檢測系統(tǒng)檢測同一項目時，為保證檢測結(jié)果的穩(wěn)定性和持續(xù)一致性，ISO15189準則要求，實驗室必須定期進行同一檢測項目不同檢測系統(tǒng)之間的結(jié)果比對，這也是實現(xiàn)實驗室間結(jié)果互認的保障。實驗室內(nèi)或?qū)嶒炇议g不同檢測系統(tǒng)相同檢測項目檢驗結(jié)果的互認，既可以節(jié)約醫(yī)療資源，又可以便利患者的就醫(yī)行為，目前已成為醫(yī)療發(fā)展的趨勢。有學者認為，可以用新鮮血漿對不同血凝儀進行比對，采用偏倚≤1/2 CLIA′88規(guī)定的允許總誤差作為不同檢測系統(tǒng)之間檢測結(jié)果可比性及臨床可接受性的判斷標準[7-11]，依據(jù)此標準，本實驗室CA 7000和CA 1500 2套檢測系統(tǒng)間實驗室數(shù)據(jù)比對偏倚符合標準數(shù)≥80%，且檢測結(jié)果相關(guān)性好，由此證明2套檢測系統(tǒng)間檢測結(jié)果具有較好的可比性。

綜上所述，本實驗室CA 1500和CA 7000 2套檢測系統(tǒng)均具有良好的批內(nèi)精密度、日間精密度、準確性、正確度，線性范圍和臨床可報告范圍滿足臨床需求[12]，而且2套檢測系統(tǒng)間的數(shù)據(jù)一致性高，具有良好的可比性[13]，均符合ISO15189標準化實驗室的質(zhì)量管理要求，2套檢測系統(tǒng)均能滿足實驗室檢測的要求。