周文杰

（河北衡水學(xué)院生命科學(xué)系 河北衡水 053000）

丹參在我國人工種植很常見，隨著多年的大規(guī)模種植，其連作障礙帶來的丹參根腐病危害日益嚴(yán)重，使丹參的生產(chǎn)效益降低，嚴(yán)重時會導(dǎo)致大面積死亡。目前對丹參根腐病的防治主要以化學(xué)防治為主，化學(xué)農(nóng)藥的種類日漸繁多，效果明顯，價格低廉等優(yōu)勢在農(nóng)藥市場中占據(jù)主導(dǎo)地位，而病菌的耐藥性也日益提高，有大量的化學(xué)農(nóng)藥殘留危害人類健康，所以迫切需要新型的植物源農(nóng)藥的研發(fā)。

通過超聲波輔助提取方法，研究了不同料液比條件下大蒜水提取物對丹參根腐病菌的抑制效應(yīng)，為丹參根腐病的生物防治提供理論支撐。

1 材料與方法

1.1 供試材料 大蒜于2019 年10 月購買于衡水市超市，取大蒜蒜瓣，用蒸餾水沖洗擦凈，陰涼處晾干，粉碎，稱量10 g 粉末置于干燥箱中保存?zhèn)溆谩?/p>

供試主要試劑：無菌水、PDA 培養(yǎng)基（瓊脂20 g，馬鈴薯200 g，葡萄糖20 g，水1 L）。主要菌種：丹參根腐病病原菌。

1.2 主要儀器 高速組織搗碎機（上海標(biāo)本模型廠）、立式壓力蒸汽滅菌器（上海博訊）、生化培養(yǎng)箱（上海一恒）、微波爐（格蘭仕）、電子天平（上海精科）、冰箱（容聲）、雙人單面凈化工作臺（上海博訊）、電磁爐（美的）等。

1.3 試驗方法 稱取研磨好的大蒜10 g，分別按料液比1∶2，1∶4，1∶6，1∶8，1∶10 比例浸泡蒸餾水，貼標(biāo)簽，恒溫振蕩器震蕩24 h 后，進(jìn)行超聲波細(xì)胞破碎儀破碎，超聲波破碎時間為20 min，超聲波破碎功率為10%。破碎后，用2 層紗布進(jìn)行2 次過濾后定容，保存于2～4 ℃冰箱備用。

在超凈工作臺上，分別取出2 mL 大蒜提取液與15 mL融化的PDA培養(yǎng)基，加入90 mm 培養(yǎng)皿中，用玻璃棒攪拌均勻，加入等量無菌水作為對照。待培養(yǎng)基凝固后，用4 mm 的打孔器打取已經(jīng)活化的丹參根腐病菌餅，然后把菌餅接入到培養(yǎng)基中，每個培養(yǎng)基中接3 個菌餅，每個處理3 個重復(fù)。置于26 ℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。3 d 后用十字交叉法測量菌落直徑，算出每個平板菌落直徑的平均數(shù)，與對照菌落作比較，計算抑菌率。得出最佳提取條件。

抑菌率/%=[（對照菌落生長直徑-提取液處理菌落生長直徑）/對照菌落生長直徑]×100%

2 結(jié)果與分析

2.1 不同料液比條件下大蒜提取物對丹參根腐病菌抑制比較 由表1 可知，不同料液比大蒜提取物的抑菌結(jié)果差別較大，抑菌率首先隨著料液比的增加而逐漸增大，但在1∶10 時又出現(xiàn)了降低的現(xiàn)象，且小于了1∶6，但大于1∶2 和1∶4，抑菌率最高為1∶8，達(dá)到57.72%的抑菌率，抑菌率大小的排列順序為：1∶8＞1∶6＞1∶10＞1∶4＞1∶2。

表1 LED 法不同料液比抑菌率的比較

通過對抑菌率的方差分析可知，F(xiàn)=3.351，p=0.032＜0.05，說明料液比確實有處理效應(yīng)，進(jìn)行多重比較見表1，可知，1∶8 料液比下，大蒜提取液對丹參根腐病菌菌絲生長的抑制率最大，且與其他料液比條件相比差異顯著（p＜0.05），而與1∶6 和1∶10 相比差異沒達(dá)到極顯著水平。因此1∶8 為最佳提取料液比。

3 結(jié)論與討論

本文就大蒜不同料液比提取物對丹參根腐病菌的抑制效應(yīng)進(jìn)行了研究，在超聲時間、超聲功率均一定的條件下，以料液比作為單影響因素，確定了不同因素水平抑菌率的差異，通過方差分析和多重比較確定：1∶8 為最佳提取料液比，料液比太高反而降低了抑菌率。本試驗中用超聲波技術(shù)輔助提取大蒜的抑菌活性物質(zhì)，既保持了大蒜內(nèi)有效物質(zhì)的活性，節(jié)省了提取時間，又增大了提取率。丹參根腐病的病原菌本實驗室已經(jīng)鑒定是腐皮鐮刀菌，丹參根腐病是由腐皮鐮刀菌浸染所致的一種土傳病害，近年來在田間發(fā)病株率達(dá)10%～30%，導(dǎo)致丹參產(chǎn)量下降，品質(zhì)變劣，本試驗結(jié)果為生物防治丹參根腐病提供了理論依據(jù)，為大蒜的開發(fā)利用開辟了新的途徑，表明大蒜防治丹參根腐病具有較好的應(yīng)用前景。