金賀偉，閆如霞，唐德富

(甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，甘肅 蘭州 730070)

硒是人和動(dòng)物體必需的微量礦物元素，相關(guān)研究表明硒具有提高免疫力、抗氧化、抗腫瘤等功能[1-2].硒也是抗氧化酶如谷胱甘肽過氧化物酶的必需成分，它具有保護(hù)細(xì)胞免受自由基引起損傷的作用[3].硒缺乏會(huì)導(dǎo)致胃腸和甲狀腺疾病、免疫反應(yīng)受損和脂質(zhì)過氧化增加[4-6].同樣，硒過量會(huì)導(dǎo)致動(dòng)物機(jī)體中毒，如呼吸障礙、貧血、共濟(jì)失調(diào)、腹瀉、肝硬化等，嚴(yán)重者甚至引起死亡[7].硒元素不能由動(dòng)物機(jī)體自身合成，必須從體外攝取以滿足機(jī)體需要[8].因此，外源性硒產(chǎn)品的生物學(xué)效價(jià)對機(jī)體補(bǔ)硒至關(guān)重要.自然界中硒有無機(jī)硒和有機(jī)硒兩種存在形式，與亞硒酸鈉等無機(jī)硒相比較，有機(jī)硒如蛋氨酸硒和酵母硒的生物學(xué)利用率較高[9-11].此外，無機(jī)硒存在生物學(xué)利用率和家禽耐受性低、毒副作用大等缺點(diǎn)，而有機(jī)硒(蛋氨酸硒和酵母硒)存在含量和化學(xué)形態(tài)穩(wěn)定性差、生產(chǎn)成本高、市售價(jià)格昂貴等不足.硒代葡萄糖是利用葡萄糖作為載體，利用負(fù)二價(jià)硒與羥基具有強(qiáng)親核性的特性合成制得，是一種低成本、安全的新型有機(jī)硒產(chǎn)品，然而關(guān)于硒代葡萄糖在肉仔雞飼糧中的應(yīng)用鮮見研究報(bào)道，因此，本研究旨在以無機(jī)硒(亞硒酸鈉)為參考，評估硒代葡萄糖對肉仔雞生產(chǎn)性能、器官硒含量和組織硒含量的影響，并確定其生物學(xué)利用率，以期為硒代葡萄糖在家禽產(chǎn)業(yè)的應(yīng)用提供理論數(shù)據(jù).

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

試驗(yàn)用硒代葡萄糖購自商業(yè)公司，硒含量為2 500 mg/kg；亞硒酸鈉購自四川省某公司，預(yù)混劑，硒含量為1.0%；試驗(yàn)用肉仔雞品種為科寶505白羽肉雞，由陜西省某公司提供.

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

試驗(yàn)采用2×5兩因子析因試驗(yàn)設(shè)計(jì)，即2種硒源(亞硒酸鈉和硒代葡萄糖)，5個(gè)硒添加水平(0、0.3、0.6、0.9、1.2 mg/kg)，共9個(gè)處理組(空白對照共用)，每個(gè)處理6個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)12只公雞，共648只雞.飼養(yǎng)期為42 d，分前期(0～21 d)和后期(22～42 d)兩期進(jìn)行.

1.3 飼糧配方

試驗(yàn)基礎(chǔ)飼糧配方參照我國雞飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)(NY/T33-2004)配制.配方計(jì)算時(shí)，原料中干物質(zhì)、粗蛋白、粗脂肪、有機(jī)物、鈣和總磷的含量均采用實(shí)測值，其它指標(biāo)參考中國飼料成分及營養(yǎng)價(jià)值表(2017年第 28版).試驗(yàn)中肉仔雞提供粉料飼喂.基礎(chǔ)飼糧配方和營養(yǎng)水平見表1.

表1 基礎(chǔ)飼糧配方及營養(yǎng)水平(風(fēng)干基礎(chǔ))

預(yù)混料(前期)為每千克飼糧提供(Premix provides per kilogram of feed)：VD33759.9 IU；VK31.5 mg；VB11.5 mg；VB25.4 mg；VB62.4 mg；VB120.012 mg；生物素(Biotin) 0.03 mg；泛酸鈣(Calcium pantothenate) 9.00 mg；葉酸 (Folic acid) 0.45 mg；煙酰胺(Nicotinamide) 15.00 mg；抗氧化劑(Antioxidant) 200 mg；Mn 122.00 mg；Fe 62.00 mg；Zn 62.00 mg；Cu 8.00 mg；I 13.90 mg；22～42 d；VD33 759.9 IU；VK31.50 mg；VB11.50 mg；VB25.40 mg；VB62.40 mg；VB120.012 mg；生物素(Biotin) 0.03 mg；泛酸鈣(Calcium pantothenate) 9.00 mg；葉酸(Folic acid) 0.45 mg；煙酰胺(Nicotinamide) 15.00 mg；抗氧化劑(Antioxidant) 203.00 mg；Mn 102.00 mg；Fe 50.00 mg；Zn 50.00 mg；Cu 8.00 mg；I 15.00 mg.

1.4 飼養(yǎng)管理

肉仔雞飼養(yǎng)管理和免疫流程參考《科寶肉雞飼養(yǎng)管理手冊》執(zhí)行.采用3層疊籠飼養(yǎng)，自由采食和飲水，每日飼喂3次，分別于7：00、14：00和19：00進(jìn)行.每日檢查是否有死淘雞只，準(zhǔn)確稱量死淘雞體質(zhì)量和余料量.雞舍內(nèi)溫度前3 d 控制在36 ℃左右，之后每隔2 d 降低1 ℃，14 d 以后舍內(nèi)溫度控制在恒溫25 ℃.從第3天開始舍內(nèi)通風(fēng)換氣，保證舍內(nèi)空氣無惡臭氣味.每天早晚各1次用1∶3 000的強(qiáng)力消毒靈Ⅱ(主要成分：二氯異氰脲酸鈉粉)、雙氧水、新潔爾滅等消毒劑交替使用對試驗(yàn)雞舍進(jìn)行消毒處理，包括雞籠、地面、墻面、窗戶、糞板及其他工具，并每隔3 d 帶雞消毒1次.定期清理糞板，保持雞舍內(nèi)外的空氣清潔衛(wèi)生.

1.5 樣品采集

于42 d，以重復(fù)為單位每籠抽取與平均體質(zhì)量接近的2只雞采集翅下靜脈血液樣品，用于血清指標(biāo)的測定.然后采用斷頸法屠宰試驗(yàn)雞，即刻剝離腸道和器官，分別采集胸肌、心臟、肝臟、脾臟、肺臟、腎臟、胰臟等樣品，用于器官和組織硒含量的測定.

1.6 測定指標(biāo)及方法

1.6.1 生長性能 分別于0、21、42 d 按重復(fù)為單位對試驗(yàn)雞進(jìn)行空腹稱質(zhì)量，試驗(yàn)期內(nèi)每日記錄各組投料量和結(jié)料量，并計(jì)算各飼養(yǎng)期內(nèi)肉雞體增質(zhì)量、采食量和料質(zhì)量比等指標(biāo).

1.6.2 器官和組織硒含量 采用 UV756CRT 紫外-可見分光光度計(jì)，在30 ℃、pH 1.5～2.0的范圍內(nèi)，添加5 mL鄰苯二胺(1 g/L)和2 mL乙二胺四乙酸二鈉(EDTA-2Na)(1 g/L)反應(yīng)22 min后，以甲苯萃取振蕩時(shí)間為6 min條件下進(jìn)行樣品制備處理，在波長為333 nm處測定D值.

1.7 數(shù)據(jù)分析

所有試驗(yàn)數(shù)據(jù)用Excel 2016軟件統(tǒng)計(jì)整理后，以硒源和硒添加水平為主效應(yīng)，采用SPSS 26.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行雙因子方差分析.方差分析F檢驗(yàn)差異顯著時(shí)，以Duncan法進(jìn)行多重比較.P<0.05為差異顯著，0.05≤P<0.10認(rèn)為有顯著性趨勢.

采用SPSS 26.0軟件中多元線性回歸方程：y=b0+b1x(s)+b2z(t)，其中Y為所測指標(biāo)(如組織器官硒含量與硒水平作線性回歸分析)，x(s)，x(t)分別代表亞硒酸鈉和硒代葡萄糖，b0、b1、b2為方程系數(shù).以亞硒酸鈉為標(biāo)準(zhǔn)(100%)，用多元線性回歸斜率比法計(jì)算硒代葡萄糖相對于亞硒酸鈉的生物學(xué)利用率.

2 結(jié)果與分析

2.1 硒源和硒添加水平對肉仔雞生長性能的影響

由表2可以看出，硒源和硒添加水平間交互作用對肉仔雞生產(chǎn)性能各指標(biāo)均無顯著影響(P>0.05).試驗(yàn)前期各組間肉仔雞采食量、體增質(zhì)量和料質(zhì)量比均無顯著差異(P>0.05).試驗(yàn)后期，與對照組相比較，飼糧添加0.3、0.6、0.9、1.2 mg/kg硒顯著提高肉仔雞體增質(zhì)量(P<0.05)，且0.9、1.2 mg/kg硒添加組肉仔雞體增質(zhì)量顯著高于0.3 mg/kg組(P<0.05).0.9 mg/kg組料質(zhì)量比顯著低于對照組(P<0.05).從全期看(0～42 d)，硒源對肉仔雞生產(chǎn)性能無顯著性影響(P>0.05)，但0.9、1.2 mg/kg硒添加組肉仔雞體增質(zhì)量顯著高于對照組(P<0.05)，且0.9 mg/kg組體增質(zhì)量顯著高于0.3、0.6 mg/kg組(P<0.05).對照組料質(zhì)量比顯著高于其他硒添加組(P<0.05).

2.2 硒源和硒添加水平對肉仔雞器官和組織硒含量的影響

由表3可知，不同硒源對肉仔雞心臟、脾臟和胰臟硒含量的影響差異顯著(P<0.05)，硒代葡萄糖組顯著高于亞硒酸鈉組，分別提高了11.76%、16.67%和20%.硒添加水平在0.3～1.2 mg/kg時(shí)，硒水平對心臟、肝臟、脾臟、肺臟、腎臟、胰臟和胸肌中硒含量的影響差異顯著(P<0.05)，且均以1.2 mg/kg組硒含量最高.硒源和硒添加水平間交互作用顯著影響肉仔雞脾臟和胰臟硒含量(P<0.05).

表2 硒源和硒水平對肉仔雞生產(chǎn)性能的影響

表3 硒源和硒添加水平對42 d 肉仔雞器官和組織硒含量的影響

2.3 硒代葡萄糖的相對生物學(xué)利用率

由表4可知，以22～42 d料質(zhì)量比、心臟、肝臟、脾臟、肺臟、腎臟和胸肌為效應(yīng)指標(biāo)，硒代葡萄糖相對于亞硒酸鈉的生物學(xué)利用率分別為104.54%、133.33%、141.93%、125.71%、118.91%、109.75%、104.76%、136.84%.相對于亞硒酸鈉，硒代葡萄糖的生物學(xué)利用率為121.98%.

表4 硒代葡萄糖的相對生物學(xué)利用率

3 討 論

3.1 硒源和硒添加水平對肉仔雞生長性能的影響

研究發(fā)現(xiàn)，硒蛋白與內(nèi)分泌激素密切相關(guān)，缺硒體內(nèi)生長激素合成量不足導(dǎo)致生長受阻，進(jìn)而影響機(jī)體正常的生理代謝和生長發(fā)育[12].本研究發(fā)現(xiàn)，飼糧添加不同硒源和硒水平對0～21 d 肉仔雞采食量、體增質(zhì)量和料質(zhì)量比均無顯著差異，該結(jié)果與Bakhshalinejad等[13-14]一致.有相關(guān)研究顯示這主要與動(dòng)物品種、日齡及試驗(yàn)條件有關(guān).早期多數(shù)研究結(jié)果表明飼糧使用有機(jī)硒比亞硒酸鈉試驗(yàn)動(dòng)物的增重效果更好[15-16]，本試驗(yàn)也得到類似結(jié)果.本試驗(yàn)中，試驗(yàn)后期和全期飼糧添加硒后肉仔雞體增質(zhì)量和料質(zhì)量比均得到顯著改善，再次證實(shí)了硒對肉仔雞生長發(fā)育的重要性.林長光等[17]研究報(bào)道，日糧中添加0.3 mg/kg納米硒和0.5 mg/kg酵母硒均顯著提高斷奶仔豬平均日增質(zhì)量，添加0.5 mg/kg酵母硒和0.3 mg/kg納米硒料質(zhì)量比均顯著低于對照組和0.7 mg/kg亞硒酸鈉組.辛可啟等[18]報(bào)道，與對照組比較，0.6 mg/kg有機(jī)硒組飼養(yǎng)后期(22～42 d)和全期(0～42 d)肉仔雞體質(zhì)量均顯著提高，硒添加組對肉仔雞采食量均無顯著影響.

3.2 硒源和硒添加水平對肉仔雞器官和組織硒含量的影響

器官和組織硒含量直接反映動(dòng)物對硒的吸收利用，不同硒源均能提高組織硒含量，且有機(jī)硒效果優(yōu)于無機(jī)硒.本試驗(yàn)中，添加0.3～1.2 mg/kg的硒顯著改善心臟、肝臟、脾臟、肺臟、腎臟、胰臟和胸肌的硒含量.王麗賽等[19]研究發(fā)現(xiàn)，飼糧中添加不同水平的硒可顯著提高血漿和組織(肝臟、腎臟、胰臟、胸肌和腿肌)中硒含量，且隨著硒添加水平的增加硒含量也隨之升高.Briens等[20]研究發(fā)現(xiàn)肌肉中的硒含量隨著日糧中酵母硒的增加而提高，且有顯著的遞增效應(yīng).另Mateo等[21]、Speight等[22]、Juniper等[23]、Davis等[24]的研究結(jié)果均與本試驗(yàn)結(jié)果相一致.本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)不同硒源提高了心臟、脾臟和胰臟的硒含量.Invernizzi等[25]報(bào)道，不同硒源的硒產(chǎn)品均能顯著提高肝臟、肌肉、腎臟和血漿等組織的硒含量，且有機(jī)硒組的組織硒含量顯著高于無機(jī)硒組，類似的結(jié)果高建忠等[26]也有報(bào)道.有機(jī)硒和無機(jī)硒沉積效率的差異由其吸收和代謝途徑差異所決定.無機(jī)硒通過簡單的擴(kuò)散過程從腸道被動(dòng)吸收，吸收范圍為50～90%[27]，然后通過硫氧還蛋白還原酶或與谷胱甘肽反應(yīng)還原成硒化物[28]，而有機(jī)硒通過氨基酸轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制被組織吸收[29]；與無機(jī)硒化合物簡單還原反應(yīng)相反，有機(jī)硒化合物必須通過轉(zhuǎn)硫途徑轉(zhuǎn)化為硒代半胱氨酸，然后被β-裂解酶裂解或直接被γ-裂解酶裂解成硒化物.

3.3 硒代葡萄糖相對生物學(xué)利用率

生物學(xué)利用率是衡量藥物、營養(yǎng)物質(zhì)、膳食補(bǔ)充劑或功能性成分在機(jī)體內(nèi)利用程度的參數(shù)，常用斜率比法來研究.待評定元素的生物學(xué)效價(jià)等于待評定元素斜率與參比標(biāo)準(zhǔn)斜率的比值.相對生物學(xué)效價(jià)高于100%，說明待評定元素被動(dòng)物利用程度好于參比標(biāo)準(zhǔn)物，反之低于標(biāo)準(zhǔn)物.Yoshida等[9]報(bào)道，依據(jù)組織硒濃度計(jì)算，硒的生物利用率為135%～165%，根據(jù)谷胱甘肽過氧化物酶相對于硒的活性計(jì)算，生物利用率為105%～197%.Kinal等[10]發(fā)現(xiàn)，根據(jù)肉仔雞腿肌和腎臟中的硒濃度計(jì)算，酵母硒的硒生物利用度高于亞硒酸鈉.Liu等[11]報(bào)道酵母硒來源的硒比亞硒酸鈉來源的硒更有利于提高組織中的硒濃度的表達(dá).本試驗(yàn)綜合考慮肉仔雞生長性能、器官和組織硒含量，相對于亞硒酸鈉，硒代葡萄糖對肉仔雞的生物學(xué)利用率高于100%，說明硒代葡萄糖的利用效率優(yōu)于亞硒酸鈉.

4 結(jié)論

飼糧中添加0.30～1.20 mg/kg的硒對肉仔雞體增質(zhì)量和料質(zhì)量比均有改善.隨著日糧硒添加水平升高，肉仔雞各器官和組織中硒含量也相應(yīng)提高.綜合考慮肉仔雞生長性能、器官和組織硒含量，硒代葡萄糖相對于亞硒酸鈉的肉仔雞生物學(xué)利用率為121.98%，說明肉仔雞飼糧中添加硒代葡萄糖補(bǔ)硒效果優(yōu)于亞硒酸鈉.