秦仁炳,王書(shū)軍,項(xiàng)豐娟,王津,王碩*
(1.天津科技大學(xué)食品營(yíng)養(yǎng)與安全國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,天津 300457;2.天津科技大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院,天津 300457;3.南開(kāi)大學(xué)醫(yī)學(xué)院天津市食品科學(xué)與健康重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,天津 300071)
淀粉和脂類(lèi)是食品的宏量營(yíng)養(yǎng)元素,對(duì)食品的風(fēng)味、質(zhì)地和營(yíng)養(yǎng)起著重要作用。淀粉和脂質(zhì)在加工過(guò)程中可形成淀粉-脂質(zhì)復(fù)合物[1]。淀粉-脂質(zhì)復(fù)合物具有較強(qiáng)的抗淀粉水解酶能力[2-4],因此最新研究把淀粉-脂質(zhì)復(fù)合物列為一種新型抗性淀粉(resistant starch,RS),即RS5[5-6]??剐缘矸劭梢员荒c道菌群發(fā)酵產(chǎn)生多種有益代謝產(chǎn)物如:短鏈脂肪酸(short-chain fatty acids,SCFAs)和乳酸等[7-9],降低腸道 pH 值,促進(jìn)有益菌生長(zhǎng),減少有害菌的滋生,在調(diào)節(jié)腸道平衡和改善機(jī)體健康方面發(fā)揮重要作用[10-12]。由于抗性淀粉對(duì)人體健康有諸多益處,因此提高食物中的RS含量是近年來(lái)食品科學(xué)領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)。前期的研究主要集中在熱加工方法制備RS的條件優(yōu)化或加工對(duì)RS的結(jié)構(gòu)和消化性影響等[13-16]。但是熱加工處理往往會(huì)誘導(dǎo)食品中熱不穩(wěn)定物質(zhì)發(fā)生若干化學(xué)和物理變化,從而破壞食品的顏色、風(fēng)味、口味、質(zhì)地,降低某些有效成分的含量及生物可利用性[17],因此在高級(jí)食品加工方面受到一定限制。與熱加工技術(shù)相比,非熱加工技術(shù)相對(duì)溫和,可以最大限度地降低食品加工過(guò)程中由熱引起的不利變化[18]。近年來(lái),隨著消費(fèi)者對(duì)高品質(zhì)食品的訴求越來(lái)越高,非熱加工技術(shù)逐漸成為食品加工技術(shù)領(lǐng)域研究的熱點(diǎn)。而關(guān)于食品的非熱加工在食品中淀粉-脂質(zhì)復(fù)合物的形成、性質(zhì)以及對(duì)食品的質(zhì)地和營(yíng)養(yǎng)價(jià)值的影響報(bào)道很少[19-23]。在眾多的非熱加工技術(shù)中,由于超高壓是目前一種研究最廣泛,商業(yè)化程度最高的非熱加工技術(shù)方法,可瞬時(shí)、均勻地作用于樣品。超高壓只對(duì)較弱的非共價(jià)鍵造成一定程度的破壞,因而,一些熱不穩(wěn)定物質(zhì)不會(huì)受到超高壓處理的影響,故對(duì)食品天然的感官品質(zhì)影響很小[24]。因此超高壓在食品加工技術(shù)領(lǐng)域越來(lái)越受到人們關(guān)注。
淀粉-脂質(zhì)復(fù)合物作為一種重要的抗性淀粉形式(RS5),與其它類(lèi)型抗性淀粉相比,具有自己獨(dú)特結(jié)構(gòu)和功能,可在實(shí)驗(yàn)室可控條件下制備,為研究超高壓對(duì)RS5的結(jié)構(gòu)和功能變化提供了一個(gè)良好的模型系統(tǒng)。因此,本研究的目的是探討不同壓力處理對(duì)RS5結(jié)構(gòu)和體外酶消化性影響。研究結(jié)果對(duì)進(jìn)一步了解食品非熱加工處理過(guò)程中RS5的結(jié)構(gòu)和功能變化,更好地控制食品加工過(guò)程中淀粉的消化具有重要意義。
高直鏈玉米淀粉VII(HA7,直鏈淀粉含量為68.70%):宜瑞安(Westchester,IL,USA)公司;普魯蘭酶(1498NPUN/mL)、月桂酸(C12:0,LA)、α-淀粉酶(13 U/mg):美國(guó) Sigma公司;GOPOD 試劑盒、淀粉轉(zhuǎn)葡糖苷酶(3260單位/mL):愛(ài)爾蘭Megazyme國(guó)際公司。所有試劑均為分析純。
HVE-50高壓滅菌鍋:日本hirayama公司;HPP.L2-600/0.6超高壓儀:華泰森淼生物工程技術(shù)股份有限公司;DSC200 F3差示掃描量熱儀:德國(guó)NETZCH公司;UV-180紫外分光光度計(jì):日本Shimadzu(島津)公司;D8Advance廣角X射線衍射儀:德國(guó)布魯克公司;inVia Reflex激光共聚焦拉曼光譜儀:英國(guó)雷尼紹公司;SHJ-A磁力攪拌水浴鍋:上海璽袁科技有限公司。
1.3.1 淀粉-脂質(zhì)復(fù)合物制備
淀粉-脂質(zhì)復(fù)合物的制備方法是參考QIN等[16]的方法。用0.2 mol/L醋酸鈉緩沖液(pH 5.0)把HA7配成10%淀粉懸浮液然后于高壓鍋中130℃下加熱60 min,使HA7充分凝膠化。將凝膠化的淀粉糊冷卻至60℃,加入普魯蘭酶(80 NPUN/g淀粉)攪拌12 h使其充分脫支。將脫分支之后的淀粉懸浮液于130℃下再一次加熱30 min,然后加入月桂酸,其添加量為淀粉干基10%,在90℃水浴鍋中攪拌復(fù)合1 h,將復(fù)合物攪拌冷卻至25℃。淀粉-脂質(zhì)復(fù)合物懸浮液2 000 g離心20 min,用50%乙醇洗滌3次。制備得到淀粉-脂質(zhì)復(fù)合物命名為DHA7-LA,冷凍干燥,研磨過(guò)100 μm篩,放在密閉容器中于4℃條件下儲(chǔ)存?zhèn)溆谩?/p>
1.3.2 淀粉-脂質(zhì)復(fù)合物超高壓處理
準(zhǔn)確稱(chēng)取2 g DHA7-LA放入聚丙烯袋中加6 mL蒸餾水使DHA7-LA與蒸餾水充分混合。然后用真空封口機(jī)密封,放在25℃下平衡2 h后將樣品放入超高壓設(shè)備中,分別在200、300、400、500 MPa的壓力條件下25℃處理10 min。處理后樣品立即用液氮速凍(命名為 200-LA、300-LA、400-LA 和 500-LA),隨后在真空冷凍干燥機(jī)里冷凍干燥,并研磨后過(guò)100 μm篩于4℃條件下儲(chǔ)存?zhèn)溆谩?/p>
1.3.3 差示掃描量熱法(differential scanning calorimetry,DSC)
利用差示掃描量熱儀和熱分析數(shù)據(jù)站對(duì)樣品的熱性能進(jìn)行測(cè)量。準(zhǔn)確稱(chēng)取復(fù)合物樣品3 mg放入鋁盤(pán)坩堝中,向鋁盤(pán)坩堝內(nèi)添加去離子水使水∶復(fù)合物的質(zhì)量比例達(dá)到3∶1。在DSC測(cè)量之前,將制備好的樣品于25℃下平衡過(guò)夜,然后樣品以10℃/min的升溫速率從20℃加熱至135℃。用空DSC鋁盤(pán)坩堝作為空白參比,用儀器自帶的熱分析軟件分析復(fù)合物的熱轉(zhuǎn)變溫度(起始凝膠化溫度To,峰值溫度Tp,終止溫度Tc)和凝膠化焓值變化(ΔH)。每個(gè)樣品至少重復(fù)3次[25]。
1.3.4 激光共聚焦顯微拉曼光譜
首先硅片校正儀器,然后將少量樣品用載玻片壓至緊實(shí)平整,在顯微鏡視野中選擇清晰界面進(jìn)行測(cè)試,激光光源為波長(zhǎng)785 nm。具體測(cè)試參數(shù):掃描范圍為 100 cm-1~3 200 cm-1,激光功率為 50%,分辨率為7 cm-1,每個(gè)樣品至少采集6個(gè)不同的點(diǎn),使用儀器自帶軟件WIRE 2.0處理樣品圖譜,并記錄半峰寬(full width at half-maximum,F(xiàn)WHM)數(shù)據(jù)[3]。
1.3.5 廣角X-射線衍射(X-ray diffraction,XRD)
復(fù)合物的相對(duì)結(jié)晶度是由X-射線衍射儀在40 kV和40 mA Cu-Kα輻射(λ=0.154 06 nm)條件下進(jìn)行檢測(cè)得到。首先樣品在含有飽和NaCl溶液的密閉容器中于25℃下平衡7 d后進(jìn)行分析。X-射線衍射光譜的掃描范圍從 4°~35°(2θ),掃描速率為 2°/min,步長(zhǎng)0.02°。用TOPAS 5.0軟件計(jì)算樣品的相對(duì)結(jié)晶度。
1.3.6 淀粉-脂質(zhì)復(fù)合物的體外酶消化測(cè)定
參考Wang等[26]的淀粉體外消化方法對(duì)樣品進(jìn)行了消化分析。具體操作方法如下:準(zhǔn)確稱(chēng)取樣品(100mg,干基)放入4.0 mL含有0.1 mmol/L乙酸鈉緩沖液(pH 5.2)中,然后加入1.0 mL新制備的含有1 645個(gè)單位的α-淀粉酶和41個(gè)單位的淀粉轉(zhuǎn)葡萄糖苷酶消化酶液,復(fù)合物/酶混合物放置于37℃磁力攪拌水浴鍋中260 r/min孵育2 h。每隔20 min取0.05 mL的水解產(chǎn)物,加入0.95 mL的95%乙醇混合,使消化酶失活,然后在13 000 r/min轉(zhuǎn)速下離心3 min。采用GOPOD試劑盒測(cè)定葡萄糖釋放量。水解指數(shù)(HI)用超高壓前后樣品的水解曲線下面積(0~120 min)與同一時(shí)期白面包對(duì)應(yīng)面積比值的百分比表示。然后采用Granfeldt等[27]提出的經(jīng)驗(yàn)計(jì)算公式估算復(fù)合物的血糖指數(shù)(eGI)值。
所有的分析都至少做了3個(gè)平行處理。數(shù)據(jù)結(jié)果的表示方法為平均值±標(biāo)準(zhǔn)偏差,對(duì)于XRD只做1次,采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)分析軟件對(duì)結(jié)果進(jìn)行單因素方差分析然后用 post-hoc Duncan’s多重比較分析(p<0.05)測(cè)定平均值之間的顯著差異。
超高壓處理前后的DHA7-LA的XRD衍射圖譜和結(jié)晶度見(jiàn)圖1和表1所示。
圖1 淀粉-脂質(zhì)復(fù)合物經(jīng)超高壓處理前后的X-射線衍射圖譜Fig.1 XRD patterns of starch-lipid complexes before and after HPP-treated
表1 拉曼和XRD檢測(cè)的淀粉-脂質(zhì)復(fù)合物的結(jié)構(gòu)特征Table 1 Structural characteristics of starch-lipid complexes determined by LCM-Raman and XRD
從圖1可以看出,DHA7-LA樣品在2θ為5.6°、7.5°、12.9°、16.9°、19.8°、22.6°具有明顯 XRD 衍射峰。DHA7和LA形成的復(fù)合物為典型V型晶體結(jié)構(gòu)在7.5°、12.9°、19.8°(2θ)處具有明顯 XRD 衍射峰,而5.6°、16.9°、22.6°(2θ) 處的 XRD 衍射峰表明存在淀粉回生的B型淀粉晶體結(jié)構(gòu)。
上述結(jié)果表明,所制備的復(fù)合物由B型和V型兩種晶體類(lèi)型組成。從圖1可以看出超高壓處理沒(méi)有改變X-射線衍射類(lèi)型,但是隨著壓力的逐漸增大,DHA7-LA的XRD衍射峰強(qiáng)度逐漸降低,結(jié)晶度從(33.8±0.5)%(DHA7-LA) 逐漸降低到(22.9±0.5)%(500-LA),衍射峰寬度逐漸增大,說(shuō)明超高壓處理能破壞其淀粉-脂質(zhì)復(fù)合物完美的晶體結(jié)構(gòu)(圖1和表1)。主要因?yàn)槌邏禾幚碛绊憦?fù)合物的單螺旋結(jié)晶結(jié)構(gòu),使水分子進(jìn)入淀粉顆粒內(nèi)部,使淀粉結(jié)晶區(qū)的螺旋結(jié)構(gòu)打開(kāi),導(dǎo)致結(jié)晶度降低[28]。
拉曼圖譜是表征淀粉-復(fù)合物短程有序性的重要手段,拉曼光譜中位于 480、865、940、1 264 cm-1的譜帶是與淀粉相關(guān)的典型譜帶,這些峰分別與淀粉的吡喃環(huán)的骨架振動(dòng)、CH2振動(dòng)、C-O-C的骨架振動(dòng)和CH2OH(側(cè)鏈)振動(dòng)有關(guān)[29-31]。淀粉-脂質(zhì)復(fù)合物經(jīng)超高壓處理后的拉曼圖譜見(jiàn)圖2。
由圖 2 可知,DHA7-LA 在 480、865、940、1 264 cm-1處有明顯峰出現(xiàn)。拉曼圖譜的480 cm-1處的半峰寬對(duì)淀粉短程有序性(即螺旋簇的排列)的變化敏感,F(xiàn)WHM值越小,表明淀粉短程分子有序結(jié)構(gòu)越高[32-33]。由圖2和表1可以看出,淀粉-脂質(zhì)復(fù)合物經(jīng)超高壓處理后半峰寬呈現(xiàn)變寬趨勢(shì)并且480 cm-1強(qiáng)度也在逐漸減弱,其中 480 cm-1半峰寬從(14.18±0.43)cm-1增加到(14.85±0.24)cm-1。說(shuō)明超高壓破壞了淀粉的短程有序結(jié)構(gòu)且隨著壓力的增加破壞程度逐漸增大,與前面的XRD結(jié)果相一致。
圖2 淀粉-脂質(zhì)復(fù)合物經(jīng)超高壓處理后的拉曼圖譜Fig.2 Raman spectra of starch-lipid complexes before and after HPP-treated
超高壓處理前后淀粉-脂質(zhì)復(fù)合物的DSC熱分析圖和相應(yīng)的熱轉(zhuǎn)變溫度(To、Tp和 Tc)及焓變化(ΔH)如表2所示。
DHA7-LA復(fù)合物有兩個(gè)吸熱轉(zhuǎn)變溫度,Tp1和Tp2分別為I型復(fù)合物和II型復(fù)合物的峰值溫度,分別為(95.5±0.3)℃和(113.4±0.3)℃。超高壓處理后Tp1和Tp2峰呈現(xiàn)增加的變化趨勢(shì),而總ΔH呈現(xiàn)先增加后減少的趨勢(shì),表明超高壓能夠顯著影響復(fù)合物組成和含量,從表2可以看出處理壓力為200 MPa就能使II型的淀粉-脂質(zhì)復(fù)合物向I型復(fù)合物轉(zhuǎn)變,到300 MPa時(shí)II型復(fù)合物焓值顯著減少?gòu)模?.2±0.1)J/g降低到(2.6±0.8)J/g,I型復(fù)合物焓值由(0.6±0.1)J/g增加到(5.1±0.8)J/g,但是200 MPa~300 MPa處理時(shí)復(fù)合物總焓值并沒(méi)有減少,說(shuō)明復(fù)合物類(lèi)型遭到改變,但是復(fù)合物總量并沒(méi)有減少,隨著壓力進(jìn)一步升高復(fù)合物總焓值逐漸降低,其中在400 MPa處理后復(fù)合物總焓值為5.6 J/g,在500 MPa未檢測(cè)到II型復(fù)合物熔融峰,復(fù)合物總量也最低為(3.4±0.6)J/g,表明超高壓能有效破壞淀粉-脂質(zhì)復(fù)合物結(jié)構(gòu)且隨著壓力的升高破壞能力逐漸增強(qiáng)。隨壓力升高,I型復(fù)合物和II型復(fù)合物相轉(zhuǎn)變溫度逐漸升高,其中凝膠化峰值溫度Tp1由(95.5±0.3)℃升高到(97.9±0.5)℃,Tp2由(113.4±0.3)℃升高到(120.2±0.4)℃。另外凝膠化起始溫度和凝膠化終止溫度也都有一定提高。凝膠化轉(zhuǎn)變溫度升高可能是:(1)由于超高壓處理后DHA7-LA樣品中較不穩(wěn)定的復(fù)合物晶體結(jié)構(gòu)熔融,留下更穩(wěn)定的殘余晶體,從而導(dǎo)致更高的熔融溫度[34-35];(2)超高壓處理壓力或退火過(guò)程中能使一部分IIa型復(fù)合物向結(jié)構(gòu)更穩(wěn)定,熔融溫度更高的IIb型晶體結(jié)構(gòu)轉(zhuǎn)變;(3)超高壓作用下,淀粉晶體結(jié)構(gòu)的破壞導(dǎo)致無(wú)定形區(qū)域的增加可能阻礙了水的吸收和淀粉溶脹,從而減緩了淀粉-脂質(zhì)復(fù)合物粉晶體的熔融[36]。
表2 超高壓處理前后淀粉-脂質(zhì)復(fù)合物的熱力學(xué)參數(shù)表Table 2 Thermal properties of starch-lipid complexes before and after HPP-treated
淀粉-脂質(zhì)復(fù)合物樣品的體外酶消化圖譜如圖3所示。所有樣品均表現(xiàn)出初始階段消化速度快,約60 min后消化速度就趨于平穩(wěn)。對(duì)超高壓處理前后淀粉-脂質(zhì)復(fù)合物的快消化淀粉、慢消化淀粉、抗性淀粉和評(píng)估血糖指數(shù)進(jìn)行計(jì)算結(jié)果見(jiàn)表3。
圖3 淀粉-脂質(zhì)復(fù)合物經(jīng)超高壓處理前后的體外消化圖譜Fig.3 In vitro starch digestograms of starch-lipid complexes before and after HPP-treated
表3 超高壓處理前后淀粉-脂質(zhì)復(fù)合物體外消化性和評(píng)估血糖指數(shù)Table 3 In vitro digestibility and estimated glycemic index of starch-lipid complexes before and after HPP-treated
從表3可以看出DHA7-LA復(fù)合物的最終消化率為 54.0%,評(píng)估血糖值數(shù)(eGI)為 56.4±0.6,淀粉-脂質(zhì)復(fù)合物為中eGI食物[37]。超高壓提高DHA7-LA的消化性,主要因?yàn)槌邏禾幚碛绊懥薉HA7-LA復(fù)合物的結(jié)晶結(jié)構(gòu)類(lèi)型,破壞復(fù)合物的長(zhǎng)程-短程有序性,導(dǎo)致DHA7-LA復(fù)合物結(jié)構(gòu)變得疏松,更易于與淀粉酶接觸發(fā)生水解,另外淀粉-脂質(zhì)復(fù)合物含量降低,所以RDS含量呈現(xiàn)上升趨勢(shì),RS含量呈下降趨勢(shì)。
本文研究了一種重要的非熱加工方式——超高壓對(duì)DHA7-LA處理后結(jié)構(gòu)和體外消化性的影響。研究結(jié)果顯示,DHA7-LA為V型晶體和B型晶體混合物,超高壓處理后的DHA7-LA晶體類(lèi)型未發(fā)生明顯變化,但是結(jié)晶度顯著減少,XRD衍射峰明顯變寬完美晶體結(jié)構(gòu)遭到破壞,短程分子有序性變差,復(fù)合物類(lèi)型由II型轉(zhuǎn)變成I型直至消失。同時(shí)超高壓處理后RDS升高,RS含量下降,eGI升高。結(jié)果表明超高壓處理能對(duì)新型抗性淀粉(RS5)結(jié)構(gòu)和體外消化性造成顯著影響,研究結(jié)果對(duì)于深入理解抗性淀粉在超高壓加工過(guò)程中的變化具有重要的理論和實(shí)踐意義。